CFPAC-1细胞培养条件,正常状态图片

CFPAC-1人胰腺癌细胞背景简介

CFPAC-1是一种胰腺管腺癌细胞系，是从一个26岁的白人男性囊性纤维变性(CF)患者的肝转移灶中建立的。这种细胞系表达囊性纤维变性跨膜调节因子(CFTR)，并且具有上皮样形态，顶端微绒毛极化。此外，CFPAC-1细胞还表达胰腺管细胞特征性的细胞角蛋白和癌胚抗原，其倍增时间为30-32小时。

CFPAC-1细胞是亚3倍体的细胞系，36%的细胞的染色体模式数为75。这些细胞在传代至24代时可以在免疫抑制小鼠中致瘤。因此，CFPAC-1细胞在医学研究和实验室环境中常被用于模拟和研究胰腺管腺癌的生物学特性，以及评估新药物或治疗方法对胰腺管腺癌的疗效。

CFPAC-1人胰腺癌细胞形态特征

CFPAC-1人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：CFPAC-1人胰腺癌细胞

细胞别称：CFPac-1; CF PAC-1; CF-PAC1; CF-Pac1; CF Pac1; CFPAC1; CFPac1; CFPAC;人胰腺癌细胞

种属来源：人，男;26岁

组织来源：胰腺管腺癌，肝转移

特性特征：贴壁生长，上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X，Y;CSF1PO：10;D13S317：12;D16S539：9，11;D18S51：12;D19S433：13，15;D21S11：30，31.2;D2S1338：18，23;D3S1358：16;D5S818：10，11;D7S820：8，10;D8S1179：11，15;FGA：21，22;TH01：8;TPOX：8;vWA：17;

保藏机构：ATCC; CRL-1918 ECACC; 91112501；中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心

培养基：IMDM+10%FBS+1%双抗

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

倍增时间：~30-45 hours

致瘤性：Yes, in nude mice (passage 34)

抗原表达情况：CA19-9 antigen, 12000 units/mL, epithelial keratins

基因表达情况：carcinoembryonic antigen (CEA), 9ng/mL; pancreatic oncofetal antigen (POA), 28ng/mL; adenocarcinoma associated antigen (ACAA), 5000ng/mL; CA 19-9 antigen, 12000 units/mL; epithelial keratins

染色体：54~71

CFPAC-1人胰腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：IMDM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

CFPAC-1人胰腺癌细胞复苏步骤

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLCFPAC-1细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将CFPAC-1细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定CFPAC-1细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

CFPAC-1人胰腺癌细胞传代操作

1.从培养箱拿出CFPAC-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当CFPAC-1细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

2.打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

3.用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

4.用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

5.将装有CFPAC-1细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

6.确定CFPAC-1细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

CFPAC-1人胰腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出CFPAC-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在CFPAC-1细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

cfpac-1胰腺癌细胞培养常见问题

cfpac-1胰腺癌细胞胰酶消化多久

cfpac-1胰腺癌细胞不会难消化，一般培养箱放置1-2分钟，不同的胰酶消化时间不同，以实际为主。

cfpac1细胞用什么培养基

cfpac1细胞基础培养基IMDM+10%FBS+1%双抗。

CFPAC-1人胰腺癌细胞应用

CFPAC-1可以用于蟾毒灵通过诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞在胰腺癌细胞中发挥抗肿瘤作用

蟾毒灵对胰腺癌细胞凋亡的影响及可能的分子机制诱导细胞凋亡是很多抗肿瘤药物抑制肿瘤细胞增殖的重要机制。我们知道,凋亡过程受到凋亡促进分子及凋亡抑制分子的共同调控,其中研究较多的凋亡抑制分子为Bcl-2,而凋亡促进分子为P53,其他与凋亡调控相关的分子有Bax、Bcr-abl及PML-RARa等。近年来,越来越多的报道证明热休克蛋白可以通过调控凋亡信号通路中的关键分子发挥抗凋亡作用。Hsp27是小分子热休克蛋白家族中的一员,它可以在不同的水平影响内源性和外源性凋亡通路抑制细胞的凋亡促进肿瘤的发生发展。因此,研究以Hsp27为靶点的药物对肿瘤的治疗具有重要意义。

如前所述,蟾毒灵可以在多种肿瘤细胞中通过调控不同的分子通路诱导细胞凋亡抑制肿瘤细胞的增殖,而最近的一项研究表明蟾毒灵可以通过靶向抑制Hsp27在骨肉瘤细胞中诱导凋亡。我们感兴趣的是蟾毒灵对胰腺癌细胞凋亡的影响及其作用机制。

选用PANC-1和CFPAC-1两株胰腺癌细胞为模型,以不同浓度的蟾毒灵(OnM,50nM,100nM,200nM)作用于胰腺癌细胞48h,以适当方法收集细胞,用流式细胞术检测细胞凋亡率的改变;利用western blotting技术检测PANC-1和CFPAC-1细胞中凋亡相关蛋白及其上游调控分子表达水平的改变。流式检测结果显示,随着药物浓度的增加,PANC-1和CFPAC-1细胞的凋亡比率增加,即蟾毒灵可以诱导胰腺癌细胞发生凋亡,进而抑制肿瘤细胞的增殖。Western blotting结果表明,经蟾毒灵处理后,Hsp27及其下游分子p-Akt在胰腺癌细胞中下调。

同时,该研究证明,经药物处理后,pro-caspase-3和pro-caspase-9被激活,而Bax表达水平升高,Bcl-2表达下降,即Bax/Bcl-2的比值增高。根据上述实验结果,推测蟾毒灵可能通过抑制Hsp27,进而调控其下游关键的凋亡相关蛋白最终引起细胞发生凋亡。

参考文献

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