H22-FLUC-puro小鼠肝癌细胞皮下成瘤验证

发布时间：2025-06-30 09:12:19 细胞资源库平台访问量：143

人肝细胞癌(HCC) 是全球范围内最常见的恶性肿瘤之一，其发病率和死亡率长期居高不下，尤其在亚洲和非洲部分地区负担沉重(全球每年新发病例超90万，死亡病例超80万，其中中国贡献近半)。其发生发展是一个复杂的多步骤过程，通常与慢性肝病(如乙型/丙型肝炎病毒感染、酒精性肝病、非酒精性脂肪性肝炎)导致的持续肝损伤、再生和纤维化(肝硬化)密切相关。常见的风险因素还包括黄曲霉素暴露、代谢综合征等。尽管在诊断(如影像学、血清标志物AFP)和治疗(手术切除、肝移植、局部消融、靶向治疗、免疫治疗)方面取得了一定进展，HCC患者仍普遍面临早期诊断困难、肿瘤异质性强、易复发转移、易产生治疗耐药等严峻挑战，导致其总体预后不良(5年生存率仍较低)。因此，深入解析HCC的发病机制、肿瘤微环境特征、耐药机制以及寻找新的有效治疗靶点，是当前基础和临床研究的迫切需求。在此背景下，构建能够忠实模拟人类HCC生物学特性(包括肿瘤发生、进展、侵袭转移及微环境互作)的体内外成瘤模型(如细胞系移植模型、基因工程小鼠模型、患者来源异种移植模型等)具有至关重要的意义。这些模型为研究HCC的分子机制提供了可控且可操作的平台，是评估潜在抗癌药物(化疗药、靶向药、免疫治疗药)有效性、安全性及耐药性的关键临床前工具，也是探索新型治疗策略(如联合疗法)不可或缺的桥梁。没有可靠且具有临床相关性的成瘤模型，HCC的基础研究将难以深入，新药研发也将步履维艰。构建和优化更精准、更能反映人HCC复杂性和异质性的模型，是推动肝癌研究取得突破性进展、最终改善患者预后的基石。

细胞简介

细胞名称：H22-FLUC-puro小鼠肝癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：肝脏

生长特性：悬浮生长

细胞形态：淋巴母细胞样

背景介绍：

Luciferase H22细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是一种广泛应用于肝癌研究的同种异体移植瘤模型的核心细胞来源。该细胞系并非体外长期培养的细胞株，而是起源于1952年诱导昆明小鼠产生的原发性肝细胞癌组织。其最显著的特点是通常以腹水瘤的形式在小鼠体内进行传代维持：将肿瘤细胞接种于小鼠腹腔后，细胞可在腹水中大量增殖，形成富含肿瘤细胞的腹水。收集这些腹水中的肿瘤细胞，即可用于后续实验。H22细胞具有生长速度快、侵袭性强、易于在多种品系小鼠(尤其是昆明小鼠、ICR小鼠、BALB/c小鼠等)中成瘤的特点，常被接种于小鼠皮下(形成实体瘤)或肝脏原位(模拟肝癌发生部位)以构建移植瘤模型。由于其来源清晰、操作相对简便、成本较低且成瘤率高，H22模型在肝癌发生发展机制的基础研究、抗癌药物(尤其是化疗药、中药单体及复方)的体内药效学筛选与评价、以及肿瘤免疫治疗研究等领域扮演着重要的角色。它为新疗法的初步有效性验证和剂量探索提供了快速、实用的临床前平台。不过，需要注意的是，作为小鼠源性的肿瘤模型，H22在基因背景、肿瘤微环境、药物反应性等方面与人肝癌存在固有的种属差异，其研究结果在向临床应用转化时需要谨慎解读，并常需结合其他模型(如人源细胞系异种移植模型、基因工程小鼠模型或人源肿瘤异种移植模型)进行综合评估。

puro药筛浓度：H22-FLUC-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：

该细胞对接种密度要求高，需保证细胞营养充足，营养不足细胞培养液颜色变黄细胞容易死亡。首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

H22-FLUC-puro细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种方式	推荐接种密度	成瘤时间	生长特性	适用研究	关键注意事项
皮下移植	5x10⁶cells/只	3-5天	生长快速均一，7-10天体积达100mm°;BLI信号与瘤体积强相关(R2>0.9)	药物疗效评价、生长动力学分析	避免接种于血管丰富区域(如腋下)，防止信号干扰
肝原位移植	2-5x10⁵cells/只	5-7天	模拟肝癌微环境，14天可形成肉眼可见结节;易诱发局部浸润肺转移率约20-30%	转移机制、微环境互作研究	需手术暴露肝脏，操作要求高;BLI信号受肝脏本底代谢影响(需设置基线)
腹腔接种(实体瘤)	1x10⁶ cells/只	4-6天	形成腹膜播散性结节伴腹水生成(晚期);BLI可量化全腹肿瘤负荷	腹膜转移模型、抗血管生成治疗	需区分腹水型(低密度)与实体瘤型(高密度)
腹腔接种(腹水瘤)	1x10⁵ cells/只	2-3天	细胞悬浮增殖，5-7天腹水量>2ml;BLI信号强度与腹水细胞数线性相关	化疗药物敏感性、肿瘤增殖动力学	需频繁监测腹水量，避免动物衰竭;传代时取腹水细胞离心纯化
尾静脉注射	2x10⁶ cells/只	N/A	主要定植于肺(>80%)，肝定植率<5%。7天后BLI可见肺转移灶	血行转移、抗转移药物筛选	非自然转移途径;肝靶向性低，需联合肝损伤模型提高定植

肝癌常用细胞系小鼠成瘤特性对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	物种来源	宿主要求	成瘤时间	成瘤率	转移能力	适用研究领域	主要局限性
IM-M003	H22	小鼠	免疫健全鼠	3-5天	>95%	低-中度	化疗/免疫/中药药效学	种属差异（非人源）
IM-M073	Hepa1-6	小鼠	免疫健全鼠	7-10天	>90%	极低	免疫治疗、基因工程模型验证	生长较缓慢
IM-H038	HepG2	人	免疫缺陷鼠	14-21天	70-80%	极低	药物代谢、基础机制研究	难成瘤，需使用重度免疫缺陷鼠
IM-H040	Huh7	人	免疫缺陷鼠	10-14天	80-90%	中度	病毒性肝癌研究、靶向治疗	需免疫缺陷鼠（成本高）
IM-H047	SMMC-7721	人	免疫缺陷鼠	14-20天	60-70%	低	药物筛选、侵袭机制	成瘤率不稳定

H22-FLUC-puro成瘤关键影响因素及优化建议

影响因素	常见问题	优化策略	验证指标
细胞状态	传代次数过高(>15代)导致荧光素酶信号衰减	使用低代次细胞(P5-P10);定期用嘌呤霉素(2μg/mL)加压筛选；冻存早期高活性批次	体外BLI检测：信号衰减率<15%/10代次
接种密度	皮下：密度过低(<3×10⁶)致成瘤延迟；过高(>1×10⁷)致中心坏死	皮下：5×10⁶cells/只；肝原位：2-5×10⁵cells/只(混合基质胶1:1)	成瘤率>95%,14天瘤体积300-500mm³
宿主品系与年龄	BALB/c小鼠年龄>8周时免疫清除增强；C57BL/6品系成瘤率低	选用6-8周龄BALB/c雌鼠(性别一致);避免使用免疫缺陷鼠(除非特定目的)	成瘤潜伏期稳定(3-5天)
操作技术	肝原位移植手术损伤大，细胞泄漏至腹腔	采用微量注射器(50μL)+明胶海绵压迫止血；术中用温生理盐水保持肝脏湿润	术后存活率>90%,无腹腔播散
荧光素酶底物	D-荧光素注射剂量不准(<100mg/kg信号弱；>200mg/kg毒性)	严格按150mg/kg剂量腹腔注射；统一成像时间(注射后12-15min)	信号强度变异系数(CV)<10%
肿瘤监测	BLI信号受脏器背景干扰(如肝原位)或毛发遮挡	肝原位模型：剃毛+脱毛剂处理；成像前禁食4h降低代谢本底；设置同背景对照组	信噪比(SNR)>5
微环境影响	皮下成瘤微环境失真(缺乏肝特异性基质)	肝原位接种：添加肝基质胶(如Matrigel)或共接种肝星状细胞	病理验证：保留肝癌组织学特征
动物福利干扰	术后感染或应激抑制成瘤	术后镇痛(布托啡诺，5mg/kg)+抗生素(恩诺沙星，10mg/L饮水)3天	7天内体重恢复至术前水平

若实验失败可以进行以下排查

现象	可能原因	解决方案
BLI信号骤降(体内)	免疫排斥反应	检测宿主淋巴细胞浸润(CD8+T细胞流式 )
肿瘤生长不均	细胞悬液未混匀/聚集	接种40μm滤网过滤+台盼蓝验证活性
肝原位模型无BLI信号	细胞注入肝被膜下或门静脉	术中吲哚菁绿(ICG)示踪注射位点
腹水瘤模型中腹水无细胞	腹腔接种位置错误(误入肠管)	使用胰岛素针头45°角进针，回抽无液体