ID8-FLUC-puro小鼠卵巢上皮癌细胞皮下成瘤验证

5×10⁶~1×10⁷细胞/只

(悬浮于100-200μLPBS/Matrigel混合液)

5×10⁶~1×10细胞/只

(悬浮于500μL PBS)

1×10⁵~5×10⁵细胞/侧卵巢

(悬浮于10-20μLPBS/Matrigel混合液)

2×10⁵~5×10⁵细胞/只

(悬浮于100-200μL PBS)

1.游标卡尺测量

2.活体成像(BLI)

1.活体成像(BLI)(监测全身肿瘤负荷)

2.腹水量测量

1.活体成像(BLI)(精准定位卵巢原发灶)

2.解剖及组织学分析

1.活体成像(BLI)(定量肺部信号)

2.肺部组织学切片(计数结节)

· 快速评估体内肿瘤增殖

· 药物初步筛选与疗效评价(给药方便)

· 晚期卵巢癌腹腔转移及腹水研究

· 评估药物对弥漫性病灶的效果

· 卵巢癌发生、发展及转移的自然病程与机制研究

· 肿瘤与微环境相互作用

· 卵巢癌血行性肺转移研究

· 评估药物抗远处转移功效

1.快速复苏：操作轻柔，使用预温培养基。

2.高密度培养：维持细胞处于对数生长期，避免过度汇合。

3.正确消化：使用Trypsin-EDTA消化，及时中和，避免长时间作用。

1.使用低代次细胞：冻存大量低代次(如5-15代)细胞库供整个研究使用。

2.定期复苏：避免连续传代，定期从冻存库中复苏新细胞。

1.定期检测：每1-2个月用PCR或荧光法进行支原体检测。

2.使用清洁细胞：从源头上确保细胞无污染。

1.抗生素维持：培养时定期使用Puromycin(如1-2μg/mL)筛选，防止丢失质粒。

2.功能验证：接种前用D-Luciferin体外验证荧光素酶活性。

1.正确选择品系：仅使用C57BL/6雌鼠(Syngeneic)

2.注意亚系：优先选择NCI或Jax来源的C57BL/6,差异较小。

1.环境富集：提供标准饮食、垫料、光照周期。

2.减少应激：操作温柔，让动物适应环境。

进行预实验优化：

· i.p.接种：5×10⁶~1×107细胞/只

·S.c.接种：5×106细胞/只(可与Matrigel混合)

· 卵巢原位：1-5×10⁵细胞/卵巢

1.与细胞混合：将细胞重悬于与PBS 1:1混合的高浓度Matrigel中。

2.保持低温：操作全程在冰上进行，防止Matrigel提前凝固。

1.i.p.注射：左下腹进针，避免伤及脏器，回抽无内容物再注射。

2.s.c.注射：颈背部皮下，形成明显液泡。

3.原位移植：由经验丰富的人员操作，确保细胞在卵巢包膜下。

1.标准化流程：

·D-Luciferin剂量：150 mg/kg(i.p.)

·等待时间：注射后10-15分钟再成像(待背景清除)

·麻醉：使用异氟烷等气体麻醉，深度一致

2.定期校准仪器。