capan-2细胞不好消化,生长特点,形态特征介绍

Capan-2人胰腺癌细胞背景简介

Capan-2细胞1975年建系，来源于一位名为J Fogh的56岁白人男性患者。

Capan-2人胰腺癌贴壁细胞系是一种来源于人类胰腺癌的贴壁细胞系。这些细胞系是通过将胰腺癌组织样本移植到实验室培养皿中，并使用特定的生长条件和培养基来分离和培养的。

Capan-2人胰腺癌贴壁细胞系通常用于研究胰腺癌的发生、发展和治疗。这些细胞系可以提供一个体外模型，用于评估新的抗癌药物的疗效，以及研究肿瘤细胞的生物学特性和分子机制。

在临床实践中，医生可能会使用Capan-2人胰腺癌贴壁细胞系进行诊断和治疗决策。例如，通过分析这些细胞系的基因表达谱，可以帮助确定患者的癌症类型和分级，从而指导个体化的治疗方案。此外，研究人员还可以利用这些细胞系进行药物筛选和毒性测试，以寻找新的抗癌药物或治疗方法。

Capan-2人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：Capan-2人胰腺癌细胞

细胞别称：CaPan-2; CAPAN-2; Capan 2; CAPAN 2; Capan2; CAPAN2;人胰腺癌细胞

种属来源：人

组织来源：胰腺

形态特性：贴壁生长，上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11,12;D2S1338：19,25;D3S1358：17,18;D5S818：11,12;D7S820：9,11;D8S1179：12,13;D13S317：11,12;D16S539：9,13;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：31;FGA：21,24;Penta D：13,15;Penta E：11;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：16,17;

保藏机构：ATCC; HTB-80，BCRJ; 0060，CLS; 300144，DSMZ; ACC-245，IZSLER; BS TCL 10，KCLB; 30080

培养基：MCCOYS 5A+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

Capan-2人胰腺癌细胞形态特征

capan-2细胞形态特征成片生长，且生长速度较慢。

Capan-2人胰腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：MCCOYS 5A培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

Capan-2人胰腺癌细胞复苏步骤

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLCapan-2细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将Capan-2细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定Capan-2细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

Capan-2人胰腺癌细胞传代操作

从培养箱拿出Capan-2细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当Capan-2细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

将装有Capan-2细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

确定Capan-2细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

Capan-2细胞传代小贴士

1. Capan-2细胞比较难消化，且消化后贴壁时间较长，因此传代处理后48h内尽量不要移动，防止影响贴壁。

2. Capan-2细胞易聚团成斑块状生长，生长非常缓慢，偶尔有少量细胞飘着是属正常现象，保持营养充足即可。

Capan-2人胰腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出Capan-2细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在Capan-2细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

Capan-2人胰腺癌细胞培养常见问题

capan-2细胞不好消化

capan-2细胞比较难消化，放置培养箱消化5-8min，不同的胰酶消化时间存在差异，capan-2消化后贴壁时间较长，因此传代处理后48h内尽量不要移动，防止影响贴壁。

capan-2用什么培养基

capan-2细胞培养基：MCCOYS 5A+10% FBS+PS

capan-2细胞一分二多久长满

capan-2细胞生长非常缓慢，一分二的话，一般7天左右长满，capan-2细胞易聚团成斑块状生长，偶尔有少量细胞飘着是属正常现象，保持营养充足即可。

capan-2细胞生长特点

capan-2细胞中间连成一片，capan-2细胞形态特征成片生长，且生长速度较慢

Capan-2人胰腺癌细胞应用

Capan-2人胰腺癌贴壁细胞系可以用于KRT18增强c-Myc通路促进胰腺癌增殖、侵袭、转移的分子机制研究

收集36对未经放化疗的新鲜胰腺癌及癌旁组织样本,通过Western blot实验和免疫组化实验检测本研究中KRT18的表达量。在胰腺正常细胞HPNE和4种胰腺癌细胞As PC-1、CAPAN-2人胰腺癌贴壁细胞系、PANC-1、SW1990中通过q PCR实验和Western blot实验检测KRT18基因m RNA和蛋白表达水平。为进一步研究KRT18对胰腺癌细胞恶性表型的影响。

本研究使用si RNA(si KRT18-1、si KRT18-2、si KRT18-3)分别转染As PC-1细胞和CAPAN-2人胰腺癌贴壁细胞系细胞。通过q PCR和Western blot实验检测si KRT18-1、si KRT18-2、si KRT18-3在As PC-1细胞和CAPAN-2人胰腺癌贴壁细胞系细胞中的敲减效率。为了明确KRT18对胰腺癌细胞增殖的影响,我们首先观察在细胞转染了KRT18 sh RNA后的CCK-8实验和克隆形成实验的变化。

为了明确KRT18对胰腺癌细胞迁移的影响,我们观察在细胞转染了KRT18 sh RNA后的伤口愈合实验的变化。为了明确KRT18对胰腺癌细胞侵袭的影响,我们观察在细胞转染了KRT18 sh RNA后的Transwell实验的变化。EMT通路是在癌细胞中发挥着促进肿瘤转移作用最显著和最重要的通路之一。

为了确认KRT18是否通过调控EMT信号通路的活化影响As PC-1和CAPAN-2人胰腺癌贴壁细胞系细胞转移。我们通过Western blot检测各组KRT18、E-钙粘蛋白、N-钙粘蛋白、波形蛋白及Snail的蛋白表达水平。由于在第一部分的研究中,我们发现c-Myc通路在高代谢亚型中明显激活,而且c-Myc通路是在癌细胞中发挥着促癌作用最显著和最重要的通路之一。可影响细胞的增殖、细胞周期、凋亡等多种过程。

为了进一步确认KRT18是否通过调控c-Myc信号通路的活化影响As PC-1和CAPAN-2人胰腺癌贴壁细胞系细胞转移。我们通过Western blot检测各组KRT18和c-Myc的蛋白表达水平。最后,为了进一步确定KRT18促进胰腺癌细胞增殖、迁移、侵袭和转移是否通过c-Myc通路介导。首先过表达KRT18,然后检测c-Myc通路是否激活以及增殖、迁移、侵袭的表型是否被促进,最后通过c-Myc通路抑制剂检查这些被促进的过程是否得到有效回复。通过这样的rescue回复实验,检验c-Myc通路是否可以介导KRT18的功能。为了进一步明确其在胰腺癌细胞中的作用,我们通过构建10只裸鼠胰腺癌移植瘤动物模型,在体内探究KRT18对胰腺癌肿瘤的生长作用。Western blot实验和IHC实验检测不同模型分组组织中KRT18的表达量。

参考文献

[1] Decreased miR-940 expression can predict a negative prognosis in early-stage nonsmoking female lung adenocarcinoma..Ma Qianli;Zhang Jin;Huang Jingjing;Wang Xiaowei;Xiao Fei;Xing Huajie;Wang Ye;Guo Yongqing;Shi Bin;Song Zhiyi;Liu Deruo;Si Chaozeng;Horinouchi Hidehito;Liang Chaoyang.Translational lung cancer research,2021

[2]Total Keratin-18(M65)as a Potential,Early,Non-Invasive Biomarker of Hepatocyte Injury in Alcohol Intoxicated Adolescents—A Preliminary Study.Zdanowicz Katarzyna;Olanski Witold;KowalczukKryston Monika;BobrusChociej Anna;Werpachowska Irena;Lebensztejn Dariusz Marek.Biomolecules,2021

[3]Diagnostic and prognostic impact of cytokeratin 18 expression in human tumors:a tissue microarray study on 11,952 tumors..Menz Anne;Weitbrecht Timo;Gorbokon Natalia;Büscheck Franziska;Luebke Andreas M;Kluth Martina;HubeMagg Claudia;Hinsch Andrea;Höflmayer Doris;Weidemann Sören;Fraune Christoph;Möller Katharina;Bernreuther Christian;Lebok Patrick;Clauditz Till;Sauter Guido;Uhlig Ria;Wilczak Waldemar;Steurer Stefan;Minner Sarah;Burandt Eike;Krech Rainer;Dum David;Krech Till;Marx Andreas;Simon Ronald.Molecular medicine(Cambridge,Mass.),2021

[4]Global Cancer Statistics 2020:GLOBOCAN Estimates of Incidence and Mortality Worldwide for 36 Cancers in 185 Countries.Sung Hyuna;Ferlay Jacques;Siegel Rebecca L.;Laversanne Mathieu;Soerjomataram Isabelle;Jemal Ahmedin;Bray Freddie.CA:A Cancer Journal for Clinicians,2021

[5]高杨.KRT18增强c-Myc通路促进胰腺癌增殖、侵袭、转移的分子机制研究[D].中国医科大学,2023.