HPAC-NLuc-puro人胰腺癌细胞成瘤验证

发布时间：2025-04-25 08:56:09 细胞资源库平台访问量：13

人胰腺癌是一种高度恶性的消化道肿瘤，其中胰腺导管腺癌(PDAC)占90%以上，因其早期症状隐匿、侵袭性强、易发生转移及治疗抵抗性而被称为“癌中之王”。全球范围内，胰腺癌的五年生存率不足10%，其高死亡率与肿瘤复杂的微环境(如致密间质增生、免疫抑制及代谢异常)密切相关，导致传统治疗手段(手术、化疗等)效果有限。构建胰腺癌成瘤模型(如基因工程小鼠模型、患者来源异种移植模型或3D类器官模型)对深入解析其发病机制、筛选有效治疗靶点及评估药物疗效至关重要。这些模型能够模拟肿瘤异质性、微环境互作及治疗抵抗特征，为开发靶向治疗、免疫治疗及个体化精准策略提供可靠平台，最终推动基础研究向临床转化的突破。

细胞简介

细胞名称：HPAC-NLuc-puro人胰腺腺泡上皮癌(NLUC标记)

种属来源：人

组织来源：胰腺

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

背景介绍：Luciferase HPAC细胞稳定表达萤火虫荧光素酶。该细胞株性状稳定，培养时不需要添加抗生素维持。可用作萤火虫荧光素酶活性检测中的阳性对照，也可用于活体动物成像实验。该细胞通过慢病毒转染的方式携带Luc基因。其亲本株是由一名(患有中分化至高分化导管源性胰腺癌)女性患者的原发性肿瘤裸鼠异种移植物中分离。

puro药筛浓度：HPAC-NLuc-puro细胞puro药筛浓度为1.0ug/ml，培养过程中建议使用0.5ug/ml puro维持

培养须知：首次复苏或长期未用嘌呤霉素时，建议用含嘌呤霉素的培养基培养24-48小时以清除非抗性细胞。建议定期备份低代次细胞，并记录荧光素酶活性数据以确保实验一致性。如有特殊需求(如无血清培养)，需逐步驯化并验证基因稳定性。双标记(NLuc+Puro)确保长期基因稳定性，但需持续筛选压力。

HPAC-NLuc-puro细胞在小鼠体内成瘤案例(仅供参考)

接种方法	模型类型	小鼠品系	成瘤率	成瘤时间	肿瘤特性	转移倾向	检测方法
皮下注射(2×10⁶细胞，Matrigel辅助)	异种移植	BALB/c裸鼠	95% (19/20)	3-4周	表达NLuc，可实时监测肿瘤生长动态	局部侵袭，无远处转移	生物发光成像+组织病理
原位注射(1×10⁶细胞，NLUC标记)	原位模型	NSG小鼠	85% (17/20)	4-5周	高分化腺癌，强荧光素酶信号	肝转移(25%)，腹膜播散	活体成像(IVIS)
尾静脉注射(5×10⁵细胞)	转移模型	NOD/SCID	60% (6/10)	2-3周	肺和肝微转移灶，NLuc信号追踪	多器官微转移(肺/肝)	活体成像+免疫组化

同类胰腺癌细胞系成瘤能力对比(仅供参考)

产品货号	细胞系	成瘤率	成瘤时间	转移倾向	应用场景
IM-H157	HPAC	+++	3-5周	低至中度(肝/淋巴结)	高分化，保留胰腺导管腺癌标志物(CK19+)
IML-164	HPAC-NLuc-puro	+++	3-5周	中度(肝/腹膜/肺)	NLUC标记支持活体成像，适合纵向转移追踪
IM-H160	PANC-1	++	6-8周	极低(局部侵袭)	低分化，KRAS突变，耐化疗
IM-H159	MIA PaCa-2	+++	2-3周	无	低分化，缺乏黏液分泌
IM-H165	BxPC-3	++	8-10周	无	KRAS野生型，对EGFR抑制剂敏感
IM-H340	AsPC-1	+++	4-5周	高(腹膜/肝转移)	高侵袭性，EMT表型显著
IM-H154	Capan-1	+	10-12周	低	高分化，保留黏蛋白分泌能力

HPAC-NLuc-puro细胞成瘤影响因素及优化策略

类别	具体因素	影响说明	优化策略
细胞活力与预处理	复苏后细胞活性低，增殖能力下降	冻存/复苏损伤导致凋亡增加，NLuc信号减弱	-优化冻存液配方(含10% DMSO+90% FBS) - 复苏后预培养至对数生长期(≥3代)
宿主免疫状态	免疫排斥(残留T/NK细胞活性)	小鼠品系免疫缺陷不彻底，清除异种移植细胞	- 使用重度免疫缺陷小鼠(如NSG或NOG) - 接种前小鼠辐照(1-2 Gy)降低残留免疫
细胞接种数量	原位或皮下成瘤效率不稳定	细胞数过低(<1×10⁶)导致成瘤延迟，过高(>5×10⁶)引发局部坏死	- 原位接种推荐1-2×10⁶细胞(含Matrigel) - 皮下接种2-3×10⁶细胞
标记基因稳定性	长期传代后NLuc/puro抗性丢失	基因沉默或质粒丢失(尤其未使用抗生素维持)	- 定期用嘌呤霉素(1-2 μg/mL)筛选 - 冻存低代细胞(≤10代)避免基因漂变

常见问题与解决方案

问题	原因	解决方案
细胞污染(细菌/真菌/支原体)	无菌操作不规范或培养基污染	严格无菌操作，定期检测支原体;丢弃污染细胞，更换新批次培养基。
细胞状态差，增殖缓慢	培养基成分不当、传代过度或细胞老化	优化培养基(如添加特定生长因子)，控制传代次数(<20代)，使用新鲜解冻细胞。
注射后无法形成肿瘤	细胞活性低、注射量不足或免疫缺陷小鼠品系不符	确保细胞活性>90%，调整注射量(通常1×10⁶~5×10⁶/小鼠)，使用NOD/SCID等重度免疫缺陷鼠。
成瘤速度差异大	注射部位不均匀(皮下/原位)、细胞悬液温度不当	统一注射部位(如右腋下)，保持细胞悬液在冰上操作，避免长时间室温暴露。
活体成像信号弱或不稳定	荧光素底物(furimazine)剂量不足或成像时间不当	优化底物注射量,注射后1-5分钟成像，避免麻醉过深影响代谢
背景信号干扰	小鼠自发荧光(如食物残留)或仪器参数设置错误	成像前禁食6小时，调整仪器曝光时间/光圈，设置阴性对照组校准背景。

HPAC-NLuc-puro细胞成瘤实验设实例

实验组	处理方式	检测指标
对照组	注射 HPAC-NLuc-puro 细胞 + PBS 或溶剂对照。	基础肿瘤生长曲线、生物发光基线值。
药物治疗组	注射细胞后给予靶向药物(如吉西他滨、PD-1 抑制剂)。	肿瘤体积抑制率、生物发光信号衰减、生存期延长。
基因干预组	使用 CRISPR/shRNA 敲除特定基因(如 KRAS)的 HPAC-NLuc-puro 细胞进行成瘤实验。	基因功能与肿瘤生长的相关性分析(如转移能力变化)。