常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
发布时间:2022-05-10 09:01:42 细胞资源库平台
细胞换液是指去除旧的培养基,换成新的完全培养基以继续提供细胞充足的营养支持。当旧培养基 ph 值改变(含酚红的培养基通常是变酸发黄)时,需要及时进行换液。在培养细胞的过程中,换液是一项非常常规操作,它主要是为了清除细胞在生长过程中产生的各种代谢废物,补充新鲜的培养基,促进细胞生长。细胞换液主要有全换液和半换液两种方式,那么,不同方式的换液方法如何更换细胞培养瓶内的溶液呢?
环境准备:相对密封、防尘、防菌的无菌室
操作者准备:双手清洁呈可操作状态
物品准备:超净工作台、CO2培养箱、装有75%医用消毒酒精的酒精喷壶、PBS缓冲液、含血清培养基、巴氏吸管、移液器、废液缸。
工作准备:预热完全培养基,酒精棉擦拭培养基瓶外表面后移入生物安全柜/超净工作台。
细胞培养箱中取出的细胞,酒精棉擦拭培养瓶/皿外表面,移入生物安全柜/超净工作台。可以稍等待,待生物安全柜中的循环风将试剂瓶和培养瓶的外表面吹拂几分钟后,拧开培养基瓶盖虚掩,拧开培养瓶瓶盖虚掩,培养皿盖不用拧。
如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜完全培养基。
细胞全换液具体步骤
1.将器材放入超净台,打开紫外照射灭菌,若是培养的细胞对温度比较敏感,可以将含血清的培养基瓶放入37℃的水浴箱使得培养基温度在37℃,再转移到超净台紫外灭菌。另外,细胞培养间也需要紫外照射半小时左右。
2.从培养箱取出细胞培养瓶,用酒精喷壶在瓶子表面喷洒75%酒精消毒,转移到超净台,打开盖子,轻轻吸出旧的培养液,可用移液器加入新鲜含血清培养基,注意一定不要从细胞贴壁面加入培养基,应从侧壁加,动作轻柔,以免冲落细胞。
3.加好培养基后,盖上盖子,在瓶子上做标记,注明换液时间,细胞种类,操作人员等信息。
4.放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷瓶子表面,然后应记得整理操作台,用酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。
“细胞半换液”又称“细胞半量换液”,即弃掉一半旧的培养基,再加一半新的进去。选它的原因其实与前面不加PBS的理由有点相近。
半换液原因
1.给细胞提供适应的缓冲环境;
2.细胞生长过程中可能会分泌某些生长因子,促进生长;
3.节省材料
4.方便操作:比如96孔板,换液很麻烦。所以常采用排枪进行半换液;
5.对于悬浮细胞的培养,有时也会选用半换液减低细胞密度;
细胞半换液操作步骤
如果是悬浮细胞,可以用半量换液法。
1.即吸去一半旧培养基
2.补充新鲜完全培养基(会损失一半细胞)。
悬浮细胞如果不想损失细胞,那就需要将培养物转移到离心管中,离心去除旧培养基,再用新培养基重悬细胞沉淀。
1.细胞换液是否需要用PBS清洗?
我们知道,在“贴壁细胞传代”中,培养基中的血清会抑制胰酶的活性,影响消化的效果,所以必须要PBS 的清洗。
但对于细胞换液,尚未查到有资料明确说明是否需要PBS清洗。
这里应该根据细胞的具体情况考虑
a.若细胞比较“娇气”或生长状态不是特别好时,建议还是不要用PBS清洗。一方面,细胞贴壁的状态可能不是很牢固,PBS的冲洗会破坏细胞的贴壁状态;另一方面,PBS可能会洗掉细胞分泌的一些生长因子,这同样不利于细胞状态的调整。如果一定要洗,可以缓慢清洗,减少对细胞的伤害
b.当细胞生长状态不错,或者显微镜下观察细胞液中不是很干净时,可以选择用PBS清洗。一方面可以去除积累的代谢物;另一方面,也可将一些生长状态不好或衰老的细胞洗脱下来,保持细胞活力。
1.在进行换液操作时,全程注意无菌,操作人员要穿好灭菌服,戴好灭菌手套和口罩,手接触到细胞培养瓶瓶口时一定要小心,避免造成污染。
2.加培养液时,不可直接加到细胞贴壁的面上。
3.换液前记得观察细胞的状态及拍照记录
不光细胞维持培养时需要进行细胞换液,一些实验操作也需要进行细胞换液。当换液操作是实验需要时,可能在添加新的培养基前需要 PBS 清洗细胞以去除旧培养基的影响, 新添加的培养基也可根据实验需求进行特殊配制,不一定是完全培养基。
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
细胞聚团的原因分析及如何避免:培养物中细胞可能聚集的一些原因包括:1.过度消化、2.环境压力、3.组织分解、4.过度生长、5.污染等;如何避免聚团细胞的生成;首先确认当前细胞生长密度及状态,80%左右的生长密度即可进行······
细胞有空泡原因分析及解决方法:出现细胞空泡情况有1.细胞老化2.培养液错误配制;3.细胞消化时操作不当;4.污染等等,如细胞老化,解决方法,原代细胞使用较低代次进行实验,传代细胞避免传代次数过高···
细胞半换液和全换液操作步骤:第一种方式:细胞全换液;如果是贴壁细胞,可以用全量换液法,直接吸去全部旧培养基,补充足量新鲜完全培养基;第二种方式:细胞半换液;"细胞半换液"又称"细胞半量换液",即弃掉一半旧的培养基,再······
细胞生长缓慢的可能原因有哪些:细胞培养外部因素包括细胞培养基的配方和质量问题,培养条件不理想,污染问题,细胞自身因素包含细胞的健康状态,细胞密度过高或过低,细胞老化现象,细胞特性,当细胞生长出现缓慢的问题时,我······
常用胰腺癌细胞株动物模型及胰腺癌细胞株有哪些:胰腺癌研究中常用的动物模型主要包括化学物质诱导胰腺癌动物模型,基因工程胰腺癌小鼠模型和胰腺癌移植模型,常用的胰腺细胞株MIA-PACA-2人胰腺癌细胞,Capan-2人胰腺癌细······
产品规格:1*10^6
¥3000
产品规格:1*10^6
¥3000
产品规格:1*10^6
¥3000
产品规格:1*10^6
¥3000