MC38细胞用什么培养基,形态及到货细胞脱落怎么处理

MC38小鼠结肠癌细胞背景简介

MC38，小鼠结肠癌细胞，又名MCA38。来源于长期暴露于致癌物DMH (1,2-二甲基肼二盐酸盐)而患有结肠腺癌的C57BL6小鼠结肠肿瘤组织，并可高水平表达人癌胚抗原(CEA )。结肠直肠癌(CRC)是全球癌症死亡的第二大原因。而啮齿动物结肠癌模型研究是新药物临床前评估的有效方法。

MC38小鼠结肠癌细胞形态特征

MC38细胞形态为贴壁细胞，上皮细胞样，具有良好的致瘤性，皮下MC38肿瘤的体内倍增时间约为4天，其生长速率适中，可提供受试药物长达三周的给药窗口，以激发其抗肿瘤活性。

MC38小鼠结肠癌细胞产品信息

细胞名称：MC38小鼠结肠癌细胞

细胞别称：MCA-38; MCA 38; MCA38; MC38; Mouse Colon 38; Murine Carcinoma-38; Colon 38; Colon-38; Colon38; C38

种属来源：雌性；C57BL/6小鼠，结肠

特性特征：贴壁生长，上皮细胞样

STR位点信息：Mouse STR 4-2：20.3;Mouse STR 5-5：16,17：Mouse STR 6-4：18;Mouse STR 6-7：15,16;Mouse STR 12-1：17;Mouse STR 15-3：22.3,23.3;Mouse STR 18-3：15,16;Mouse STR X-1：27

保藏机构：Kerafast;Ubigene;中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心

培养基：DMEM+10% FBS+PS+1%NEAA+1%丙酮酸钠+1%谷氨酰胺+1%HEPES

培养条件气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

mc38细胞培养步骤

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：高糖DMEM基础培养基，FBS，PS，NEAA，丙酮酸钠，谷氨酰胺，1%HEPES，胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

mc38细胞复苏方法

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

mc38细胞传代方法

1.从培养箱拿出mc38细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

2.打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

3.用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

4.用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对mc38细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

5.将装有细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

6.确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

mc38细胞冻存方法

从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

a.收集mc38 cell及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据mc-38细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

mc38细胞培养常见问题

mc38细胞收到货脱落怎么处理?

mc38细胞本身贴壁不牢，运输脱落或者回缩都是正常现象。收到细胞后请先置于培养箱中稳定4h后再进行下一步处理，不建议放置培养箱过夜后处理。

如果mc38细胞密度大于80%，正常传代就可以，脱落的细胞也要收集.

mc38细胞来源于什么小鼠

mc38细胞来源于雌性的C57BL/6小鼠。

mc38细胞消化时间

mc38细胞消化时间1-2分钟，不同胰酶消化时间不同，以实际消化时间为准。

mc38细胞和ct26的区别

CT26 细胞系模型是一种常用于癌症研究的小鼠同源移植结直肠癌模型。CT26细胞系最早由Balb/c小鼠的结肠腺癌组织中分离出来，将其接种于Balb/c小鼠构建而成的移植瘤模型被广泛用于肿瘤生物学、药物治疗以及免疫治疗研究等领域。

MC38 细胞系模型是一种用MC38细胞系在小鼠体内进行同源小鼠移植结肠癌模型。MC38细胞最早是由C57BL/6小鼠的结肠腺癌组织中分离获得的，将其接种于C57BL/6小鼠构建而成的移植瘤模型常用于研究肿瘤生物学和肿瘤的免疫治疗等。

MC38细胞用什么培养基

MC38细胞用的培养基是：高糖DMEM+10% FBS+PS+1%NEAA+1%丙酮酸钠+1%谷氨酰胺+1%HEPES。

MC38小鼠结肠癌细胞应用

MC38细胞对免疫调节抗体具有良好的应答特性，证实了肿瘤微环境可修饰免疫激活。因此，MC38被定位为功能强大的免疫肿瘤学模型，在药物研发中具有重要的用途，常用于抗肿瘤药物在体内的免疫功能研究。

MC38 细胞是来自 C57BL/6 小鼠结肠腺癌细胞系，贴壁生长并具有成纤维细胞形态。将MC38 细胞植入C57BL/6 小鼠或免疫功能低下的小鼠后会形成肿瘤和转移，多用作结直肠癌发生及转移方向研究，并成为肿瘤药效验证的常用途径。

MC38细胞参考文献

1.Zhang C.-F., Yu X.-J., Wang B.-Y., Chen H.-W., Hu C.-E.

Whole mitochondrial genome sequence of a rat colorectal cancer MCA38 cell line.

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