​CNE1人鼻咽癌细胞培养条件,细胞特征,应用分析

CNE1人鼻咽癌细胞背景简介

CNE细胞株来源于一位58岁女性鼻咽癌患者，EXPASY细胞库显示细胞存在交叉污染，STR结果显示它与CNE-2相同，似乎是HeLa和未知来源细胞系的杂交种，PubMed=24991015的RNASeq数据也证实了这一点，最初被认为来自一名58岁的鼻咽癌女性患者。

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系是一种实验细胞，主要用于科学研究。它源自人鼻咽癌细胞，经分离、传代、冻存等步骤制成。这种细胞系具有广泛的应用价值，如鼻咽癌研究、抗癌药物筛选等。

鼻咽癌是一种常见的头颈部恶性肿瘤，发病率较高，且易于转移。因此，对鼻咽癌的研究具有重要的临床意义。CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系就是在这种背景下建立起来的。

CNE1人鼻咽癌细胞产品信息

细胞名称：CNE1人鼻咽癌细胞

细胞别称：CNE；CNE1；人鼻咽癌细胞

种属来源：人

组织来源：鼻

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：10,11;D2S1338：17,23;D3S1358：15,18;D5S818：11,12;D7S820：10,12;D8S1179：12,16;D13S317：10,12,13.3;D16S539：9,10;D18S51：13,16;D19S433：13;D21S11：27,30;FGA:18,21;TH01:6,7,9;TPOX：8,12;vWA：14,16

保藏机构：CCTCC; Ubigene

培养基：90%RPMI-1640+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

CNE-1人鼻咽癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：RPMI-1640培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

CNE-1人鼻咽癌细胞复苏步骤

实验准备

提前打开水浴锅设置37C，提前开启紫外照射30min消毒灭菌，工作台开灯通风10min，用75%酒精擦拭台面

CNE-1人鼻咽癌细胞复苏方法

1.从液氮罐中迅速取出冻存管，立即放入37°C水浴箱中；

2.轻轻摇晃，使CNE-1细胞快速融化解冻，最好在1min内完成；

3.将冻存管移入离心机中1000rpm离心3min；

4.取4mL完全培养基到一个新的6cm培养皿中，在培养皿上标记细胞名称，日期和所用培养基名称；

5.离心结束后，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台；

6.从冻存管中吸走上清，用1ml完全培养基重悬后，移入6cm皿中；

7.“8字法”摇匀后，镜检是否铺匀；

8.把培养皿放入C02培养箱中培养，第二天观察CNE-1细胞株贴壁情况。

注意事项

1.操作冻存细胞时应使用手套、工作服和防护面具等，以避免事故的发生;

2.复苏细胞时，应保持管盖拧紧，将管盖以下部分浸入37℃水浴中解冻，解冻过程要快;

CNE-1人鼻咽癌细胞传代操作

从培养箱拿出CNE-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到80%以上时，即可进行传代；

1.将CNE-1细胞培养皿放入超净工作台中，吸去上清，沿血壁加入5ml PBS；

2.轻洗CNE-1细胞表面，洗去表面培养基，再将PBS弃去；

3.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否脱落；

4.加入3ml完全培养基终止消化，将细胞吹散，移入15ml离心机管中，1000rpm，离心5min；

5.取两个新的6cm培养皿，各加入6-8ml完全培养基，在培养皿上标记细胞名称，日期和所用培养基名称；

6.离心结束后，用75%的酒精喷管身后，放回工作台中，吸去上清；

7.取2ml完全培养基重悬细胞，平均分配到2个皿中，“8字法”摇匀后，镜检是否铺匀；

8.把培养皿放入C02培养箱中培养，第二天观察CNE-1细胞系贴壁情况；

注意事项

1.培养过程中需维持细胞处于对数生长期，80%左右即可传代，传代比例请参照说明书建议;

2.消化时间不宜过长，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min。

3.培养过程中需要定期换液，一般细胞建议2-3天换液一次。

CNE-1人鼻咽癌细胞冻存准备

从培养箱拿出CNE-1细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

CNE-1细胞冻存步骤

1.将细胞培养皿放入超净工作台，吸去上清，沿皿壁加入5ml PBS，轻洗细胞表面，洗去表面培养基，再将PBS吸去;

2.加入2ml胰酶，37℃消化1-2分钟，显微镜下观察细胞是否脱落，可轻拍使未脱落细胞脱落;

3.加入3ml 完全培养基终止消化，将细胞吹散，移入15ml离心管中，1000rpm，离心4min;

4.取一定量的冻存管，打印标签，写明细胞名称，冻存日期，所用培养基，贴标签;

5.离心结束后，用75%的酒精喷管身后，放回工作台中，吸去上清，取1ml无血清细胞冻存液重悬细胞，使细胞密度5×106~1×107/mL，后移入贴好标签的冻存管中，用封口膜密封管口;

6.直接将细胞放入-80度冰箱中，24h后可移入液氮中保存;

注意事项

1.不同细胞消化时间有差异，以实际镜检结果为准，大部分细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可中止消化，消化时间不宜过长；

2.应选择汇合度80%-90%左右，细胞处于对数生长期时进行冻存操作，确保细胞冻存时状态最佳，冻存密度可根据细胞特性进行调整；

3.我们使用的无血清细胞冻存液，可直接冻存细胞于-80度，无需程序降温。

CNE-1人鼻咽癌细胞系特点

形态特征

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的细胞形态为多角形或长方形，核大而明显，胞质丰富。

生长特性

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系生长迅速，传代周期短，适合进行实验室研究。

生物学特性

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系具有较高的增殖活性和侵袭性，适合用于研究鼻咽癌的生物学特性、药物敏感性、基因表达等方面的内容。

CNE-1人鼻咽癌细胞应用

CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系可以用于亚砷酸体外抗人鼻咽癌细胞作用的实验研究。

通过体外亚砷酸对CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的增殖抑制，凋亡诱导及其相关蛋白表达的影响，探索亚砷酸发挥抗鼻咽癌细胞作用及诱导凋亡的可能机制。

方法

体外抗增殖研究

1. MTT法体外CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系培养于含不同浓度的亚砷酸、顺铂、5一氟脉嚓咙，空白培养基作为对照;应用研T法检测24h、48h、72h和96h细胞的生长抑制率。

2. 倒置显微镜观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞生长状态。

3. HE染色观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞形态。

4. 流式细胞仪(FCM)分析CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系细胞周期改变。

5. 细胞增殖标志检测免疫组织化学染色方法检测反映肿瘤细胞增殖活性的增殖细胞核抗原(PCNA)及人端粒酶催化亚基(hTRT)蛋白表达。

诱导凋亡研究

1.形态学采用HE染色、Hoechst 33342/PI双染色在荧光显微镜下观察细胞、透射电子显微镜观察亚砷酸作用下CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系凋亡形态改变。

2流式细胞仪(F以)检测凋亡的“亚二倍体”峰。

3. TIJNEL法原位观察CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系凋亡细胞。

4. 免疫组织化学染色法(工HC)检测亚砷酸诱导CNEI细胞凋亡相关蛋白Bax、Bel一2、p53的表达。

结果

抗增殖作用

1. MTT法体外实验显示亚砷酸能显著抑制CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系的增殖且有时间及浓度依赖性，随着剂量增加和作用时间的延长亚砷酸抑制CNEI细胞增殖能力增强;相同质量浓度的亚砷酸体外抑瘤能力优于顺铂及5一氟脉嚓咙。亚砷酸的Ic5。值在24h、48h、72h和96h分别为3.12 pg/mL、0.65 pg/InL、0.12p g/毗和0.08 pg/mL。

2.倒置显徽镜观察亚砷酸作用组CNE-1人鼻咽癌贴壁细胞系体积缩小、折光性变弱，2003年5月林英城:亚砷酸体外抗人鼻咽癌细胞作用的实验研究(硕士毕业论文丫贴壁细胞减少，脱落细胞增多。且随着亚砷酸浓度的增加和作用时间的延长更为明显。对照组细胞贴壁生长、镶嵌状排列铺满瓶壁。

3.HE染色未加药对照组，细胞呈圆形、椭圆形，核浆比例大，可见核分裂相;亚砷酸作用组可见凋亡细胞。

4.FCM随着亚砷酸浓度的增加和作用时间的延长，其GZ/M比例逐渐增高。

5.PCNA及hTRT免疫组织化学染色可见PCNA及hTRT阳性细胞平均灰度值随着亚砷酸浓度的增加而逐渐减少。

参考文献

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