HPAC细胞形态,培养基,复苏传代冻存操作步骤介绍

HPAC人胰腺癌细胞背景简介

HPAC是一种胰腺癌上皮细胞系，于1985年从一名患有导管起源的中分化至高分化胰腺癌的女性胰腺头部切除的原发性肿瘤的裸鼠异种移植物中衍生出来。

HPAC人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：HPAC人胰腺癌细胞

细胞别称：HPAC；人胰腺癌细胞；人胰腺腺泡上皮癌

种属来源：人，64岁

组织来源：胰腺

形态特性：贴壁生长，上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：13;D13S317：11;D16S539：9，10;D18S51：16;D19S433：14;D21S11：30;D2S1338：19，23;D3S1358：15，17;D5S818：12;D7S820：10，12;D8S1179：12，14;FGA：24;TH01：9.3;TPOX：10，11;vWA：15，17;

保藏机构：ATCC; BCRC

培养基：DMEM/F12+5%FBS+0.002 mg/ml 胰岛素+ 0.005 mg/ml 转铁蛋白+40 ng/ml 氢化可地松+10 ng/ml 表皮生长因子

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

倍增时间：~23-44 hours

致瘤性：Yes, the cells form tumors in athymic nude mice at the site of inoculation which are histologically similar to the tumor of origin. Yes, the cells have a colony forming efficiency of 64% on plastic and 3.2% in agarose.

受体表达情况：epidermal growth factor (EGF), expressed; glucocorticoid, expressed; epidermal growth factor (EGF); glucocorticoid

基因表达情况：HPAC cells are positive for keratin and negative for vimentin and chromogranin A.

HPAC人胰腺癌细胞形态图片

HPAC人胰腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs，DMEM/F12+5%FBS+0.002 mg/ml 胰岛素+ 0.005 mg/ml 转铁蛋白+40 ng/ml 氢化可地松+10 ng/ml 表皮生长因子

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

HPAC人胰腺癌细胞复苏步骤

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLHPAC细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将HPAC细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定HPAC细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

HPAC人胰腺癌细胞传代操作

从培养箱拿出HPAC细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当HPAC细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

1.打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

2.用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

3.用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

4.将装有HPAC细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5.确定HPAC细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

HPAC人胰腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出HPAC细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

细胞冻存步骤

a.收集HPAC细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据HPAC细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在HPAC细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

HPAC人胰腺腺泡上皮癌形态特征

1.细胞呈梭形或多边形，细胞边界清晰，细胞质呈嗜酸性，细胞核位于细胞中央，染色质呈颗粒状。

2.细胞表面有许多微小的突起，这些突起可能是细胞与周围细胞或细胞外基质相互作用的结构。

3.在细胞培养过程中，HPAC细胞可形成互相连接的细胞网络，这种结构有助于细胞之间的物质传递和信息交流。

HPAC人胰腺癌细胞的功能和应用

HPAC 细胞在生物学和医学研究中具有广泛的应用价值，主要表现在以下几个方面:

1.作为肺组织干细胞的研究模型:HPAC细胞具有较强的增殖能力，可以用于研究肺组织干细胞的生物学特性和分化调控机制。

2.肺疾病治疗:HPAC细胞可分化为肺泡上皮细胞、肺毛细血管内皮细胞等肺组织细胞，有望用于肺疾病的治疗，如慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化等。

3.肺组织工程:HPAC 细胞可用于制备生物材料，如组织工程肺、肺支架等，用于肺组织的修复和再生。

4.药物筛选和毒性评价:HPAC 细胞可用于药物筛选和毒性评价，为药物研发提供实验依据。

HPAC细胞参考文献

PubMed=25939163; DOI=10.1007/BF02631438

Gower W.R. Jr., Risch R.M., Godellas C.V., Fabri P.J.

HPAC, a new human glucocorticoid-sensitive pancreatic ductal adenocarcinoma cell line.

In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 30:151-161(1994)

PubMed=15367885; DOI=10.1097/00006676-200410000-00004

Loukopoulos P., Kanetaka K., Takamura M., Shibata T., Sakamoto M., Hirohashi S.

Orthotopic transplantation models of pancreatic adenocarcinoma derived from cell lines and primary tumors and displaying varying metastatic activity.

Pancreas 29:193-203(2004)

DOI=10.4172/jpb.1000057

Yamada M., Fujii K., Koyama K., Hirohashi S., Kondo T.

The proteomic profile of pancreatic cancer cell lines corresponding to carcinogenesis and metastasis.

J. Proteomics Bioinformatics 2:1-18(2009)