常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
发布时间:2025-07-18 08:59:32 细胞资源库平台 访问量:101
人肝细胞癌(HCC) 是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一,其发病率和死亡率长期居高不下,尤其在亚洲和非洲部分地区负担沉重(全球每年新发病例超90万,死亡病例超80万,其中中国贡献近半)。其发生发展是一个复杂的多步骤过程,通常与慢性肝病(如乙型/丙型肝炎病毒感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎)导致的持续肝损伤、再生和纤维化(肝硬化)密切相关。常见的风险因素还包括黄曲霉素暴露、代谢综合征等。尽管在诊断(如影像学、血清标志物AFP)和治疗(手术切除、肝移植、局部消融、靶向治疗、免疫治疗)方面取得了一定进展,HCC患者仍普遍面临早期诊断困难、肿瘤异质性强、易复发转移、易产生治疗耐药等严峻挑战,导致其总体预后不良(5年生存率仍较低)。 因此,深入解析HCC的发病机制、肿瘤微环境特征、耐药机制以及寻找新的有效治疗靶点,是当前基础和临床研究的迫切需求。在此背景下,构建能够忠实模拟人类HCC生物学特性(包括肿瘤发生、进展、侵袭转移及微环境互作)的体内外成瘤模型(如细胞系移植模型、基因工程小鼠模型、患者来源异种移植模型等)具有至关重要的意义。 这些模型为研究HCC的分子机制提供了可控且可操作的平台,是评估潜在抗癌药物(化疗药、靶向药、免疫治疗药)有效性、安全性及耐药性的关键临床前工具,也是探索新型治疗策略(如联合疗法)不可或缺的桥梁。没有可靠且具有临床相关性的成瘤模型,HCC的基础研究将难以深入,新药研发也将步履维艰。 构建和优化更精准、更能反映人HCC复杂性和异质性的模型,是推动肝癌研究取得突破性进展、最终改善患者预后的基石。
细胞名称:MHCC97H人高转移性肝癌细胞
种属来源:人
组织来源:肝脏
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
背景介绍:MHCC97H是一种具有高转移潜能的人肝癌细胞系。它起源于其母系细胞MHCC97,而MHCC97本身是由中国上海复旦大学肝癌研究所(复旦大学附属中山医院肝癌研究所) 的科研团队于1996年,从一名中国男性肝细胞癌(HCC)患者的手术切除原发肿瘤组织中分离并建立的。为了研究肝癌转移的异质性,研究人员将MHCC97细胞通过皮下接种到裸鼠体内,并从中筛选出发生肺转移的病灶。随后,利用有限稀释法对具有肺转移能力的细胞进行亚克隆,最终成功分离出两个具有不同转移潜能的亚系:其中转移能力强的亚系被命名为MHCC97H(‘H’代表 High metastatic potential),而转移能力弱的亚系则被命名为MHCC97L(‘L’代表 Low metastatic potential)。因此,MHCC97H是经过体内筛选和亚克隆过程,从人原发性肝癌组织直接建立的MHCC97细胞系中衍生出来的、具有明确高转移特性的重要肝癌研究模型细胞。
接种方式 | 适宜接种密度 | 成瘤时间 | 成瘤率 | 转移特性 | 操作要点 | 适用研究 |
皮下接种 | 5×10⁶-1×107 cells/鼠 | 4-5周(瘤体积500-1000mm³) | ~100% | 极低转移(<5%肺转移) | 双侧腋下或背部注射,100μL PBS/Matrigel悬液 | 药物初筛、增殖研究 |
原位肝内接种 | 2×10⁶-5×10⁶ cells/鼠 | 2-3周(肉眼可见瘤结节 ) | 95-100% | 高转移(肺转移率80-100%6-8周) | 开腹暴露左肝叶,25-30G针注入10-20μL悬液,按压止血 | 转移机制、侵袭性研究 |
尾静脉注射 | 1×10⁶-2×106 cells/鼠 | N/A | N/A | 定向肺转移(3周内形成肺结节 ) | 直接注入尾静脉,100-200μLPBS悬液 | 循环肿瘤细胞、转移定植研究 |
脾内接种 | 5×10⁵-1×106 cells/鼠 | 4周 | >90% | 肝定向转移(肝内播散为主) | 脾脏中极注射,50 μL悬液,术后切除脾脏防原位成瘤 | 肝特异性转移、微环境互作 |
产品货号 | 细胞系 | 物种来源 | 宿主要求 | 成瘤时间 | 成瘤率 | 转移能力 | 适用研究领域 | 主要局限性 |
IM-M003 | H22 | 小鼠 | 免疫健全鼠 | 3-5天 | >95% | 低-中度 | 化疗/免疫/中药药效学 | 种属差异(非人源 ) |
IM-M073 | Hepa1-6 | 小鼠 | 免疫健全鼠 | 7-10天 | >90% | 低 | 免疫治疗、基因工程模型验证 | 生长较缓慢 |
IM-H038 | HepG2 | 人 | 免疫缺陷鼠 | 14-21天 | 70-80% | 极低 | 药物代谢、基础机制研究 | 难成瘤,需使用重度免疫缺陷鼠 |
IM-H040 | Huh7 | 人 | 免疫缺陷鼠 | 10-14天 | 80-90% | 中度 | 病毒性肝癌研究、靶向治疗 | 需免疫缺陷鼠(成本高) |
IM-H047 | SMMC-7721 | 人 | 免疫缺陷鼠 | 14-20天 | 60-70% | 低 | 药物筛选、侵袭机制 | 成瘤率不稳定 |
影响因素 | 问题表现 | 优化策略 |
细胞状态 | ||
· 传代次数过高 | 转移能力丧失(>P10后肺转移率↓50%) | 使用低传代细胞(P3-P5);冻存早期批次(液氮保存) |
· 支原体污染 | 成瘤延迟/失败,免疫激活 | 采购时要求检测报告;定期PCR监测;用PlasmocinT处理污染细胞 |
接种操作 | ||
· 细胞悬液聚集 | 栓塞导致局部坏死 | 悬液过40μm滤网;使用含0.1%BSA的冷PBS |
· 原位注射泄漏 | 腹腔播散干扰结果 | 显微外科技术;注射后按压针孔10秒;限制注射体积(肝内≤20μL) |
动物模型 | ||
· 鼠龄>8周 | 自发免疫力增强抑制成瘤 | 选用4-6周龄免疫缺陷鼠(BALB/cnude或NSG) |
· 品系不符 | C57BL/6等免疫健全鼠排斥细胞 | 仅用免疫缺陷鼠;避免NOD/SCID鼠(易发淋巴瘤) |
微环境支持 | ||
· 无基质胶辅助 | 皮下成瘤率↓30%,转移能力丧失 | 混合Matrige(1:1)(4℃操作防凝固 ) |
· 营养支持不足 | 瘤体生长缓慢 | 术后补充高脂饲料(含10%脂肪);水中添加抗生素(Enrofloxacin)防感染 |
术后管理 | ||
· 未监测转移 | 低估真实转移率 | 定期活体成像(Luc标记细胞);第6/8周解剖查肺结节 |
· 肿瘤体积过大 | 中心坏死干扰药效评估 | 皮下瘤≤1500mm³时开始实验;原位瘤直径≥10mm需终止 |
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