常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
发布时间：2025-08-04 10:02:58 细胞资源库平台 访问量：56
小鼠胰腺癌细胞主要来源于基因工程小鼠模型(GEMMs)，尤其是那些在胰腺特异性启动子驱动下携带胰腺癌关键驱动基因突变(如条件性激活的Kras突变、p53缺失等，如著名的KPC、KPCA模型)的自发肿瘤。这些细胞在基因层面高度模拟了人胰腺导管腺癌(PDAC)的核心分子特征，并且是在具有完整免疫系统的小鼠体内发展起来的，因此能更真实地反映肿瘤与宿主免疫微环境之间复杂的相互作用。构建基于这些小鼠胰腺癌细胞的成瘤模型(如原位移植模型或利用GEMMs直接建模)至关重要。它们克服了传统人源细胞异种移植到免疫缺陷鼠中缺乏功能性免疫系统的重大局限，为研究胰腺癌在免疫健全环境下的发生、发展、侵袭转移、免疫逃逸机制以及肿瘤微环境(TME)的动态演变提供了独一无二的平台。这些模型尤其适用于评估免疫治疗策略(如免疫检查点抑制剂、CAR-T细胞、肿瘤疫苗等)的有效性和耐药机制，是连接基础免疫学发现与临床转化应用不可或缺的临床前桥梁，对于开发更有效的胰腺癌免疫疗法具有不可替代的价值。
细胞名称：PAN02-FLUC-puro小鼠胰腺癌细胞(FLUC标记)
种属来源：小鼠
组织来源：胰腺
生长特性：贴壁生长
细胞形态：多角细胞样
背景介绍：Luciferase PAN02细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是源自化学致癌剂(如DMBA)诱导的C57BL/6小鼠原发性胰腺导管腺癌，具有高度的同系移植性，能在免疫健全的C57BL/6小鼠中形成肿瘤，并能部分模拟胰腺癌的免疫抑制微环境特征。
puro药筛浓度：PAN02-FLUC-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持
培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。
| 接种方式 | 推荐接种密度 | 成瘤潜伏期 | 肿瘤生长速度 | 病理特征 | 适用研究方向 | 操作难点 |
| 皮下注射 | 5×10⁵-1×106细胞/鼠 | 5-7天(肉眼可见 ) | 中等： 体积达500 mm³约需14-21天 | 边界清晰，包膜完整 ；免疫细胞浸润较少 | 基础肿瘤生长、药物筛选、免疫治疗初评 | 低(操作简单) |
| 胰腺原位注射 | 1×10⁵-5×10⁵细胞/鼠 | 10-14天(可触及 ) | 缓慢： 体积达100 mm³需21-28天 | 模拟人类胰腺癌：局部侵袭、纤维化微环境 ；高免疫抑制(MDSC/Treg浸润 ) | 转移机制、肿瘤微环境、免疫治疗深度评估 | 高(需开腹手术/超声引导) |
| 脾内注射 | 2×10⁵-5×10⁵细胞/鼠 | 肝转移灶：14-21天 | 转移灶生长快： 肝占位3周内形成 | 肝转移主导： 伴胰腺原发灶；高血管生成活性 | 肝癌转移机制、抗转移药物评价 | 中(需精准脾内注射 ) |
| 尾静脉注射 | 2×10⁶-5×106细胞/鼠 | 肺转移：21-28天 | 肺结节生长缓慢 | 多发性肺转移；罕见胰腺定位 | 血行转移模型、循环肿瘤细胞研究 | 低(但成瘤率不稳定 ) |
| 产品货号 | 细胞系 | 来源/修饰 | 成瘤时间 | 生长速度 | 转移性 | 免疫原性 | 适用研究 |
| IMO-008 | PAN02-OVA | C57BL/6小鼠胰腺癌+OVA转染 | 7-14天 | 中等 | 低 | 高(可控抗原) | 抗原特异性免疫治疗 |
| IM-M092 | PAN02 | C57BL/6小鼠化学诱导 | 7-14天 | 中等 | 低 | 低 | 基础肿瘤生长、化疗筛选 |
| IM-M167 | KPC | KPC转基因小鼠(Kras/p53突变 ) | 5-10天 | 快 | 高 | 中等 | 自发成瘤、转移模型、免疫编辑 |
| IMO-019 | MC38-OVA | C57BL/6结肠癌+OVA转染 | 5-7天 | 快 | 低 | 高 | 通用抗原特异性模型(非胰腺特化) |
| 影响因素类别 | 具体因素 | 对成瘤的影响 | 优化策略 |
| 细胞特性 | 1.细胞活力与状态 | 低活力或过度传代导致成瘤失败或生长延迟 | · 复苏后培养≤15代 ·冻存前活率>90%,使用含10%DMSO+90%FBS冻存液 · 接种前活率≥95%(台盼蓝检测） |
| 2.荧光素酶表达稳定性 | 表达衰减降低活体成像信号，影响定量准确性 | · 定期检测发光强度(传代后RLU衰减<20%) · 添加嘌呤霉素(1-2μg/mL)维持筛选压 | |
| 3.细胞增殖能力 | PAN02本身增殖较慢，影响肿瘤形成速度 | · 预实验筛选高增殖亚群 · 调整接种密度(见操作技术) | |
| 宿主环境 | 1.小鼠品系与免疫状态 | C57BL/6小鼠免疫清除导致成瘤率低；免疫缺陷鼠缺乏微环境交互 | · 首选C57BL/6(需免疫干预) · 或使用NOD-scid IL2Ry<sup>null</sup>(NSG)鼠(保留部分基质) |
| 2.免疫微环境抑制 | 宿主T细胞、巨噬细胞等介导免疫排斥 | · 亚致死量辐照(4-6Gy) ·抗CD4/CD8抗体耗竭T细胞 · 氯膦酸盐脂质体清除巨噬细胞" | |
| 3.移植部位微环境 | 皮下移植易形成包囊；原位(胰腺)移植更真实但技术难度高 | · 皮下：混合Matrigel(1:1)增强血管化 ·原位移植：超声引导注射+术中活体成像验证 | |
| 操作技术 | >1.细胞接种数量 | 过低(<1×10⁶)不成瘤；过高(>5×106)致坏死或伦理风险 | · 皮下：2-3×106/鼠 · 原位：1-2×105/鼠(减少胰漏) · 预实验梯度测试(10⁵~5×106) |
| 2.接种体积与载体 | 体积过大(>100μL)导致渗漏；无载体支撑细胞分散差 | · 皮下：50μLPBS+Matrigel混合液(4℃操作) · 原位：10-20μL(含0.1%TrypanBlue示踪) | |
| 3.麻醉与镇痛 | 麻醉过深抑制代谢；疼痛应激影响肿瘤生长 | · 使用异氟烷气体麻醉(可控性强) ·术后布托啡诺(5mg/kg)镇痛48h | |
| 监测与数据分析 | 1.活体成像信号干扰 | 毛发/色素遮挡信号；底物分布不均致定量偏差 | · 剃毛+脱毛剂处理成像区 · 腹腔注射D-荧光素(150mg/kg),10min后成像 · 固定ROI大小统一量化 |
| 2.肿瘤异质性 | 同一批小鼠成瘤大小差异>30%,降低统计效力 | ·接种前细胞充分混悬(避免沉淀) · 分组时随机化分配小鼠 · 剔除异常值(信号±2SD以外) |
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
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