KPC-NLUC-puro小鼠胰腺癌细胞成瘤验证

发布时间：2025-08-29 09:03:33 细胞资源库平台访问量：67

小鼠胰腺癌细胞系(如 Panc02、KPC 来源细胞、Pan02 等)是研究胰腺导管腺癌(PDAC)的核心工具。这些细胞通常来源于基因工程小鼠模型(如 KPC 小鼠：KrasG12D; Trp53R172H; Pdx1-Cre)或化学诱导模型(如 Panc02)中自发产生的肿瘤，能够在体外培养扩增并移植回免疫健全或缺陷的小鼠体内。构建可靠的小鼠胰腺癌成瘤模型(如同种移植、原位移植或基因工程模型)具有至关重要的意义。鉴于胰腺癌的极端恶性程度、早期诊断困难、复杂的肿瘤微环境(富含基质、免疫抑制)以及当前治疗手段效果有限，这些体内模型为在活体、系统性的环境中模拟人类疾病提供了不可或缺的平台。它们使得研究人员能够深入探究肿瘤发生发展的分子机制、肿瘤与微环境及免疫系统的动态相互作用、评估新型治疗策略(包括化疗、靶向治疗、免疫治疗、联合疗法)的有效性与耐受性、克服药物递送障碍以及理解治疗抵抗的产生原因，是连接体外细胞实验与人体临床试验的关键桥梁，对于推动胰腺癌的基础研究和临床转化具有不可替代的价值。

细胞简介

细胞名称：KPC-NLUC-puro小鼠胰腺癌细胞(NLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：胰腺

生长特性：贴壁

生长细胞形态：上皮

细胞样背景介绍：Luciferase KPC细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是直接来源于“KPC转基因小鼠”胰腺肿瘤组织的原代细胞或由其建立的细胞系。KPC小鼠是一种广泛使用的胰腺导管腺癌(PDAC)基因工程小鼠模型(GEMM)。在这种模型中，胰腺特异性启动子Pdx1驱动的Cre重组酶会激活致癌基因Kras的G12D突变(驱动肿瘤发生)和抑癌基因Trp53的R172H突变(促进肿瘤进展)。因此，KPC小鼠会自发地发展出与人类胰腺癌在组织学、分子特征和肿瘤微环境(如丰富的纤维间质、免疫抑制)方面高度相似的侵袭性胰腺癌。KPC细胞正是从这些自发形成的KPC小鼠胰腺肿瘤中分离、培养获得的。它们直接携带了驱动人类胰腺癌的关键遗传改变(突变型Kras和p53)，并保留了原始肿瘤的许多病理特征，是研究胰腺癌生物学、肿瘤微环境相互作用和治疗反应(尤其是免疫治疗)的极其重要且高度相关的临床前模型工具。

puro药筛浓度：KPC-NLUC-puro细胞puro药筛浓度为4.0 ug/ml，培养过程中建议使用2.0 ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(NLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

不同接种方式成瘤特性对比表(仅供参考)

特性	皮下接种	原位接种(胰腺内)	尾静脉注射	腹腔接种
操作难度	★☆☆☆☆(极低)	★★★★☆(高，需开腹手术)	★★☆☆☆(中，需技术熟练)	★★☆☆☆(中)
成瘤潜伏期	5-7天	7-10天	肺转移灶：14-21天	腹膜播散：10-14天
成瘤率	>95%	80-90%*(依赖手术熟练度 )	肺转移率：60-80%	腹膜转移率：>90%
肿瘤生长位置	注射点局部肿块	胰腺原发灶	肺、肝微转移灶	腹膜、肠系膜、脏器表面
自发转移能力	极低(<10%)	高(肝/肺/腹膜转移≥50%)	不适用(直接诱导血行转移)	不适用(直接诱导腹腔播散)
活体成像适用性	★★★★★(易监测局部生长)	★★★★☆(可追踪原发灶+转移灶)	★★★☆☆(肺转移灶显影清晰 )	★★★☆☆(腹膜弥散信号较弱)
病理特征	边界清晰，基质少	高临床相关性：富基质、坏死	肺内微结节，伴炎性浸润	腹膜多发性小结节，腹水
适用研究方向	药物初步筛选、生长动力学	核心应用：转移机制、免疫微环境、靶向/免疫治疗	血行转移机制、抗转移药物	腹膜转移模型、腹腔灌注治疗

同类胰腺癌细胞系对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	来源	遗传背景	成瘤率(免疫健全鼠)	生长速度	自发转移能力	适用研究
IML-219	KPC-NLuc-Puro	KPC小鼠PDAC原位肿瘤	Kras、G12D;p53、R172H	>95%	中等(5-7天倍增)	强(肝/肺/腹膜)	免疫治疗、转移机制、活体药效
IM-M092	Pan02	同系C57BL/6小鼠化学诱导	未知突变	70-80%	慢(7-10天倍增 )	无	免疫疗法筛选、疫苗开发

成瘤影响因素及优化策略

影响因素类别	具体因素	对成瘤的影响	优化策略
细胞状态	细胞代数	高代次(>P20)→遗传漂变、成瘤率↓ 、转移能力↓	·使用低代次细胞(P5-P15) · 分装冻存母库(液氮保存)
	细胞活力	活率<90%→成瘤延迟、坏死率↑	· 复苏后恢复培养≥24h再接种 · 台盼蓝验证活率(>95%)
	支原体污染	隐性污染→炎症反应、肿瘤生长抑制	· 每月PCR检测 ·培养基添加Plasmocin(5μg/mL)预防
接种操作	细胞悬液浓度	过高(>107/mL)→ 中央坏死；过低(<105/mL)→不成瘤	· 原位/皮下：5×10⁵-1×10cells/50μL(Matrigel"":RPMl=1:1) ·尾静脉：1×106cells/100μL(无基质胶)
	基质胶使用	未用基质胶→细胞渗漏、原位成瘤率↓	· 预冷枪头操作 ·基质胶占比≥50%(4℃混合防凝固)
	手术操作(原位)	开腹时间长/出血多→死亡率↑、炎症干扰成瘤	· 显微外科技术(切口<1cm) · 使用可吸收止血海绵 · 术者培训(≥20例熟练度)
动物模型	小鼠品系与年龄	非C57BL/6→免疫排斥；>8周龄→成瘤延迟	·严格选用6-8周龄雌性C57BL/6(雄性易打斗致伤口开裂)
动物模型	免疫状态	免疫缺陷鼠(e.g.NSG)→缺乏微环境交互，转移模型失真	·优先选用免疫健全鼠(除非研究免疫缺陷机制)
环境控制	术后管理	未镇痛→应激抑制免疫，成瘤率↓	· 术后72小时镇痛(布洛芬饮水，0.3mg/mL) · 保温恢复(手术台37℃加热垫)
环境控制	成像干扰(活体)	皮毛/粪便残留荧光素酶底物→信噪比↓	· 注射D-luciferin前脱毛处理 · 禁食4小时减少肠胃信号
监测节点	活体成像时机	过早成像(<10天)→本底信号高；过晚(>14天)→动物濒死	· 原位瘤：接种后第10/17/24天成像 ·肺转移：尾静脉接种后第21/28天