MB49-FLUC-puro小鼠膀胱癌细胞皮下成瘤验证

发布时间：2025-06-20 09:02:38 细胞资源库平台访问量：183

膀胱癌是全球高发的泌尿系统恶性肿瘤，以尿路上皮癌为主，其发生与吸烟、化学暴露等因素密切相关。尽管早期诊断和治疗(如手术、膀胱灌注)可取得一定效果，但复发率高;晚期或转移性膀胱癌虽可采用化疗、免疫治疗等综合手段，患者仍面临耐药、预后差等严峻挑战。因此，构建可靠、可重复的膀胱癌成瘤小鼠模型(包括异种移植模型如细胞系来源CDX、患者来源PDX，以及基因工程小鼠模型GEMMs等)具有不可替代的关键作用。这些模型通过在免疫健全或缺陷小鼠体内模拟人类膀胱癌的生长、侵袭、转移及肿瘤微环境特征，为深入探究疾病发生发展的分子机制、肿瘤与宿主免疫系统的相互作用提供了至关重要的活体研究平台。它们更是临床前药物研发的核心工具，用于高效筛选和评估新型化疗药物、靶向疗法(如FGFR抑制剂)、免疫检查点抑制剂及其联合策略的有效性和安全性，预测临床反应，并揭示耐药机制。膀胱癌成瘤小鼠模型架起了基础研究与临床转化之间的桥梁，是加速开发更有效个体化治疗策略、最终改善患者生存结局的基石。

细胞简介

细胞名称：MB49-FLUC-puro小鼠膀胱癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：膀胱

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：

Luciferase MB49细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是于1976年由美国学者Soloway教授团队通过化学致癌剂BBN(N-丁基-N-(4-羟丁基)亚硝胺) 诱导C57BL/6小鼠发生膀胱癌后，从肿瘤组织中分离、培养并建立。它能在免疫健全的同系小鼠中构建高度模拟肿瘤免疫微环境的移植瘤模型，为膀胱癌免疫学研究和治疗开发提供了不可替代的平台。

puro药筛浓度：MB49-FLUC-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：

首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLUC+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

MB49-FLUC-puro细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

特性参数	皮下接种模型	膀胱原位接种模型
接种部位	背部/侧腹皮下	膀胱壁黏膜层(经尿道导管或手术)
操作复杂度	★☆☆☆☆(简单，无需手术)	★★★★☆(复杂，需无菌手术/导管技术)
接种细胞密度	5×10⁵- 1×10⁶细胞/鼠(悬浮于50-100μL PBS/基质胶)	1×10⁵-5×10⁵细胞/鼠(悬浮于20-50μL PBS,低体积防反流)
成瘤时间	5-7天(可触及肿块)	7-14天(需活体成像确认)
肿瘤监测方	卡尺测量+终末BLI成像	系列化活体BLI成像(荧光素酶报告)
模拟临床真实性	中低： ·缺乏器官特异性微环境 · 转移罕见	高： · 保留膀胱基质互作 · 自发转移至淋巴结/肺/肝
免疫微环境	完整(C57BL/6免疫健全鼠)	完整(C57BL/6鼠) 注：可用NSG鼠构建免疫缺陷模型
适用研究重点	· 药物高通量初筛 · 增殖动力学	· 转移机制 · 肿瘤-微环境互作 · 免疫治疗评估
技术挑战	低(细胞易定位)	高： ·细胞滞留率低(需优化接种技术) · 易引发尿路感染
实验周期	短(2-3周)	长(3-8周，含转移监测)

膀胱癌常用细胞系小鼠成瘤特性对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	物种来源	模型类型	成瘤率	转移能力	免疫微环境	技术门槛	主要应用	局限
IM-M012	MB49	小鼠(C57BL/6)	同系免疫健全	★★★★★	★★★☆☆(原位模型)	完整	★★☆☆☆	免疫治疗、转移机制	非人源基因背景
-	UPPL-154	人尿路上皮癌	PDX(免疫缺陷鼠)	★★★☆☆	★★★★☆(自发转移)	缺失	★★★★☆	靶向治疗、个体化药敏	成本高、周期长(6-12月)
IM-H069	T24	人膀胱癌(转移灶 )	CDX(免疫缺陷鼠)	★★★★☆	★★☆☆☆(需尾静脉注射)	缺失	★★☆☆☆	化疗药物筛选、增殖信号通路	缺乏微环境互作
IM-H067	RT4	人低级别膀胱癌	CDX(免疫缺陷鼠)	★★★☆☆	★☆☆☆☆	缺失	★★☆☆☆	非肌层浸润癌机制研究	侵袭性弱、转移模型难构建
-	BBNL-1	小鼠(BBN诱导)	同系免疫健全	★★★★☆	★★☆☆☆	完整	★★☆☆☆	化学预防剂评价	转移数据有限(新模型)

MB49-FLUC-puro成瘤影响因素及优化建议

影响因素	机制/后果	优化策略	证据等级
细胞状态
· 传代次数过高	基因组不稳定，致瘤性下降	· 使用≤15代细胞 · 定期STR验证细胞身份	★★★★☆
· 冻存前活率<90%	复苏后凋亡增加，成瘤延迟	·冻存时活率>95%(台盼蓝检测) ·添加10%DMSO+90%FBS冻存液	★★★ ☆
· 荧光素酶表达衰减	活体成像信号弱，定量偏差	·接种前流式分选(puro筛选) · 维持2μg/mL嘌呤霉素压力培养	★★★★☆☆
接种操作
· 细胞悬液体积过大(原位)	膀胱过度扩张，细胞反流至尿道	· 控制体积≤50μL(导管法) · 尿道夹闭1小时提高滞留	★★★★☆
· 注射速度过快	组织损伤引发炎症，干扰肿瘤微环境	· 原位注射：5μL/min缓推 · 皮下注射：避免局部渗漏	★★★☆☆
· 未使用基质胶(皮下)	细胞扩散，成瘤不规则	·添加50%Matrigel(PBS稀释) · 冰上操作防凝固	★★★ ☆
动物相关
· 小鼠年龄>8周龄	免疫衰老导致T细胞应答减弱	·选用6-8周龄C57BL/6雌鼠(雄鼠易尿道感染) · 体重18-22g	★★★★☆
· 免疫缺陷模型选择错误	人源化NSG鼠清除MB49细胞(鼠源VS人源免疫互斥)	· 同系移植用免疫健全C57BL/6 ·人源化研究改用PBMC重建的NSG	★★★☆☆
· 术后感染	膀胱炎干扰肿瘤生长，导致数据偏倚	·术后48小时饮水中添加恩诺沙星(0.5mg/mL) · 无菌导尿管操作	★★★★★
监测技术
· 荧光素底物注射量不足	活体成像信号低估肿瘤负荷	·腹腔注射150mg/kg D-荧光素(15mg/mL) · 等待10分钟扩散后成像	★★★★☆
· 成像参数不一致	光子通量波动大，纵向数据不可比	· 固定曝光时间(1-5min) ·使用同一成像仪及ROI分析软件	★★★☆☆
微环境干扰
· 基质胶含生长因子	加速血管生成，改变药物响应	·选用低生长因子Matrigel ·PBS稀释替代高浓度血清	★★★☆☆
· 皮下模型中央坏死	高密度接种导致缺氧区域	· 控制细胞量≤1×10⁶/鼠 ·肿瘤直径>1.5cm时提前终止实验	★★★★☆

若实验失败可以进行以下排查

现象	可能原因	纠正措施
原位无BLI信号	细胞滞留失败	改用手术原位接种
皮下瘤生长缓慢	细胞活性不足	增加密度至7×10⁵+基质胶
成像背景噪音高	荧光素未代谢	延长等待至15分钟

典型实验设计示例

研究目标	模型选择	实验分组设计	接种方案	监测方案	终点分析
免疫检查点抑制剂疗效	原位模型	·对照组： IgG同型抗体 · 治疗组：抗PD-1(10mg/kg) ·联合组：抗PD-1+抗CTLA- 4(各10mg/kg) · n=8/组	2.5×10⁵细胞/30μL PBS(导管法接种) ·BLI:第7、14、21、28天 · 流式：第14天肿瘤浸润淋巴细胞(TILS)	·BLI:第7、14、21、28天 · 流式：第14天肿瘤浸润淋巴细胞(TILS)	· 肿瘤重量 · 肺/淋巴结转移计数 · IFN-Y ELISA
转移动力学分析	原位模型	· 野生型组 · 基因敲除组(如敲除Twist1) · n=10/组	5×10⁵细胞/40μL PBS(手术原位接种)	·每周BLI:原发灶/转移灶 ·Micro-CT:第35天淋巴管转移	· H&E染色(肺、肝、淋巴结) · 转移灶定量
化疗药物敏感性筛选	皮下模型	· 对照组： PBS · 单药组：吉西他滨(50mg/kg)、顺铂(5mg/kg) · 联合组：吉西他滨+顺铂 · n=6/组	1×10⁶细胞/100μL(Matrigel:PBS=1:1)	· 卡尺测量：隔天(体积=长×宽²×0.5) · 终点BLI:验证荧光活性	· 肿瘤生长曲线(TGI) · 免疫组化(Ki67,Cleaved Caspase-3)
肿瘤微环境互作机制	原位+皮下并行	· 对照组 · 基质细胞共接种组(如CAFs) · 抗体阻断组(如抗-IL6) · n=7/组	原位：2×10⁵MB49+ 1×10⁵CAFs/40μL 皮下：5×105MB49+ 5×10⁴CAFs/100μL	· 双周BLI(原位) · 流式：第21天髓系细胞(CD11b+Gr1+)比例	·单细胞测序(肿瘤+免疫细胞) · 多重荧光(IHC)