4T1-OVA小鼠乳腺癌细胞成瘤验证

发布时间：2025-08-08 09:38:11 细胞资源库平台访问量：77

4T1-OVA细胞系是在高度转移性小鼠乳腺癌模型4T1基础上，通过基因工程稳定表达卵清蛋白(OVA)的衍生细胞株。该模型结合了4T1细胞模拟人类三阴性乳腺癌恶性进展的特性(包括自发转移至肺、肝、骨等器官)与OVA作为模式肿瘤抗原的优势。OVA作为广泛认可的模型抗原，可通过MHC-I限制性表位(SIINFEKL)被特异性T细胞识别，为研究T细胞介导的抗肿瘤免疫应答(如免疫检查点抑制剂、疫苗或过继性细胞疗法的疗效)提供标准化平台;其保留4T1细胞的高侵袭性和转移能力，适用于乳腺癌转移机制及靶向干预研究;OVA抗原的引入使研究者能通过TCR转基因小鼠(如OT-I CD8⁺ T细胞)精准追踪肿瘤内抗原特异性免疫细胞动态，解析免疫逃逸机制;OVA系统为不同研究组提供了可重复的抗原特异性检测体系，促进疗法横向比较。因此，4T1-OVA成瘤模型是衔接基础免疫机制与转化医学的重要工具，对乳腺癌免疫治疗研发具有不可替代的价值。

细胞简介

细胞名称：4T1-OVA小鼠乳腺癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：乳房

生长特性：贴壁

生长细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：4T1-OVA细胞系是在高度转移性BALB/c小鼠乳腺癌模型4T1的基础上，通过基因工程改造稳定表达卵清蛋白(ovalbumin, OVA)的衍生细胞株。4T1细胞本身模拟人类三阴性乳腺癌的恶性特征，具有自发转移至肺、肝、骨等远端器官的能力。引入OVA作为模式肿瘤抗原后，该细胞保留了4T1的侵袭性和转移特性，同时兼具OVA抗原的免疫可识别性——其免疫显性表位SIINFEKL(H-2Kb限制性)可被特异性T细胞精准识别。这一设计使4T1-OVA成为肿瘤免疫学研究中整合原位肿瘤进展、转移生物学与抗原特异性免疫应答的理想实验工具，为解析肿瘤微环境动态及免疫治疗机制提供了独特优势。其亲本株4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高转移肿瘤，可转移到肺、肝、淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶，诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近，这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比，由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到，没必要数淋巴结或称重器官。

puro药筛浓度：4T1-OVA细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。

4T1-OVA细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种方式	接种量(细胞数)	成瘤时间(天)	转移倾向	适用研究方向	优缺点
乳腺脂肪垫原位接种	1×10⁴-1×10⁵	5-7天可触诊肿瘤	高(肺、肝、骨转移；21天>80%)	转移机制、肿瘤微环境、免疫治疗研究	优点：模拟原位微环境，转移真实性强；缺点：需手术操作，技术要求高
皮下接种	1×10⁵-5×10⁶	7-10天形成可见瘤块	低(局部生长为主，罕见远处转移 )	药物疗效评估、原位肿瘤生长动力学研究	优点：操作简单，便于监测体积；缺点：转移率低，微环境差异大
尾静脉注射	2×10⁵-5×10⁵	不形成原发瘤	快速肺转移(7-14天肺转移灶形成)	血行转移机制、抗转移药物筛选	优点：直接研究转移过程；缺点：无法观察原发瘤进展
胫骨原位接种	1×10⁴	10-14天骨破坏明显	局部骨转移(伴破骨细胞活化)	乳腺癌骨转移模型、骨靶向治疗研究	优点：模拟骨转移特异性病理；缺点：需影像学监测，成本高
腹腔注射	5×10⁵-1×10⁶	不形成实体瘤	腹腔播散(肝、腹膜转移为主)	肿瘤腹水模型、全身性药物分布研究	优点：适合研究播散性转移；缺点：无法定量评估原发灶

注意事项

小鼠品系：4T1-OVA需接种于免疫健全的BALB/c小鼠(同源模型)。

伦理规范：肿瘤体积需符合动物福利上限(通常≤2000 mm³)。

小鼠乳腺癌细胞系成瘤特性差异对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	接种量(细胞数)	成瘤时间(天)	成瘤率	转移倾向	激素受体表达	适用研究方向
IM-M017	4T1	1×10⁴-1×10⁶	5月7日	>95%	高(肺、肝、骨)	ER-/PR-/HER2-	转移机制、免疫治疗、耐药性研究
IM-M059	EMT6	5×10⁵	10月14日	80-90%	低(局部侵袭 )	ER-/PR-/HER2-	放射治疗、化疗敏感性评估
IM-M099	E0771	2×10⁵	7月10日	80-95%	中等(淋巴结转移)	ER+/PR+	激素依赖性肿瘤、内分泌治疗研究
IM-M123	67NR	1×10⁵	7月10日	>90%	无	ER-/PR-	原位肿瘤生长、血管生成研究
IMO-002	4T1-OVA	1×10⁴-1×10⁶	5月7日	>90%	高(肺转移为主)	ER-/PR-/HER2-	活体成像、药物动力学动态监测

4T1-OVA成瘤关键影响因素

影响因素类别	具体因素	对成瘤的影响	优化策略
细胞状态	细胞活力(活率<85%)	成瘤延迟/失败，转移率降低	复苏后传代≤3次，冻存前活率>95%,使用高浓度血清培养基(如20%FBS)短期恢复
	OVA表达稳定性	抗原丢失导致免疫逃逸研究失效	定期流式检测OVA表达(抗-OVA抗体),加嘌呤霉素(1-2μg/mL)维持筛选压力
	支原体污染	炎症干扰微环境，成瘤率下降	每月检测，使用支原体清除剂处理5天
操作参数	接种细胞量	过低(<1×10⁵):不成瘤；过高：坏死	优化区间：皮下：2-3×10⁵/100μL 乳腺垫：1×10⁵/50μL(原位）
	基质胶比例	未使用基质胶：肿瘤生长慢/转移减少	添加50%Matrigel(增强锚定，模拟微环境)
	注射体积	体积过大：细胞渗漏；过小：局部坏死	皮下≤100μL,原位≤50μL,缓慢推注(>30秒)
宿主状态	小鼠品系(非BALB/c)	免疫排斥导致成瘤失败	必须使用BALB/c雌鼠(6-8周龄),同源背景保证免疫兼容性
	免疫缺陷程度	重度缺陷鼠(如NSG)缺乏免疫微环境	选择免疫健全BALB/c,或轻度缺陷鼠(如Nude)平衡成瘤性与微环境完整性
	激素水平(雌激素)	4T1生长受雌激素调控	同步小鼠动情周期(阴道涂片筛选),或补充17β-雌二醇(0.1mg/kg)
环境控制	麻醉剂类型	异氟烷过量抑制早期肿瘤生长	改用酮胺/赛拉嗪混合麻醉(剂量：80mg/kg+10mg/kg),缩短苏醒时间
环境控制	成瘤监测频率	频繁测量致机械损伤，影响生长	每周测量≤2次，使用数字化卡尺(误差<0.1mm),固定操作人减小偏差
模型验证	转移灶确认不足	低估自发转移能力	成瘤后4周解剖，肺/肝组织做H&E染色或OVA+流式检测
模型验证	抗原特异性T细胞应答未验证	无法关联生长与免疫清除效率	同步输注CFSE标记的OT-I CD8+T细胞，流式监测肿瘤浸润T细胞扩增