HT-29人结肠癌细胞（STR鉴定报告）

背景简介

HT-29细胞系由J.Fogh在1964年用移植培养方法和含15%FBS的F12培养液从原发性肿瘤分离。近来，已建株的培养细胞用含血清McCoy’s 5A培液培养。该细胞系在裸鼠中致瘤，也能在类固醇处理的地鼠中致瘤。

一、细胞基本属性
细胞名称	HT-29人结肠癌细胞（STR鉴定报告）
细胞别称	HT 29; HT29；HT-29；人结肠癌细胞
种属来源	人
年龄性别	女；44岁
组织来源	结肠
生长特性	贴壁生长
细胞形态	上皮细胞样
细胞代数	10代以内
特别注意	ht29细胞贴壁及展开较慢，24h后有部分细胞依然有一部分细胞未展开贴壁属于正常现象，最好传代后24- 48h内尽量不要移动
STR位点	Amelogenin：X；CSF1PO：11，12；D13S317：11，12；D16S539：11，12；D18S51：13；D19S433：14；D21S11：29，30；D2S1338：19，23；D3S1358：15，16.3；D5S818：11，12；D7S820：10；D8S1179：10，16；FGA：20，22；TH01：6，9；TPOX：8，9；vWA：17，19；
STR鉴定位点图
生物安全等级	1
使用权限	A类
染色体	64~69
倍增时间	~36-60 hours
致瘤性	Yes, in nude mice; forms well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade I); tumors also form in steroid treated hamsters.
受体表达情况	human adrenergic alpha2A, urokinase receptor (u-PAR), vitamin D (moderate expression), urokinase receptor (u-PAR); vitamin D (moderate expression), human adrenergic alpha2A
基因表达情况	secretory component of IgA; carcinoembryonic antigen (CEA); transforming growth factor beta binding protein; mucin, myc+; ras+; myb+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, Blood Type A; Rh+; HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, HT-29 cells are negative for CD4, but there is cell surface expression of galactose ceramide (a possible alternative receptor for HIV).
细胞规格	1×106cells/T25培养瓶或者1mL冻存管包装
支原体检测	无
保藏机构	ATCC; HTB-38 BCRJ; 0111 CCLV; CCLV-RIE 0960 DSMZ; ACC-299 ECACC; 91072201；中国典型培养物保藏中心细胞库
培养基	90%5A+10% FBS+PS
培养条件	气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃
冻存条件	无血清冻存液，液氮储存
细胞货期	现货，1周左右
运输方式	复苏发货（T25瓶免运输费用）/ 冻存发货（需加干冰运输费用） 顺丰快递
供应限制	仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
特别说明	以下细胞培养冻存处理仅供参考，具体操作步骤以随货产品说明书为主
二、细胞培养操作
到货方式	复苏细胞/T25瓶运输
收货处理	1.收到细胞后，请检查发货培养瓶的状况，是否有破损、漏液、浑浊等现象。如果有，请立即和我们联系；如果没有，请您用75%酒精消毒细胞瓶外壁，再将其置于37度培养箱静置4h。 2.静置后观察细胞状态，在显微镜下确认细胞生长状态时，最好在低倍镜（4或5X物镜）下进行，能准确判断细胞的传代密度。看细胞的形态请在10X和20X物镜下，同时给刚收到的细胞拍照，（10×，20×）各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存，作为细胞需要售后时提供收到细胞时细胞状态的依据。拍照反馈给我们。
传代密度	细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养
传代方法	1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。 2.加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，使消化液浸润所有细胞，弃去消化液，将培养瓶置于37℃培养箱中消化1 min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。 3.按6-8 mL/瓶补加培养基，轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000 rpm离心4 min，弃去上清液，补加1-2 mL培养液后吹匀。 4.将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，置于培养箱中培养。
到货方式	冻存细胞/1ml冻存管运输
收货处理	1.干冰运输的细胞到货，请检查干冰是否完全挥发，细胞是否解冻，若有上述现象发生请及时和我们联系。 2.为保证细胞的高存活率，收到产品后，请立即解冻复苏细胞，如若不能复苏请立即转入液氮冻存。
培养皿/瓶	一管细胞建议接种到6cm培养皿或者T25瓶
复苏操作	1.将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加4 mL培养基混合均匀。 2.在1000 rpm条件下离心3 min，弃去上清液，加1-2 mL培养基后吹匀。 3.然后将所有细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6 cm皿中，加入约4 mL培养基，培养过夜）。 4.第二天换液并检查细胞密度。
注意事项	1.运输用的培养基（灌液培养基）不能再用来培养细胞，请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。 2.因运输问题，部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞死亡破碎形成碎片，是正常现象。请及时和我们联系，告知细胞的具体情况，以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。 3. 冻存细胞发货2管，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。 4. 申请售后时请提供细胞收货时及反馈售后当天细胞清晰照片及培养信息，建议客户在细胞传代培养后，定期拍照、记录细胞生长状态。 5.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。 6. 细胞在不同实验室培养由于所使用培养基及血清品牌、个人操作习惯、培养瓶品牌等诸多培养条件不尽相同，导致细胞培养形态、生长速度、贴壁情况均可能有所差异，对于此类细胞适应环境生长的行为，不予过度解释或免费售后。
HT-29人结肠癌细胞培养常见问题
1.HT-29细胞特点 a.随着贴壁时间延长，细胞形态有很大变化，从刚开始的亮亮圆圆的单颗细胞，到呈片生长的上皮样。 b.ht29细胞贴壁48h后呈岛状聚集生长，当ht29细胞密度较大时，不易消化并易成团。所以控制消化时间尤为重要，消化时间过短，细胞不易从瓶壁脱落，吹打过度，导致细胞碎裂，碎片过多；消化过度，导致细胞传代后漂浮增多。 2.如何养好HT29细胞 a..降低传代密度，当ht29细胞融合度70%-75%左右就可进行传代。 b.传代后24-48小时内不要移动。 c.消化时，不要反复晃动培养瓶或培养皿，可培养箱内静置消化，否则细胞会呈屑样脱落，不利于消化成单颗细胞。 d.ht29细胞生长时，会有少量漂浮细胞碎片，背景可见少量黑点，是正常现象，不要过度清洗，随着换液和传达可暂时改善，但继续培养无法避免。
三、细胞冻存操作
冻存液配方	无血清冻存液，液氮储存
冻存密度	如果是有要求每管要冻多少细胞，那就用1ml完培重悬后，取部分按平时方法计数，剩下的细胞按计数需要的细胞量冻存即可。 如果没要求，那就按平时，一个皿冻一管。
冻存方法	待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为例 1.收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，加1 mL血清重悬细胞，进行细胞计数。 2.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。 3.将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
注意事项	冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案

参考文献

ATF3 inhibits the growth and stem cells-like features of SW620 colorectal cancer cells in vitro. Journal of Men's Health. 2021. 17(4);287-294.

作者：Chuanqian Huang, Changdan Chen, Fangjing Zheng, Xiaoxiao Ni, Jianfang Lin, Wenjuan Wu, Xiaolan Lai.

细胞：The human colon cell line NCM460 and the CRC cell lines SW620, SW480, HT29, HCT8, and HCT116.

2022年影响因子/JCR分区：0.789/Q4

Long Intergenic Noncoding RNA 00641 Promotes Growth and Invasion of Colorectal Cancer through Regulating miR-450b-5p/GOLPH3 Axis. J Oncol. 2022 Jun 15;2022:8259135. doi: 10.1155/2022/8259135. PMID: 35756081; PMCID: PMC9217543.

作者：Hong Z, Pan J, Chen M, Deng X, Chen Z, Wang C, Qiu C.

细胞：Primary CRC cell lines (SW480, HT-29, and HCT-116), metastatic CRC cell line SW620, NCM460 normal colon mucosal epithelial cell line, and 293T cell line

2022年影响因子/JCR分区：4.501/Q2