小鼠脾脏CD3+T淋巴原代细胞提取分离分选培养介绍

背景简介

T淋巴细胞是来源于骨髓的多能干细胞，在骨髓中由其前体细胞产生，随后迁移到胸腺内，在胸腺激素的诱导下分化成熟，成为具有免疫活性的T细胞。

作为淋巴细胞的主要组分，T细胞具有多种生物学功能，如直接杀伤靶细胞，辅助或抑制B细胞产生抗体，是身体中抵御各种病原微生物感染、抑制肿瘤形成的“斗士”。

基本信息

细胞名称：小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞

分离方法：磁珠分选

组织来源：C57小鼠

细胞形态：圆形、淋巴母细胞样

生长特性：悬浮生长

小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞特点

1.细胞杀伤

与靶细胞特异性结合，通过释放颗粒酶，穿孔素等，破坏靶细胞膜，直接杀伤靶细胞;

2.免疫应答

通过细胞表面的T细胞受体，识别抗原提呈细胞提呈的抗原，从而发挥免疫学功能;

3.调节B细胞分化

分泌细胞因子、蛋白质或缩氨酸用来调控其它的免疫细胞;如白介素，可以使得B细胞分化成浆细胞;

4.免疫记忆功能

机体受到病原体的二次侵入时，记忆T细胞可更加迅速的再次破坏靶细胞即受病菌或病毒感染的细胞，释放出靶细胞中的抗原

5.产生细胞因子

T淋巴细可产生多种细胞因子，如干扰素、转移因子、白细胞介素等，这些淋巴因子，具有杀伤肿瘤细胞，刺激造血组织，对抗化疗副作用等功能。

小鼠脾脏CD3+T淋巴原代细胞分离培养操作步骤

材料准备

4-6周C57小鼠、BeaverBeads™ 小鼠 CD3+T淋巴细胞分选试剂盒 、红细胞裂解液、眼科镊、眼科剪、细胞筛网、PBS缓冲液、小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞专用培养基。

培养基和缓冲液

将培养基和添加剂置于室温，使用前室温中预温10-30 min。HBSS缓冲液缓冲液预冷，紫外照射完毕后，75%酒精消毒超净台，超净台通风10 min以上。

培养瓶

准备25cm2的培养瓶

小鼠脾脏CD3+T淋巴细胞操作步骤

1.将小鼠脱颈处死，在75%乙醇中浸泡5min，使用剪刀打开小鼠腹腔，取出小鼠脾脏，使用PBS冲洗两遍。

2.在70μm细胞筛网上研磨脾脏，以预冷的PBS 冲洗细胞筛网，收集细胞悬液于 50 mL离心管中，500 g，离心5 min。

3.离心结束，弃上清，加入5 mL红细胞裂解液(ACK)，室温裂解5 min，再加入20 mL PBS，500 g， 离心5 min。

4.将脾细胞重悬于PBS，细胞悬液用70 μm 细胞筛网过滤后，计数，调整细胞密度为1×108 cells/ml。

5.按照每100 μL 细胞悬液(1×107个细胞)对应2 μL Biotin-Antibody Mix加入无菌流式管底部，混匀后 4°C 孵育10 min。

6.孵育完成后，在流式管中加入 20 μL BeaverBeads® Streptavidin (1×107个细胞) (使用前涡旋振荡重悬磁珠，确保磁珠完 全重悬)，混匀后4°C 孵育10 min。

7.孵育完成后，在流式管中加入2.5 mL 分选buffer，用移液器上下混合吹打5次混匀(避免剧烈振荡或者 上下颠倒混匀)。

8.将含有细胞的流式管置于磁力架上，静置5 min。将细胞悬液轻柔倒入一个无菌离心管中(倾倒过程中流式管不要脱离磁力架)，此细胞悬液中即包含 纯化的小鼠CD3+T细胞，500 g，离心5 min。离心后弃上清，收集细胞， 将细胞重悬于培养基中，即可用于后续扩增。

磁珠阴选

小鼠脾脏CD3+T淋巴原代细胞流式鉴定

CD3是成熟T细胞的标记物,是识别CD3+T细胞最可靠的标志，此外，也可通过检测TCR来识别CD3+T细胞。

小鼠脾脏CD3+T淋巴原代细胞培养注意事项

轻轻吹打T25细胞培养瓶中的培养基使细胞悬浮。

吸取培养瓶中所有培养基，在离心机中以1000转离心5 min。

弃去上清，加入新的培养基重悬，于培养瓶中培养。

建议1：2传代。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。

收集细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5x106~ 1x107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1 mL细胞悬液，注意冻存管做好标识。

将冻存管放入-80℃冰箱，24 h后转入液氮灌储存。

小鼠脾脏CD3+T淋巴原代细胞研究应用

CD3+T细胞可代表成熟的T淋巴细胞在抗肿瘤治疗中‌T细胞是人体免疫系统的重要组成部分，‌通过识别和攻击被感染的细胞或异常细胞，‌在保护机体免受病原体和肿瘤侵害方面发挥着关键作用。

实验研究

通过分离T淋巴细胞可用于在体外研究T淋巴细胞引起炎症反应的机制，从而通过药物等方法抑制T细胞活力缓解患者自身的免疫病理损伤。

TIL（肿瘤浸润淋巴细胞）疗法

‌从患者体内提取肿瘤组织中的T细胞，‌并在实验室中扩增和改造，‌使其能够更有效地识别和攻击癌细胞。

TCR（T细胞受体）疗法

‌通过提取患者的T细胞，‌并在其中加入一个可以表达T细胞受体的基因，‌使T细胞产生特异性的T细胞受体，‌从而能够追踪并杀死癌细胞。

CAR-T（嵌合体抗原受体T细胞）疗法

‌从患者血液中提取T细胞，‌通过基因改造加入一种制造嵌合体抗原受体的基因，‌使改造后的T细胞能够特异性地追踪并杀死癌细胞。