4T1-FLuc-puro小鼠乳腺癌细胞成瘤验证

发布时间：2025-05-06 09:58:20 细胞资源库平台访问量：77

乳腺癌细胞是乳腺上皮细胞在基因突变、表观遗传改变及微环境失衡等多因素作用下形成的恶性转化细胞，具有高度异质性，可依据分子标志物(如ER、PR、HER2及Ki-67)分为不同亚型。其显著特征包括增殖失控、代谢重编程、免疫逃逸及转移倾向，其中上皮间质转化(EMT)和肿瘤干细胞特性是导致复发耐药的关键机制。构建乳腺癌成瘤模型(如细胞系异种移植模型、患者来源异种移植模型PDX、类器官及基因工程小鼠模型)对揭示肿瘤发生发展机制至关重要。这些模型可模拟肿瘤微环境互作、评估靶向药物敏感性、探索耐药机制及免疫治疗策略，并为个体化治疗方案筛选和新药临床前评价提供标准化平台，是衔接基础研究与临床转化的重要桥梁。

细胞简介

细胞名称：4T1-FLuc-puro小鼠乳腺癌细胞(FLUC标记)

种属来源：小鼠

组织来源：乳房

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：Luciferase 4T1细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株4T1细胞是从410.4瘤株中未经诱变筛得的6-硫鸟嘌噙抗性细胞株。当4T1细胞注射到BALB/c小鼠中时，4T1细胞会自发产生高转移肿瘤，可转移到肺、肝、淋巴结和大脑，同时在注射部位形成始发灶，诱导转移时不需要摘除始发灶。4T1细胞在BALB/c小鼠中的生长与转移特性与人体中的乳腺癌十分相近，这种肿瘤是人Ⅵ期乳腺癌的动物模型。4T1细胞诱导的肿瘤在手术后及未手术情况下转移的动力学相近，可以用作手术后及未手术模型。4T1细胞诱导的肿瘤模型跟其他肿瘤模型相比，由于4T1细胞的抗6-硫鸟嘌噙特性，微小的转移细胞团(少到仅仅1个)也可以在许多远端器官中检测到，没必要数淋巴结或称重器官。

puro药筛浓度：4T1-FLuc-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(FLuc+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

4T1-FLuc-puro细胞系不同接种方式成瘤特性(仅供参考)

接种方式	接种量(细胞数)	成瘤时间(天)	转移倾向	适用研究方向	优缺点
乳腺脂肪垫原味接种	1×10⁴ - 1×10⁵	5-7天可触诊肿瘤	高(肺、肝、骨转移;21天>80%)	转移机制、肿瘤微环境、免疫治疗研究	优点：模拟原位微环境，转移真实性强; 缺点：需手术操作，技术要求高
皮下接种	1×10⁵ - 5×106	7-10天形成可见瘤块	低(局部生长为主，罕见远处转移)	药物疗效评估、原位肿瘤生长动力学研究	优点：操作简单，便于监测体积; 缺点：转移率低，微环境差异大
尾静脉注射	2×10⁵ - 5×10⁵	不形成原发瘤	快速肺转移(7-14天肺转移灶形成)	血行转移机制、抗转移药物筛选	优点：直接研究转移过程; 缺点：无法观察原发瘤进展
胫骨原位接种	1×10⁴	10-14天骨破坏明显	局部骨转移(伴破骨细胞活化)	乳腺癌骨转移模型、骨靶向治疗研究	优点：模拟骨转移特异性病理; 缺点：需影像学监测，成本高
腹腔注射	5×10⁵ - 1×10⁶	不形成实体瘤	腹腔播散(肝、腹膜转移为主)	肿瘤腹水模型、全身性药物分布研究	优点：适合研究播散性转移; 缺点：无法定量评估原发灶

注意事项

小鼠品系：4T1-FLuc-puro需接种于免疫健全的BALB/c小鼠(同源模型)。

监测方法：荧光素酶活性检测：腹腔注射D-荧光素(150 mg/kg)，通过IVIS成像定量信号强度。

伦理规范：肿瘤体积需符合动物福利上限(通常≤2000 mm³)。

小鼠乳腺癌细胞系成瘤特性差异对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	接种量(细胞数)	成瘤时间(天)	成瘤率	转移倾向	激素受体表达	适用研究方向
IM-M017	4T1	1×10⁴ - 1×10⁶	5-7	>95%	高(肺、肝、骨)	ER-/PR-/HER2-	转移机制、免疫治疗、耐药性研究
IM-M059	EMT6	5×10⁵	10-14	80%-90%	低(局部侵袭)	ER-/PR-/HER2-	放射治疗、化疗敏感性评估
IM-M099	E0771	2×10⁵	7-10	85%-95%	中等(淋巴结转移)	ER+/PR+	激素依赖性肿瘤、内分泌治疗研究
IM-M123	67NR	1×10⁵	7-10	>90%	无	ER-/PR-	原位肿瘤生长、血管生成研究
IML-021	4T1-FLUC-puro	1×10⁴ - 1×10⁶	5-7	>90%	高(肺转移为主)	ER-/PR-/HER2-	活体成像、药物动力学动态监测

4T1-FLuc-puro细胞成瘤关键影响因素

影响因素	具体说明
细胞活性与状态	细胞传代次数过高(>20代)或冻存复苏不当(活性<80%)会导致成瘤延迟或失败
接种细胞数量	接种量过低(<1×10⁴)成瘤率下降;过高可能引发坏死或免疫排斥
接种部位与操作	乳腺脂肪垫原位接种需精准定位，皮下接种过浅易导致细胞渗漏
小鼠品系与免疫状态	需使用BALB/c(同源模型)，免疫缺陷鼠(如NOD/SCID)可能改变转移模式
荧光素酶表达稳定性	长期传代或未加抗生素(Puromycin)维持筛选可能导致荧光素酶信号衰减
实验环境与监测	温度波动、营养不良或应激(如频繁抓取)可能抑制肿瘤生长

4T1-FLuc-puro成瘤优化策略

优化方向	具体策略	预期效果
细胞预处理	- 使用低传代数细胞(<15代)，复苏后培养48小时再接种 - 接种前检测细胞活性(>90%)及荧光素酶活性	提高成瘤率及信号一致性
接种技术优化	- 乳腺脂肪垫接种：麻醉后经第四对乳头旁切口注射，避免损伤血管 - 皮下接种：使用高粘度基质(如Matrigel)减少渗漏	提升原位成瘤效率，减少操作误差
小鼠管理	- 选择8-10周龄雌性BALB/c小鼠，避免激素周期干扰 - 提供高脂饲料(含10%脂肪)促进肿瘤血管生成	缩短成瘤时间，增强转移倾向
荧光素酶维持	- 定期用Puromycin(1-2 μg/mL)压力筛选，防止标记基因丢失 - 活体成像前禁食6小时降低背景噪声	确保信号稳定性，提高成像信噪比
实验条件控制	- 保持恒温(22-24℃)、湿度(40-60%)及12小时光照周期 - 减少人为干扰(如固定监测时间及操作人员)	降低环境应激对肿瘤生长的干扰