capan-1细胞好养吗,用什么培养基

Capan-1人胰腺癌细胞背景简介

Capan-1人胰腺癌贴壁细胞系来源于一位40岁白人男性患者的肝转移。这种细胞系是通过将胰腺癌组织接种到裸鼠体内，然后从裸鼠体内分离出肿瘤细胞并进行体外培养而建立的。细胞表达粘液素，Rh+， HLA A2,，A9，B13，B17。含有刺激素受体和乙二醇激素受体。

Capan-1人胰腺癌细胞形态特征

capan-1细胞前期呈岛状生长，生长缓慢，后期细胞量多，增殖速度加快，培养液消耗快。

Capan-1人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：Capan-1人胰腺癌细胞

细胞别称：CaPan-1; CAPAN-1; Capan 1; CAPAN 1; Capan1; CAPAN1; 人胰腺癌细胞

种属来源：人

组织来源：胰腺

形态特性：贴壁生长，多边形细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11;D2S1338：20,24;D3S1358：15;D5S818：11;D7S820：10,11;D8S1179：14,16;D13S317：9;D16S539：13,14;D18S51：12;D19S433：14,15;D21S11：28,30;FGA：24;PentaD：9,13;PentaE：10,12;TH01：6;TPOX：8,11;vWA：16

保藏机构：AddexBio;C0018001/31;ATCC; HTB-79;BCRJ; 0265;CLS; 300143;DSMZ; ACC-244;IZSLER; BS TCL 9;KCLB; 30079

培养基：80%IMDM+20%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

capan-1细胞好养吗

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：IMDM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

Capan-1人胰腺癌细胞复苏步骤

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLCapan-1细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将Capan-1细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定Capan-1细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

Capan-1人胰腺癌细胞传代操作

从培养箱拿出Capan-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当Capan-1细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

将装有Capan-1细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

确定Capan-1细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

Capan-1人胰腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出Capan-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

Capan-1细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在Capan-1细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

特别注意 该细胞比较难消化，且消化后贴壁时间较长，因此传代处理后24-48h内尽量不要移动，防止影响贴壁，该细胞易聚团成斑块状生长，生长非常缓慢，属正常现象，保持营养充足即可。

Capan-1细胞培养常见问题

capan-1细胞是KRAS突变吗?

PANC-1(BC-C-HU-041)：来源于一位56岁女性患者原位胰头癌，该来源胰头癌有转移至胰周淋巴结，分泌较高水平的血管内皮生长因子，属于 KRAS、TP53和p16基因突变胰腺癌。

Capan-1人胰腺癌细胞复苏活率很低怎么办?

Capan-1细胞复苏活率较低，状态养好后，一般4、5天才能长满。

Capan-1这个细胞的话正常一周可以传几代呢?

Capan-1细胞一分二的话，4-5天左右可以传代，capan-1细胞比较难消化，且消化后贴壁时间较长，因此传代处理后24-48h内尽量不要移动，防止影响贴壁，该细胞易聚团成斑块状生长，生长非常缓慢，属正常现象，保持营养充足即可。

Capan-1人胰腺癌细胞培养过程中有什么要注意的吗

Capan-1细胞培养中分泌物较多，前期呈岛状生长，生长缓慢，后期细胞量多，增殖速度加快，培养液消耗快，所以要注意培养液颜色，容易营养不够，及时换液，需要2天换一次液，这个细胞汇合度达80-90%细胞量就非常多。

Capan-1人胰腺癌细胞的特点

1. 贴壁生长：CAPAN-1细胞系在体外培养时，需要贴附在培养皿的底部，形成单层细胞。

2. 高增殖率：CAPAN-1细胞系具有较高的增殖率，可以在短时间内达到较高的细胞密度。

3. 肿瘤特异性：CAPAN-1细胞系来源于人类胰腺癌，因此具有肿瘤特异性，可以用于研究胰腺癌的发生、发展和治疗。

4. 稳定传代：CAPAN-1细胞系可以在体外稳定传代，保持其生物学特性和表型。

Capan-1人胰腺癌细胞应用

CAPAN-1细胞系在胰腺癌研究中具有广泛的应用，如用于研究胰腺癌的发病机制、药物筛选、基因表达分析等。同时，由于其来源于人类胰腺癌，因此在研究过程中可以更好地模拟胰腺癌的生理环境，提高研究的准确性和可靠性。

CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系可以用于大蒜素制剂对人胰腺癌细胞Capan-1生长增殖作用的体外实验研究

观察研究大蒜素制剂(Allicin)对体外培养的CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系生长增殖的影响及其对Capan-1细胞周期的作用,以及细胞体外迁移能力的影响,为大蒜素制剂用于临床胰腺癌的治疗提供实验依据。

方法

1. 测定体外培养的CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系的细胞活力、贴壁率,应用四唑盐比色法(MTT)测定Capan-1细胞在不同时间、不同浓度的OD值,绘制生长曲线,确定最佳细胞接种浓度及药物干预区间。

2. 四唑盐比色法(MTT)测定不同浓度,不同作用时间的大蒜素制齐(Allicin)对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系的生长增殖抑制作用,测定其IC50,并于倒置显微镜下观察细胞形态学变化。

3. 流式细胞术检测大蒜素制剂(Allicin)对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞周期的影响并分析证实是否有诱导凋亡的作用;细胞划痕实验检测大蒜素制剂(Allicin)对人胰腺癌细胞株Capan-1株迁移能力的影响。

结果

1. CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系常规培养,存活率均>95%符合本实验要求,MTT测定的生长曲线提示按照6×103/孔的密度接种于96孔板内可提供足够的细胞生长空间及营养成分,使细胞于接种24小时后,适应新环境,逐渐进入快速繁殖期。

2. 选取6×103/孔浓度CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系接种于96孔板后的24—72小时左右作为药物干预实验区间,该区间能够保证细胞始终处于一个稳定的对数生长期;在此条件下MTT法检测不同浓度大蒜素制剂对Capan-1细胞生长抑制率具有时间和剂量依赖性。

3. 流式细胞术检测结果显示大蒜素制剂可使CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系周期阻滞于G2/M期,抑制细胞有丝分裂的进程,同时可见典型的亚二倍体峰即凋亡峰(AP)出现;TUNEL凋亡实验进一步证实大蒜素制剂能诱导Capan-1细胞凋亡的发生;细胞划痕实验结果显示大蒜素制剂能够明显降低人胰腺癌Capan-1细胞的迁移能力。

结论

1. 不同浓度大蒜素制剂(Allicin)作用不同时间对CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系生长增殖具有明显的抑制作用,呈时-效和量-效依赖关系,具有时间依赖性和剂量依赖性。

2. 大蒜素制剂(Allicin)能诱导CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系凋亡,并将细胞周期阻滞于G2/M期,从而抑制细胞的分裂增殖。

3. 大蒜素制剂能够明显降低CAPAN-1人胰腺癌贴壁细胞系细胞的迁移能力。

4.大蒜素制剂(Allicin)可能是有前景的抑制胰腺癌细胞的药物。

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