第四节:贴壁细胞传代步骤

本视频为厦门逸漠生物科技有限公司出品关于贴壁细胞传代培养步骤操作指南，我们对每一步操作都做了演示，以便实验者更好地理解贴壁细胞传代实验过程。

贴壁细胞传代实验准备

提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面

贴壁细胞传代所需试剂物品

细胞培养液，胰酶，PBS，培养皿等

贴壁细胞传代步骤

从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到80%以上时，即可进行传代；

第一步：将细胞培养皿放入超净工作台中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS；

第二步：轻洗细胞表面，洗去表面培养基，再将PBS弃去；

第三步：加入2ml胰酶，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否脱落；

第四步：加入3ml完全培养基终止消化，将细胞吹散，移入15ml离心机管中，1000rpm，离心5min；

第五步：取两个新的培养皿，各加入8-10m1完全培养基，在培养皿上标记细胞名称，日期和所用培养基名称；

第六步：离心结束后，用75%的酒精喷管身后，放回工作台中，吸去上清；

第七步：取2ml完全培养基重悬细胞，平均分配到2个皿中，“8字法”摇匀后，镜检是否铺匀；

第八步：把培养皿放入C02培养箱中培养，第二天观察贴壁情况；

注意事项

1.培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议；

2.消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min。

3.培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2-3天换液一次。