143B人骨肉瘤细胞皮下成瘤验证

发布时间：2025-05-09 09:05:53 细胞资源库平台访问量：30

人骨肉瘤(Osteosarcoma)是儿童和青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤，具有高侵袭性和早期转移倾向(尤其肺转移)，晚期患者5年生存率不足30%。其发病机制复杂，涉及TP53/RB1基因缺失、染色体不稳定性和Wnt/PI3K等信号通路异常，但肿瘤异质性高且缺乏有效治疗靶点。在此背景下，小鼠模型成为研究人骨肉瘤的核心工具：通过原位移植(如胫骨内注射143B细胞)可模拟肿瘤微环境中的骨破坏和转移过程;皮下异种移植模型适用于快速药物筛选;而基因编辑小鼠(如p53/Rb双敲除)能揭示驱动基因的致癌机制。这些模型不仅为解析转移、耐药等关键生物学问题提供平台，也是评估靶向疗法和免疫治疗临床潜力的必经之路，尤其在开发针对肺转移或化疗增敏策略中不可或缺。

细胞简介

细胞名称：143B人骨肉瘤细胞

种属来源：人

组织来源：骨

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：143B细胞是一种广泛使用的人骨肉瘤研究模型，起源于1970年代从一名11岁骨肉瘤患者肿瘤组织中分离的原代细胞(KHOS细胞系)，后经Kirsten鼠肉瘤病毒(KiMSV)转染转化，获得增强的致瘤性和转移潜能。该细胞因缺乏胸苷激酶(TK⁻)而具有代谢选择性，常用于裸鼠或免疫缺陷小鼠的体内成瘤实验。其核心特性包括高侵袭性、快速增殖(皮下接种7-14天成瘤)及自发远处转移倾向(肺、肝、骨转移率>80%)，成为研究骨肉瘤转移机制、药物疗效评估(如化疗耐药)及靶向治疗的理想工具。相较于Saos-2、U2OS等骨肉瘤细胞系，143B在模拟临床转移行为方面更具优势，被广泛应用于肿瘤微环境互作和抗转移疗法的临床前研究。

培养须知： 143B细胞需在DMEM高糖培养基(含10%胎牛血清、1%双抗)中培养，维持37℃、5% CO₂的恒温恒湿环境。因其增殖迅速(24-48小时可汇合80%)，需每2-3天按1:4~1:6比例传代，避免过度融合(>90%会加速老化)。传代时使用0.25%胰酶消化1-2分钟(可含EDTA)，及时用含血清培养基终止。

注意：

TK⁻缺陷：培养基中需添加1% HT补充剂(次黄嘌呤+胸苷)以补偿代谢缺陷;

支原体防控：定期检测(如PCR)，避免污染;

冻存条件：含10% DMSO的冻存液，梯度降温后液氮保存。该细胞贴壁性中等，若出现漂浮聚集，提示状态异常或污染，需立即处理。

143B细胞在小鼠体内的成瘤特性总结(仅供参考)

参数	描述
细胞来源	骨肉瘤(经Kirsten鼠肉瘤病毒转化，TK⁻缺陷型)
常用模型动物	免疫缺陷小鼠(裸鼠、NOD/SCID、NSG)
接种方式	皮下注射(快速成瘤)或原位(胫骨/股骨内注射，模拟骨微环境)
成瘤时间	皮下：7-14天;原位：3-4周(伴肺、肝转移)
成瘤率	100%(皮下接种≥1×10⁶细胞)
转移倾向	高转移性(肺转移率>80%，肝、骨转移常见)
研究应用	转移机制、化疗耐药、靶向治疗(如mTOR抑制剂)

143B细胞不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种方式	接种部位	细胞数量	模型动物	成瘤时间	成瘤率	转移倾向	优点	缺点
皮下注射	背部或侧腹皮下	1×10⁶	裸鼠、NOD/SCID	7-14天	100%	低(偶发局部侵袭，罕见远处转移)	操作简单、成瘤快、适合药物筛选	微环境不真实，转移率低
原位注射(胫骨内)	胫骨髓腔或骨表面	5×10⁴–1×10⁵	NSG小鼠、裸鼠	3-4周	90-100%	高(肺转移)率>80%，骨/肝转移	模拟骨微环境，自发转移，临床相关性高	手术难度大，需影像学监
尾静脉注射	尾静脉(血行转移)	2×10⁶	NSG小鼠	肺转移灶：4-6周	60-80%	靶向肺转移(>50%肺结节)	直接研究血行转移和抗转移疗法	无法观察原发灶进展，需高细胞量
原位切除+转移模型	原发灶(胫骨)切除	原发灶成瘤后	7NOD/SCID	转移灶：术后2-3周	70-90%	肺转移为主(模拟术后复发转移)	模拟临床术后转移，评估辅助治疗	周期长，需二次手术

骨肉瘤细胞系成瘤特性差异对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	接种方式	细胞数量	成瘤时间	成瘤率	转移倾向	优势研究领域
IM-H360	143B	皮下/原位(骨内)	1×10⁶	7-14天	+++	高(肺、肝、骨)	转移机制、药物抗性
IM-H300	Saos-2	原位(骨内)	5×10⁶	4-6周	++	低(局部侵袭)	成骨分化、骨重塑
IM-H258	U2OS	皮下(需Matrigel)	2×10⁶	3-5周	++	极低(罕见转移)	细胞周期调控、放疗响应
IM-H167	MG-63	皮下	5×10⁶	4-8周	++	无	基质互作、基础增殖
IM-H166	HOS	皮下/原位	2×10⁶	2-3周	+++	中(偶发肺转移)	病毒致癌机制

143B细胞成瘤关键影响因素

影响因素	具体因素/机制	具体说明	对成瘤的影响
基因表达与调控	Bcl-2/Bax/Caspase-3	Bcl-2(抗凋亡蛋白)表达下调，Bax(促凋亡蛋白)和Caspase-3(凋亡执行蛋白)表达上调，诱导细胞凋亡。	抑制肿瘤生长，促进凋亡
	Wnt/β-catenin信号通路	β-catenin蛋白水平降低，抑制Wnt通路活性，导致下游增殖相关基因(如cyclin D1)表达下调。	抑制细胞增殖，诱导G0/G1期阻滞
	STAT3	STAT3 mRNA和蛋白水平显著下调，抑制其介导的促增殖和抗凋亡信号。	抑制细胞存活和转移
	PCNA(增殖细胞核抗原)	PCNA表达受抑制，阻碍DNA复制和细胞增殖。	直接抑制肿瘤细胞分裂
信号通路激活	p38 MAPK信号通路	激活p38通路，促进促凋亡蛋白(如cleaved Caspase-3)表达，同时抑制Bcl-2。	诱导凋亡并抑制增殖
信号通路激活	JAK/STAT通路	STAT3活性受抑制，阻断其介导的肿瘤生长和免疫逃逸信号。	抑制肿瘤微环境中的免疫耐受
细胞周期调控	G1期阻滞	通过下调cyclin D1和上调p21，阻滞细胞周期于G1期，抑制DNA合成。	延缓肿瘤生长
细胞周期调控	S/G2期阻滞	顺铂和蟾毒灵联合作用阻滞细胞周期于S期和G2期，抑制有丝分裂。	协同抑制增殖，增强化疗敏感性
肿瘤微环境与转移	细胞迁移与侵袭	抑制MMPs(基质金属蛋白酶)活性或下调迁移相关蛋白(如LAT1)，减少细胞外基质降解和局部浸润。	降低转移潜能
肿瘤微环境与转移	血管生成(VEGF)	肿瘤组织中血管生成因子(如VEGF)分泌增加，促进新生血管形成。	支持肿瘤快速生长和远端转移
代谢重编程	氨基酸转运(LAT1)	LAT1表达下调，减少必需氨基酸(如亮氨酸)的摄取，抑制肿瘤代谢需求。	限制肿瘤细胞增殖和存活
药物干预机制	蟾毒灵联合顺铂	协同上调Bax/Caspase-3，下调Bcl-2，增强S/G2期阻滞。	显著增强凋亡和化疗效果
	冬凌草甲素(ORI)	抑制Wnt/β-catenin通路，下调β-catenin和cyclin D1，激活Caspase-3。	抑制增殖并诱导凋亡
	麦冬皂苷B	激活p38通路，抑制Bcl-2，诱导Caspase依赖性凋亡。	抑制裸鼠皮下成瘤模型中的肿瘤生长

143B成瘤优化策略

优化方向	具体策略	作用机制/操作要点	预期效果
细胞预处理	基因编辑增强致瘤性	过表达促癌基因(如MYC、Ras)或敲除抑癌基因(如p53、PTEN)，激活增殖/抗凋亡信号。	显著提高成瘤率和生长速度
细胞预处理	细胞周期同步化	使用血清饥饿法或化学抑制剂(如胸腺嘧啶阻断)同步细胞周期至G1/S期，增强增殖活力。	提升原位成瘤效率，减少操作误差
动物模型优化	免疫缺陷鼠品系选择	优先选用NOD/SCID或NSG小鼠(T/B/NK细胞缺陷)，降低免疫清除。	提高接种后细胞分裂效率
动物模型优化	接种部位优化	皮下注射(操作简便) vs. 原位(如胫骨内注射，模拟骨肉瘤微环境)。	原位接种增强转移倾向，皮下接种便于监测体积变化
接种条件调整	细胞数量与密度	每点接种1×10⁶~5×10⁶个细胞(根据小鼠品系调整)，避免过高密度导致中心坏死。	平衡肿瘤生长速度与存活率
接种条件调整	基质胶(Matrigel)辅助	细胞悬液与Matrigel(1:1)混合后接种，提供临时ECM支持，促进细胞定植。	减少细胞扩散，提高局部成瘤率
微环境干预	血管生成促进	预注射VEGF或低剂量促血管药物(如贝伐珠单抗)，诱导局部血管新生。	加速肿瘤血供建立，支持快速增殖
微环境干预	炎症微环境模拟	注射前局部使用IL-6或TNF-α，激活促炎信号通路(如NF-κB)，抑制免疫监视。	增强肿瘤细胞免疫逃逸能力
药物/基因干预	促增殖药物联用	联合EGF(表皮生长因子)和胰岛素，激活PI3K/AKT和MAPK通路，驱动细胞周期进展。	缩短肿瘤潜伏期，加速生长
药物/基因干预	代谢重编程诱导	添加高浓度葡萄糖(25 mM)或谷氨酰胺(4 mM)，支持Warburg效应和生物合成。	满足肿瘤细胞代谢需求，避免营养限制性生长停滞
检测与验证	活体成像动态监测	接种荧光/荧光素酶标记的143B细胞，通过活体成像系统(IVIS)定量肿瘤负荷和转移灶。	实时追踪成瘤进程，评估干预效果
检测与验证	组织病理学验证	定期取材进行HE染色、Ki-67(增殖标志)和CD31(血管标志)免疫组化分析。	确认肿瘤恶性表型及微环境特征