SW1990细胞培养条件,消化时间,形态图片

SW1990人胰腺癌细胞简介

人胰腺癌细胞SW1990是1978年从一II级胰腺癌的脾转移中分离建系。可在裸鼠中成瘤。胰腺癌(Pancreatic carcinoma)主要指胰外分泌腺腺癌，是胰腺恶性肿瘤中最常见的一种，约占全身各种癌肿的1%～4%，占消化道恶性肿瘤的8%～10%。通常论及胰腺癌时也同时论及壶腹周围癌，前者为胰腺本身，后者则包括胆总管下端、壶腹、十二指肠乳头及胰头的癌，其恶性程度以胰腺癌为最高，其数量也以胰腺癌为最多，约占3/5。有报道该细胞只有29%的克隆形成率。

SW1990人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：SW1990人胰腺癌细胞

细胞别称：SW-1990; SW 1990; 人胰腺癌细胞

种属来源：人

组织来源：胰腺

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

致瘤性：Yes, forms tumors in nude mice

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：10,12;D2S1338：23;D3S1358：16;D5S818：12,13;D7S820：9,10;D8S1179：11,14;D13S317：8,12;D16S539：13;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：31;FGA：26;PentaD：11;PentaE： 5,7;TH01：9.3;TPOX：8,9;vWA：17

保藏机构：ATCC; CCTCC; CLS; KCB; Ubigene

培养基：90%L-15+10%FBS+PS

培养条件：气相：100%空气;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

SW1990人胰腺癌细胞形态特征

SW1990细胞形态特征上皮细胞样，贴壁生长，据报道该细胞集落形成率为29%。SW 1990[SW-1990，SW1990]细胞可以用于3D细胞培养和癌症研究。

SW1990人胰腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：L-15培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

SW1990细胞复苏操作方法

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLSW1990细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将SW1990细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定SW1990细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

SW1990细胞传代操作方法

从培养箱拿出SW1990细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当SW1990细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

将装有SW1990细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

7)确定SW1990细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

SW1990人胰腺癌细胞传代小贴士

SW1990细胞培养不能通入CO2，如果没有条件准备空气气相100% 的培养箱，可以采用不透气密封盖的T25培养瓶来培养，培养过程中每天将细胞拿出培养箱换1-2次空气。

SW1990人胰腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出SW1990细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

SW1990细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在SW1990细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

SW1990人胰腺癌细胞培养常见问题

SW1990细胞用什么培养基

SW1990细胞培养基90%L-15+10%FBS+PS。

sw1990细胞消化时间

SW1990细胞不好消化，放培养箱8-10分钟，1990本身就是很多空泡存在的，一般难消化的细胞对胰酶不敏感，很难过度消化，除非很夸张那种十几二十分钟半个小时，不同胰酶品牌消化时间存在差异，所以以实际为准。

SW1990人胰腺癌细胞应用

SW 1990可以用于姜黄素增强吉西他滨抗胰腺癌的机制研究

研究是基于肿瘤增殖,迁移及侵袭探讨姜黄素是否可在体内外增强吉西他滨对胰腺癌的抗肿瘤作用及其机制的研究,为临床治疗胰腺癌提供理论及实验依据。

方法

1.Western blot法检测胰腺癌细胞株AsPC-1,BxPC-3,Panc-1和SW1990中Id1蛋白表达;应用CCK8法获得姜黄素、吉西他滨的IC50值,检测姜黄素和/或吉西他滨对胰腺癌细胞增殖的影响;Compusyn软件分析姜黄素与吉西他滨的协同指数,确定两者在联合用药中的剂量;划痕实验检测姜黄素和/或吉西他滨对胰腺癌细胞迁移能力的影响;Transwell实验检测姜黄素和/或吉西他滨对胰腺癌细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测姜黄素和/或吉西他滨对胰腺癌细胞内EMT相关蛋白(MMP9,SNAIL,E-cadherin)及Src/Id1通路蛋白(Id1,p-Src,Src)表达水平的影响;

2. 应用CCK8法获得Srcinhibitor 1(Src-I1)的IC50值,检测Src-I1对胰腺癌胰腺癌细胞增殖的影响;Transwell实验检测Src-I1对细胞侵袭能力的影响,Western blot法检测Src-I1对胰腺癌细胞内Src/Id1通路蛋白(Id1,p-Src,Src)表达水平的影响;构建Id1过表达(AsPC-1-Id1)及敲减细胞株(SW1990-shId1),qRT-PCR检测Id1 mRNA表达水平。Transwell实验检测过表达及敲减Id1对细胞侵袭能力的影响。Western blot法检测过表达及敲减Id1对胰腺癌细胞内EMT相关蛋白(MMP9,SNAIL,E-cadherin)及Id1蛋白表达水平的影响;

3. 体外培养胰腺癌细胞AsPC-1和SW1990,分为对照组,TGF-β1组,TGF-β1+姜黄素组,TGF-β1+吉西他滨组,以及TGF-β1+姜黄素+吉西他滨组;Transwell实验检测药物对细胞侵袭能力的影响;Western blot法检测药物对胰腺癌细胞内EMT相关蛋白(MMP9,SNAIL,E-cadherin)及Src/Id1通路蛋白(Id1,p-Src,Src)表达水平的影响;

4. 构建胰腺癌细胞SW1990裸鼠皮下移植瘤模型,分为对照组,姜黄素组,吉西他滨组,以及姜黄素+吉西他滨组;观察药物在体内对裸鼠移植瘤生长的影响;TUNEL检测药物对裸鼠移植瘤凋亡的影响;免疫组织化学法检测药物对裸鼠移植瘤中Id1,E-cadherin及Ki-67表达水平的影响;Western blot法检测药物对裸鼠移植瘤中凋亡相关蛋白(Bax,Bcl-2,Caspase-3),EMT相关蛋白(MMP9,SNAIL,E-cadherin)及Src/Id1通路蛋白(Id1,p-Src,Src)表达水平的影响。

结果

1.在胰腺癌细胞株AsPC-1,BxPC-3,Panc-1和SW1990中,SW1990细胞中Id1蛋白表达最高,AsPC-1细胞中表达最低;体外细胞实验表明,姜黄素与吉西他滨有协同效应,相较于单独应用姜黄素或者吉西他滨,姜黄素可显著增强吉西他滨在胰腺癌细胞的增殖、迁移及侵袭方面的抑制作用;并且姜黄素增强了吉西他滨下调胰腺癌细胞内MMP9,SNAIL,Id1,p-Src蛋白的表达,同时上调E-cadherin蛋白的表达的能力;

2. Src-I1显著抑制了胰腺癌细胞的增殖与侵袭能力,并显著降低了胰腺癌细胞株中的Id1及p-Src蛋白表达;慢病毒构建的Id1过表达胰腺癌细胞株中,Id1 mRNA显著上调,Id1,MMP9及SNAIL蛋白表达显著上调,E-cadherin蛋白表达显著下调;在慢病毒构建的Id1敲减胰腺癌细胞株中,Id1 mRNA显著下调,Id1,MMP9及SNAIL蛋白表达显著下调,E-cadherin蛋白表达显著上调;Transwell实验证实Id1敲减后胰腺癌癌细胞SW1990侵袭力显著减弱;相反,Id1过表达胰腺癌细胞AsPC-1侵袭力显著增强;

3.姜黄素和/或吉西他滨可以抑制TGF-β1诱导的胰腺癌细胞的侵袭能力;胰腺癌细胞经TGF-β1作用后,MMP9,SNAIL,Id1及p-Src蛋白表达相较于对照组显著上调,E-cadherin蛋白表达显著下调,后经姜黄素、吉西他滨、姜黄素+吉西他滨处理后,MMP9,SNAIL,Id1及p-Src蛋白表达相较于TGF-β1处理的胰腺癌细胞显著下调,E-cadherin蛋白表达显著上调;与单独应用姜黄素或吉西他滨相比,姜黄素+吉西他滨组显著抑制TGF-β1诱导的胰腺癌细胞侵袭,下调TGF-β1诱导的胰腺癌内MMP9,SNAIL,Id1及p-Src蛋白表达,以及上调E-cadherin蛋白表达的能力。

用于蛋白酶激活受体2在人胰腺癌细胞SW1990增殖及侵袭转移过程中的作用研究

采用侵袭转移能力较强的人胰腺癌细胞株SW1990为靶细胞,初步探讨PAR-2促进胰腺癌侵袭和转移的可能的分子机制。

方法:RT-PCR法和免疫细胞化学染色法检测SW1990细胞中PAR-2 mRNA及蛋白的表达情况。绘制SW1990细胞生长曲线,MTT法检测胰蛋白酶和PAR-2激动肽SLIGKV作用前后SW1990细胞增殖情况,并确定合适的各药物浓度和作用时间。流式细胞术(FCM)检测各实验组细胞周期分布。Transwell小室法检测各组细胞侵袭和迁移能力。RT-PCR法检测胰药物作用前后MMP-2、MMP-9、VEGF-A、VEGF-C、IL-8 mRNA表达的变化。

明胶酶谱法检测胰蛋白酶和SLIGKV作用细胞前后MMP-2、MMP-9明胶酶活性的变化。ELISA法检测药物干预SW1990细胞8h、16h、24h、32h后分别收集各实验组细胞上清液,检测各组细胞相对应的各个时间段上清液中VEGF-A、VEGF-C及IL-8的蛋白含量变化。结果:PAR-2在胰腺癌细胞SW1990细胞中高表达。

参考文献

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[5]段泽星.蛋白酶激活受体2在人胰腺癌细胞SW1990增殖及侵袭转移过程中的作用研究[D].河北医科大学,2011.