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ATCC细胞培养
细胞系错误鉴定问题已有50年历史,基于国际细胞库的分析数据显示:1984年细胞错误鉴定率为35%,1999年为18%,直到最近几年,应用于生物医学领域的细胞系需要鉴定的问题仍然很少有人关注。
近年来,大量研究表明 STR 基因分型 方法是进行细胞交叉污染和性质鉴定的最有效和准确的方法之一,STR基因分型应用于细胞鉴定已被ATCC等机构强烈推荐。美国的ATCC 细胞库、德国的DSMZ细胞库以及日本的JCRB细胞库等为STR 分型提供了各细胞株的数据供比对。
STR ( Short Tandem Repeat, 短串联重复序列)基因分型技术是细胞身份鉴定最准确有效的方法,被ATCC、ICLAC等权威机构认定为细胞鉴定的金标准。STR基因位点由长度为3~ 7个碱基对的短串连重复序列组成,广泛存在于人类基因组中,被称为细胞的DNA指纹。通过对这些STR位点的检测,将检查结果与专业的STR数据库比对,从而确定被测细胞的真实身份,或判断被测细胞是否与某些细胞,发生交叉污染。
人源细胞STR分型(cell line STR genotyping),是选用D19S433、D5S818、D21S11、D18S51、D6S1043、D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、PentaD、vWA、D8S1179、TPOX、PentaE、TH01、D12S391、D2S1338和FGA等19个具有高度多态性基因座和一个性别基因位点Amelogenin对人源细胞进行STR分型检测。根据STR分型结果对细胞的生长状态(是否存在交叉污染)和细胞的株系进行确认的技术手段。
D5S818 D13S317 D7S820 D16S539 VWA
TH01 AMEL TPOX CSF1PO D12S391
FGA D2S1338 D21S11 D18S51 D8S1179
D3S1358 D6S1043 PENTAE D19S433 PENTAD
细胞系错误鉴定所造成的后果
细胞系的损失
时间和金钱的损失
在公众领域(文献、专利等)提供错误信息
造成实验结果不一致或不可重复
何时需做细胞STR鉴定
发表文章或申请课题经费前
使用细胞进行临床治疗(试验)前
准备冻存保种或已冻存多年的细胞
一个涉及到细胞试验项目开始/结束时
新得到的细胞或实验室传5代以上的细胞
细胞系表现不稳定或结果与预期差别较大
文章发表或常规定期鉴定
周期报价
周期:1 周
报价:800 元/样
1.确定STR位点,设计实验方案,包括荧光标记的选择,引物的设计、合成和标记,荧光分子量内标的选用等。
2.按照所设计的实验方案完成荧光PCR,利用琼脂糖电泳检测结果;若PCR产物特异性不够,将进行优化。
3.PCR产物通过ABI 3730XL测序仪器进行毛细管电泳检测,获得扩增片段大小的数据
4.用GeneScan 3.0/GenoTyper 2.0或GeneMapper 3.2等软件对收集到的数据进行处理分析,将产物片段大小、数量多少的信息转化成直观准确的波形图谱,为下一步进行关联分析或连锁分析等遗传分析提供可靠的数据。
细胞收集,基因组DNA提取
荧光弓|物PCR扩增21个str位点
产物经测序仪电泳,获得细胞基因分型结果
结果与ATCC、DSMZ、JCRB和RIKEN等细胞库比对和分析
1. PCR产物或基因组DNA:浓度≥200ng/ul,总体积≥20ul,OD260/280在1.7至2.0之间;新鲜组织样品:总量≥100mg的新鲜组织样品或1~2ml血液样品
2. PCR产物或基因组DNA请提供样品的电泳检测图
3. 由于在实验过程中,可能会出现某些STR位点难以检测的情况,建议提供3~4个备选STR位点
4. 建议使用6FAM, VIC, NED以及PET四种荧光标记
5. 为尽量避免多种荧光信号的相互干扰,不建议同管检测使用的荧光多于2种,多种荧光同管检测,PCR产物大小需相差50bp以上
6. STR检测中常会出现一些比正常产物短2~4个碱基的峰,这是由截断PCR造成的,属于正常现象,并不会影响实验结果的分析。
您的细胞系认证服务 STR 概况报告包含
简单易懂的STR等位基因表
支持每个位点的等位基因调用的电泳图
结果的综合解释
STR 分型图谱和细胞鉴定结果的书面报告 (中英文报告)
通用荧光引物,大幅降低3730实验成本
提供21个str位点选择,极大提高鉴定的分辨率
数据分析基于3730测序平台,结果稳定可靠
可提供英文报告,用于文章发表
实验周期短,价格优惠,售后服务完善
以PLC/PRF/5细胞为例,进行STR鉴定
人源细胞STR位点信息
STR分型图谱
STR检测结果
STR分析已广泛应用于遗传制图、连锁性分析、亲子鉴定、疾病基因定位和物种多态性研究等诸多领域。高度多态的微卫星还可以用来在人群进行个体识别。刑事案件的侦破离不开法医学的帮助,其中Y-STR检测手段在鉴定中发挥的作用尤为突出。
Y-STR检验是法医学对精子的一种DNA检测手段,Y-STR基因座是位于男性Y染色体上的人类多态性STR位点,一般情况下,只有男性个体才有Y染色体,因此,Y-S T R具有男性遗传,男性特异性的特点。Y-S T R即可作为性别鉴定的依据,同时在法医学精斑及混合斑检验中发挥着重要作用。Y染色体为男性个体特有且呈现男性伴性遗传,Y-STR检测技术可以对嫌疑人或被害人的身份认定进行有效确认,故作为一种补充检验技术,此项技术在个体识别、亲子鉴定、血缘关系鉴定及族谱DNA分析等方面具有十分重要的研究和应用价值。