MC38-FLUC-puro小鼠结肠癌细胞皮下成瘤验证

发布时间：2025-09-28 09:18:15 细胞资源库平台访问量：101

小鼠结肠癌细胞系(如MC38、CT26)是研究结肠癌生物学特性及治疗策略的重要工具，其遗传背景明确、增殖稳定且易于在免疫健全或缺陷小鼠中成瘤。构建结肠癌动物模型的重要性在于能够模拟人类结肠癌的发生发展过程，包括肿瘤生长、侵袭、转移及肿瘤微环境演变，从而为揭示疾病机制、评估新型疗法(如化疗药物、免疫治疗或靶向治疗)的有效性与安全性提供关键平台。此类模型不仅加速了临床前药物筛选，还为个体化治疗策略的开发提供了不可替代的实验基础，最终推动结肠癌治疗领域的转化医学进展。

细胞简介

细胞名称：MC38-FLUC-puro小鼠结肠癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：结肠

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：Luciferase MC38细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是一种常用的小鼠结肠腺癌细胞系，其背景源于C57BL/6小鼠。该细胞系并非通过基因工程改造获得，而是在1970年代通过化学致癌剂1,2-二甲基肼(1,2-Dimethylhydrazine, DMH) 诱导C57BL/6小鼠体内产生结肠癌后，从其肿瘤组织中分离并建立而成的。因此，MC38细胞保留了完整的自体免疫背景，当其接种于同系的、免疫系统健全的C57BL/6小鼠时，不会引发免疫排斥，能够成功形成肿瘤。这一特性使得MC38模型成为研究肿瘤免疫、评估免疫治疗(如免疫检查点抑制剂、癌症疫苗等)疗效的“金标准”工具之一。相较于另一常用细胞系CT26(源自BALB/c小鼠，由致癌病毒诱导)，MC38的肿瘤突变负荷较高，能表达更多的新抗原，从而更能模拟某些对免疫治疗敏感的人类结直肠癌特征。

puro药筛浓度：MC38-FLUC-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

MC38-FLUC-puro细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种方式	推荐接种密度(细胞数/只)	接种部位	成瘤特性&优点	缺点&注意事项	适用研究目的	预计可检测时间(接种后)
皮下接种	5×10⁵-1×10⁶	小鼠背部或侧腹皮下	成瘤率高(近100%),生长稳定，体积测量方便，操作简单，对小鼠负担相对较小。	通常不发生自发转移，肿瘤微环境与原位癌有差异。	常规药效评估(化疗、靶向、免疫治疗),肿瘤生长动力学研究，取材方便。	3-5天(成像),7-10天(游标卡尺测量)
盲肠原位接种	1×10⁵-2×10⁵	开腹手术植入盲肠壁	最具临床相关性，模拟人类结肠癌原位生长、侵袭和转移过程(常转移至肝、腹腔淋巴节)。	技术难度高，需显微外科手术，操作时间长，易发腹腔感染，对小鼠创伤大，成本高。	肿瘤转移机制研究，肿瘤微环境互作，更精准的药效评估模型。	5-7天(成像监测原位灶),2-3周(转移灶)
脾内注射	1×10⁵-5×10⁵	开腹注射入脾脏	主要用于建立特异性肝转移模型。细胞经脾静脉-门静脉系统到达肝脏定植，形成肝转移灶。	为研究肝转移而非原发灶。需外科手术，技术难度高，可能因操作导致细胞泄漏至腹腔。	结肠癌肝转移的机制与治疗研究。	7-14天(成像监测肝转移灶 )
尾静脉注射	2×10⁵-5×10⁵	尾静脉	主要用于建立实验性肺转移模型。细胞通过循环系统在肺部毛细血管滤过并形成克隆。	形成的是转移灶，而非原发肿瘤。模型侵袭性强，小鼠负荷大，需密切监控。	肿瘤细胞血行扩散能力评估，抗转移药物筛选。	7-14天(成像监测肺转移灶 )
腹腔接种	5×10⁵-1×10⁶	腹腔	形成腹水瘤或腹膜种植瘤，生长快速。	模型侵袭性极强，容易形成癌性腹水，动物状态恶化快，伦理要求高。	腹膜转移研究，腹水瘤相关实验。	3-5天(成像监测)

同类细胞系成瘤差异(仅供参考)

产品货号	IM-M006	IM-M007
特性	MC38	CT26
来源	C57BL/6小鼠，化学诱导(DMH)	BALB/c小鼠，化学诱导(N-nitroso-N-methylurethane)
遗传背景	同系(Syngeneic)C57BL/6小鼠	同系(Syngeneic)BALB/c小鼠
免疫环境	免疫健全，可用于免疫治疗研究	免疫健全，可用于免疫治疗研究
肿瘤突变负荷(TMB)	高	中
新抗原负荷	高，对免疫治疗(如抗PD-1/PD-L1)反应强烈	中，对免疫治疗有反应但较弱
皮下成瘤性	稳定，生长速度中等	稳定，生长速度较快
自发转移倾向	皮下模型低，原位模型可引发高频率肝转移	皮下模型低，转移模型需人工诱导
主要应用	免疫疗法评估(响应好)、机制研究、转移模型	通用肿瘤学、化疗/靶向治疗筛选、免疫治疗(需强效剂)
核心优势	高免疫原性，是检查点抑制剂研究的标杆模型	生长快速，在BALB/c背景上成瘤稳健

MC38-FLUC-puro成瘤关键影响因素

影响因素类别	具体因素	对成瘤的影响	优化策略
细胞状态与质量	细胞代数	高代次细胞(如>20代)可能发生遗传漂变，导致成瘤性减弱或丧失。	使用低代次细胞(通常推荐第5-15代)进行动物接种，并定期从冻存原代细胞复苏。
	细胞活力	活力低于90%会导致接种后大量细胞死亡，炎症反应加剧，成瘤延迟甚至失败。	接种前进行台盼蓝染色计数，确保细胞活力>90%。全程在冰上操作以维持活力。
	报告基因稳定性	在不使用嘌呤霉素维持的情况下，puro抗性及FLUC基因可能丢失，导致信号减弱或检测失败。	体外培养时，定期使用嘌呤霉素(1-2μg/mL)进行加压筛选，以维持报告基因的稳定表达。
	支原体污染	污染会显著影响细胞状态和体内行为，导致成瘤结果不可靠、不一致。	接种前务必进行支原体检测，确保使用无污染的细胞。
宿主与动物模型	小鼠品系	MC38细胞源于C57BL/6小鼠，仅在该品系或其衍生的免疫缺陷鼠上才能成功成瘤	必须使用C57BL/6背景小鼠(如野生型C57BL/6、NSGT""-C57BL/6等)。
	小鼠年龄与体重	年龄过大(>12周)或过小(<6周),免疫系统状态不同，会影响肿瘤生长速度和治疗反应。	使用周龄一致(通常6-8周)、健康活泼的小鼠，同一实验组内体重差异不宜过大。
	免疫状态	在免疫健全鼠中可用于免疫治疗研究；在免疫缺陷鼠中肿瘤生长更快，可用于接种效率研究或避免免疫清除。	明确实验目的：研究免疫选健全鼠；仅研究肿瘤细胞本身或进行接种测试可选免疫缺陷鼠。
接种操作技术	细胞重悬液	使用含血清或Ca²+/Mg²的缓冲液可能引起细胞聚集或局部反应。	使用预冷的无Ca²+/Mg²+PBS或基础培养基(如DMEM)重悬细胞。
	接种体积	皮下接种体积过大(如>200μL)可能导致液体泄漏、压力性坏死或瘤块生长不均。	优化接种体积：皮下注射推荐100-200μL,尾静脉注射推荐100-200μL。
	接种部位	皮下接种部位(背部vs侧腹)可能因皮肤活动度不同影响肿瘤生长。	统一接种于小鼠右侧或左侧后腹侧部，避开腺体和肩胛等高频活动区域。
	操作熟练度	粗暴操作(尤其是原位和脾内注射)会导致创伤大、细胞泄漏，影响成瘤率和动物福利。	由经验丰富的操作员执行，或事先进行充分的模拟训练。
实验设计与监测	接种细胞数	细胞数过低不成瘤，过高则生长过快，可能导致动物过早死亡，无法观察实验终点	进行预实验确定最佳细胞数(皮下：5×10⁵-1×10⁸/只；原位：1-2×10⁵/只；尾静脉：2×10⁵/只 ) 。
	监测频率	频繁的物理测量或成像麻醉可能干扰肿瘤生长或影响动物状态。	制定合理的监测计划(如每周2-3次测量或成像),避免过度惊扰动物。
	动物福利与伦理	肿瘤负荷过大会导致动物痛苦，违反伦理准则，也可能影响实验结果。	设定人道终点(如肿瘤体积≤2000mm³),及时对达到终点的动物实施安乐死。