a549可以用dmem高糖吗,a549细胞培养方法

A549人非小细胞肺癌细胞简介

A549细胞又称为肺癌人类肺泡基底上皮细胞，最早是在1972年由D.J.Giard等人通过一位58岁的白人男性的外植体肿瘤，转移并培养肺肿瘤组织而得到的。

在自然界中，这些细胞是鳞状的，它们可以通过肺泡扩散传播一些物质，如水和电解质。如果将A549细胞体外培养，它们会成长为单层细胞，附着或紧贴在培养瓶上。人肺泡上皮细胞株A549可以固定或悬挂在体外的溶液。这些细胞的另一个特点是他们能够合成卵磷脂，并且含有高度不饱和的脂肪酸，这对于维持细胞膜磷脂有重要意义。

A549人非小细胞肺癌细胞形态特征

A549人非小细胞肺癌细胞产品信息

细胞名称：A549人非小细胞肺癌细胞

细胞别称：A 549; A549; NCI-A549; A549/ATCC; A549 ATCC; A549ATCC; hA549

种属来源：人

年龄性别：58岁，白人男性

组织来源：肺

形态特性：贴壁生长，上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X，Y;CSF1PO：10，12;D13S317：11;D16S539：11，12;D18S51：14，17;D19S433：13;D21S11：29;D2S1338：24;D3S1358：16;D5S818：11;D7S820：8，11;D8S1179：13，14;FGA：23;TH01：8，9.3;TPOX：8，11;vWA：14;

抗原表达情况：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

保藏机构：ATCC; CCL-185 ATCC; CRM-CCL-185 ATCC; CRL-7909 BCRC; 60074 BCRJ; 0033 DSMZ; ACC-107 ECACC; 86012804

培养基：90%高糖DMEM+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

倍增时间：~22 hours

抗原表达情况：The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

染色体：60~66，XY

A549人非小细胞肺癌细胞培养方法

细胞培养的基本条件

实验室条件

1.无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2.仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色0-10ul;黄色20-200ul;蓝色100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm皿、10cm皿，培养瓶等。

4.试剂：DMEM高糖基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1.无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷75%酒精

A549人非小细胞肺癌细胞复苏方法

1)准备：紫外线照台30min，提前打开水浴锅设置37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20分钟(或者放在超净工作台常温放30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL移液枪，3mL巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1mLA549细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞1min内融化，加4mL培养基混合均匀，移入离心机中100rpm离心3min，以75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用3mL巴氏管取5mL新鲜培养基到一个新的6cm培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取12mL新鲜培养基到一个新的10cm培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将A549细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定A549细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

A-549人肺腺癌细胞培养注意事项

细胞颗粒感较重

细胞传代培养时细胞内黑点及细胞外颗粒较多，建议使用优质血清及培养基培养细胞;

传代、复苏注意细胞状态

细胞消化或者复苏操作不当容易导致细胞死亡裂解产生大量碎片及颗粒，进而影响活细胞状态，注意消化或复苏过程尽量轻柔，严格控制消化时间和复苏操作规范，传代或复苏24h后建议观察细胞，建议换液一次去除死亡细胞;

A549人非小细胞肺癌细胞传代操作

1)从培养箱拿出A549 cell，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当A549细胞状态良好，且密度达到85%左右的时候即可进行传代;

2)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取4ml不含钙、镁离子的1xPBS(6cm皿)到细胞培养皿中(若是10cm皿则取8ml1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

3)用废液泵吸走PBS废液，加1mL消化液(0.25%Trypsin-0.02%EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入CO2培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

4)用1ml移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸1ml移液枪移入无菌离心管中。

5)将装有A549细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000转离心3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取1-2mL新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画30个8字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

6)确定A549细胞已铺匀后，再把培养皿放入CO2培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

A549人非小细胞肺癌细胞冻存方法

从培养箱拿出A549细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25瓶为例

细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液，在A549细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80度冻存盒里，放置24小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

a549细胞培养常见问题

a549可以用dmem高糖吗?

a549细胞培养条件就是高糖的DMEM加上血清还有双抗。

a549细胞一分二多久长满

a549细胞长得挺快的，一分二的话，一般1-2天就可以长满了。

a549细胞消化时间多久

A549细胞培养箱消化1-2分钟即可。

a549是肺腺癌还是肺鳞癌

A549细胞是一种人类肺腺癌细胞系。

A549细胞形态特点

A549细胞是一种人类肺腺癌细胞系，广泛应用于肺腺癌的研究中。在细胞形态特点方面，A549细胞表现出以下几个特点:

1.细胞形态

A549细胞呈椭圆形或卵圆形，大小约为15-30μm。细胞质呈淡紫红色，细胞核位于细胞中央，呈圆形或椭圆形，直径约为10-15μm。细胞核染色质均匀分布，核仁明显。细胞质内含有丰富的细胞器，如内质网、高尔基体、线粒体等。

2.细胞表面特征

A549细胞表面呈现出微绒毛状结构，使细胞表面显得粗糙。细胞表面还存在一些微细突起，使细胞具有一定的粘附性。这些突起结构有助于细胞与周围细胞或基质进行黏附和相互作用。

3.细胞增殖特点

A549细胞具有较高的增殖能力，在培养基中可形成较为紧密的细胞群。细胞群中的细胞紧密排列，呈薄板状或长条状。细胞生长速度较快，通常在培养基中可见到细胞的分裂和增殖现象。

4.细胞迁移

A549细胞具有一定的迁移能力，在培养基中可形成细胞单层的移行现象。细胞从初始位置逐渐移动到周围空白区域，形成新的细胞单层。细胞迁移速度较快，表现出较强的侵袭性。

多年来，A549细胞已经得到了很好的表征，对于经常将它们用作体外和体内模型的研究人员来说很有价值。A549细胞是上皮细胞，在体外作为单层粘附生长，并作为合适的转染宿主。这也意味着它们是排列在器官和组织表面的细胞。A549腺癌细胞在营养丰富的DMEM培养基中的实验室中生长。当它们以这种方式生长时，它们形成单层细胞。A549细胞成为肺癌研究模型的黄金标准，现在常用于细胞培养研究，作为研究人类肺癌的模型。

5.细胞凋亡

A549细胞在一定条件下可发生凋亡现象。凋亡细胞通常具有以下特点:细胞体积缩小，细胞核凝缩和碎裂，细胞质内出现凋亡小体等。凋亡细胞通常会被周围细胞或者巨噬细胞吞噬，从而完成清除和消除的过程。

6.遗传变异

A549细胞在长期培养过程中可能会发生一定程度的遗传变异。研究表明，A549细胞具有多倍体性，染色体数目变异较大，存在着染色体缺失、重排和复制等遗传变异。这些遗传变异可能导致A549细胞系在不同实验条件下表现出异质性。

7.生物学行为

a.肿瘤特性：A549细胞具有肿瘤细胞的特性，包括快速增殖、无限增殖潜能和抗凋亡能力。这使得A549细胞成为研究肺癌生长、侵袭和转移等过程的理想模型。

b.肿瘤标志物：A549细胞表达多种肿瘤标志物，如细胞角蛋白、肿瘤相关抗原和转录因子等。这些标志物的表达特征可用于研究肺癌的诊断和治疗靶点的筛选。

c.耐药性：A549细胞对多种抗癌药物具有一定程度的耐药性。这使得A549细胞可用于研究肺癌耐药机制以及开发新的抗癌药物。

A549细胞应用

1.肺癌发病机制研究：A549细胞可用于研究肺癌的发病机制，如细胞增殖、凋亡、侵袭和转移等过程。通过对A549细胞的相关基因和信号通路的研究，可以深入了解肺癌的发生和发展机制。

2.肺癌治疗研究：A549细胞可用于评估抗肿瘤药物的疗效和毒副作用。通过体外细胞实验和动物模型研究，可以筛选和评估新的抗癌药物，并探索肺癌治疗的新靶点和策略。

3.肺癌耐药机制研究：通过研究A549细胞的耐药性机制，可以揭示肺癌耐药的分子机制，为克服耐药性提供理论依据和新的治疗策略。

人肺癌细胞A549具有许多特征，包括来源、形态学特征、遗传变异和生物学行为等方面。它是肺癌研究中广泛应用的细胞系之一。通过研究A549细胞，可以深入了解肺癌的发病机制、评估抗癌药物的疗效和毒副作用，以及研究肺癌耐药性的机制。A549细胞在肺癌研究和治疗中具有重要的应用价值，为肺癌的早期诊断、治疗和预后评估提供了重要的实验模型和研究工具。

A549人非小细胞肺癌细胞相关研究

有研究探讨蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡和抗增殖作用及其机制，为开发抗肿瘤新中药提供实验依据。方法应用MTT法测定蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549的生长抑制作用;通过倒置显微镜、光学显微镜观察肿瘤细胞凋亡的形态学变化;采用流式细胞术检测A549细胞的凋亡率;应用免疫组织化学技术检测药物处理前后凋亡相关蛋白酶caspase-3、caspase-8、caspase-9的表达。结果(1)MTT法检测结果：蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549有明显的抑制生长的作用，且呈现出浓度的依赖性;(2)倒置显微镜观察结果：实验组肿瘤细胞体积变小、变圆，核染色质凝集，细胞间连接疏松，贴壁能力减弱;(3)HE染色观察结果：实验组肿瘤细胞体积变小、变圆，核染色质浓缩或染色质块形成，有的细胞膜起泡形成凋亡小体;(4)流式细胞术检测结果显示：蝙蝠葛提取物可以诱导A549细胞发生凋亡，加药组出现亚二倍体峰。结论(1)蝙蝠葛提取物在体外对人肺癌细胞系A549有显著的诱导凋亡作用;(2)蝙蝠葛提取物诱导凋亡作用机制可能通过上调caspase-3、caspase-8和caspase-9蛋白表达，经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;(3)蝙蝠葛提取物具有显著的体外抗肿瘤作用，有望开发成一种新的抗肿瘤药物。

此外，还有研究通过应用RNAi技术沉默肺癌细胞系A549中的PEG10基因，探讨PEG10在肺癌细胞系A549细胞增殖及侵袭迁移过程中的作用。方法RPMI-1640培养肺癌A549细胞。瞬时转染及建立稳定转染shRNAPEG10细胞系;MTT及软琼脂克隆形成实验检测PEG10基因沉默对A549肺癌细胞增殖的影响;细胞划痕试验和Transwell小室方法观察PEG10基因沉默对A549肺癌细胞迁移能力的影响;逆转录RT-PCR、实时定量qRT-PCR及Westernblot检测PEG10、β-catenin和其下游分子cmyc、MMPs、twist、E-cadherin、Vimentin表达水平的变化。结果PEG10干扰效率达65%;转染后肺癌细胞划痕愈合速度变慢;穿过Transwell小室的细胞数减少;克隆形成数目也降低，同时检测到β-catenin及c-myc、MMPs、twist、Vimentin表达水平降低，E-cadherin表达水平升高。结论靶向封闭PEG10基因可下调Wnt/β-catenin信号通路的关键因子β-catenin的表达水平，降低肺癌A549细胞增殖、侵袭及迁移能力，部分逆转肺癌上皮间质转化。

另外，还有研究探讨全反式维甲酸(ATRA)对人肺腺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR(apelinreceptor)基因表达的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(methylthiazolyltetrazolium，MTT)比色法检测ATRA对体外培养的A549细胞增殖的抑制情况，光学显微镜下观察细胞形态改变，流式细胞术检测细胞周期及凋亡，westernblot检测APLNR蛋白、cyclinD1及p16蛋白的表达情况。结果经ATRA作用后，A549细胞增殖受到明显抑制且抑制程度呈剂量及时间依赖性(P均<0.01);其细胞形态发生明显变化，细胞周期被阻滞于G0/G1期且细胞凋亡率明显升高(P<0.01);westernblot结果显示，随着ATRA浓度的升高，APLNR蛋白及cyclinD1蛋白的表达水平降低，而p16蛋白的表达水平升高(P均<0.01)。结论ATRA可抑制A549细胞增殖并促进其凋亡，且能下调APLNR基因的表达。

有研究探讨Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达情况，为肺癌干细胞的基因靶向治疗提供理论依据。方法：应用干细胞无血清培养技术培养A549细胞肿瘤细胞球，采用克隆形成实验检测肺癌肿瘤球细胞增殖能力，流式细胞术检测ABCG2在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况，Westernblotting检测Id1在肺癌肿瘤球细胞中的表达情况。结果：与贴壁细胞相比，人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞具有较强的克隆能力，且高表达ABCG2，符合肺癌干细胞的特点，Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球细胞中高表达。结论：Id1可能成为靶向肺癌干细胞肺癌治疗的靶点。

a549细胞参考文献

[1] 蝙蝠葛提取物对人肺癌细胞系A549诱导凋亡作用的研究

[2] PEG10在人肺癌细胞系A549增殖及侵袭迁移过程中的作用

[3] 全反式维甲酸对人肺癌细胞系A549细胞增殖及APLNR基因表达的影响

[4] Id1在人肺癌细胞系A549肿瘤细胞球中的表达