MDA-MB-231细胞培养条件,形态,用什么培养基

MDA-MB-231人乳腺癌细胞背景简介

MDA-MB-231细胞是一种人类乳腺癌细胞系，通常呈贴壁生长状态，具有典型的上皮细胞形态，呈现出较大、扁平的形状，有时会呈现出长条状，增殖速度较快。MDA-MB-231是从一名51岁的白人女性乳腺癌患者的胸水中分离建立的。该细胞表达表皮生长因子EGF受体、TGF-α受体和WNT7B癌基因。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞形态特征

MDA-MB-231属上皮细胞，细胞形态大多为纺锤状，小部分呈圆形。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞产品信息

细胞名称：MDA-MB-231，人乳腺癌细胞

细胞别称：MDA-MB 231; MDA.MB.231; MDA MB 231; MDA MB231; MDA Mb231; MDA-MB231; MDAMB-231; MDAMB231; MDA-231; MDA231; MB231; MD Anderson-Metastatic Breast-231;人乳腺癌细胞

种属来源：人

年龄性别：女;51岁

组织来源：乳腺腺癌，转移性胸膜渗出液

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

染色体：58~61，有巨核

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：12，13;D13S317：13;D16S539：12;D18S51：11，16;D19S433：11，14;D21S11：30，33.2;D2S1338：20，21;D3S1358：16;D5S818：12;D7S820：8，9;D8S1179：13;FGA：22，23;TH01：7，9.3;TPOX：8，9;vWA：15，18;

保藏机构：ATCC; CRL-12532 ATCC; HTB-26 ATCC; CRM-HTB-26 BCRC; 60425 BCRJ; 0164 DSMZ; ACC-732 ECACC; 92020424

培养基：90% DMEM +10% FBS+1%PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

倍增时间：~32-42 hours

致瘤性：Yes, in ALS treated BALB/c mice, forms poorly differentiated adenocarcinoma (grade III).Yes, in nude mice, forms poorly differentiated adenocarcinoma (grade III).

受体表达情况：epidermal growth factor (EGF), expressed;transforming growth factor alpha (TGF alpha), expressed

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

MDA-MB-231人乳腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

MDA-MB-231人乳腺癌细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将MDA-MB-231细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定MDA-MB-231细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)。

MDA-MB-231细胞传代操作方法

1)从培养箱拿出MDA-MB-231细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

2)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

3)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

4)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

5)将装有MDA-MB-231细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

6) 确定MDA-MB-231细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞冻存准备

从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

MDA-MB-231人乳腺癌细胞冻存步骤

a.收集MDA-MB-231细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

MDA-MB-231与MCF-7细胞的区别

1.MCF-7和MDA-MB-231虽说都是乳腺癌细胞，但是二者的侵袭能力不一样，细胞形态差别巨大，有些基因表达也不同，比如SP7在MCF7细胞中就不表达，但是在MDA-MB-231中表达很高。增殖速度相对来说MDA-MB-231更快一些。

2.MDA-MB-231属于高转移性恶性乳腺癌细胞系，易成瘤，且常用于肿瘤转移研究，常见为肺转移。

MCF-7为原位ER阳性乳腺癌细胞系，恶性程度较MDA-MB-231低，因此不那么容易成瘤，但在雌激素刺激下还是可以作为很好动物成瘤模型的。

MDA-MB-231细胞文献溯源

1974年始，迄今为止，关于人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)的文献已有19940篇。

在pubmed数据库中用“mda-mb-231 cells”搜索该关键词，第一篇为1974年R Cailleau在J Natl Cancer Inst.发表的“Breast tumor cell lines from pleural effusions”。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞应用领域

● 人乳腺癌细胞MDA-MB-231是一种上皮样细胞，从患有腺癌的40岁白人女性的乳腺中分离出来。该细胞可用于试验开发。

● 学者经常利用MDA-MB-231细胞进行针对乳腺癌的转移机制研究，包含细胞黏附、细胞在体外培养中的扩散、侵袭和血管生产成本等。

● 分子靶向治疗是乳腺癌治疗的一个重要领域，特别是在针对特定基因突变的治疗策略方面。例如，学者利用MDA-MB-231细胞中研究常见的过表达蛋白，如HER2/ERBB2，进而评估针对HER2/ERBB2的靶向药物对MDA-MB-231细胞系的作用，以确定其对乳腺癌的治疗潜力。

● 通过使用CRISPR-Cas9等基因编辑技术，研究人员能够精确地敲除或过表达MDA-MB-231细胞中的特定基因。有利于系统地研究这些基因在乳腺癌发生和发展中的作用，从而揭示肿瘤生长、侵袭和转移的分子机制。

● 使用MDA-MB-231细胞建立3D培养模型，能更真实地模拟肿瘤在体内的生长和行为，为研究提供了更为接近生理状态的实验平台。

● 在药物筛选和开发方面，利用MDA-MB-231细胞系进行高通量药物筛选，能够发现新的抗乳腺癌药物，并开发针对该细胞系的治疗方法，为乳腺癌的治疗提供了新的可能性。

细胞标志物

MDA-MB-231乳腺癌细胞的标志物包括ER、PR、HER2、MMP家族、Cyclin D1、p53、Bcl-2家族蛋白、CD44、CD24和ALDH等。这些标志物用于识别、研究和治疗乳腺癌细胞。

MDA-MB-231人乳腺癌细胞应用

MDA-MB-231可以用于苦参碱联合多西他赛促进三阴性人乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的机制研究

在人乳腺癌MDA-MB-231细胞中探索苦参碱和多西他赛联合使用对细胞增殖和凋亡等的影响;在此基础上利用蛋白组学和生物信息学技术研究苦参碱联合多西他赛抗人乳腺癌MDA-MB-231细胞的进一步分子机制,并进行体外、体内实验验证。

方法

1.通过CCK-8、克隆形成、Transwell、划痕实验、流式细胞术等实验探索不同浓度的苦参碱和多西他赛单药及联合用药对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖的影响,在此基础上选取苦参碱(1mM)、多西他赛(10nM)和联合用药(苦参碱1mM+多西他赛10nM)等模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡等作用。用蛋白印迹实验检测上述用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞Caspase和Bcl-2家族相关蛋白质表达的影响。

2.利用蛋白组学和生物信息学技术研究苦参碱联合多西他赛抗人乳腺癌MDA-MB-231细胞的靶分子,并通过相关实验验证。质粒过表达该分子后,采用联合用药的处理模式检验靶分子过表达后人乳腺癌MDA-MB-231细胞的细胞表型和Caspase家族相关蛋白质变化情况。

3.建立人乳腺癌MDA-MB-231细胞BALB/c裸鼠移植瘤模型,待肿瘤体积达到约100mm3时,将裸鼠随机分为如下4组,每组8只,并进行如下处理:①对照组(Control):等体积的生理盐水,腹腔注射,5次/周,共计15次。②苦参碱组(Mat):苦参碱500mg/kg,腹腔注射,5次/周,共计15次。③多西他赛组(Doc):多西他赛8mg/kg,腹腔注射,1次/周,共计3次。④联合组(Comb):苦参碱+多西他赛(苦参碱50mg/kg,腹腔注射,5次/周,共计15次;多西他赛8mg/kg,腹腔注射,1次/周,共计3次)。研究过程中观察各组荷瘤裸鼠的一般情况,测量裸鼠体重、肿瘤体积等指标。达到实验要求后采血后送检血常规、肝功能,脱颈处死裸鼠,剥离裸鼠肿瘤,拍照记录并测量肿瘤组织质量。分别进行肿瘤组织的HE染色、Tunel染色及相关蛋白的免疫组化检测。

结果

1.苦参碱和多西他赛单药均呈一定程度的浓度及时间依赖性的方式抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡能力,两药联合使用具有协同作用。蛋白印迹实验证实:苦参碱和多西他赛单药作用人乳腺癌MDA-MB-231细胞后,Cleaved-caspase-3、-8、-9及Bax等促凋亡蛋白表达均有所上调,而抑凋亡蛋白Bcl-2表达有所下降,两药联合使用具有协同作用。

2.蛋白组学分析提示HN1是苦参碱处理人乳腺癌MDA-MB-231细胞后的下调蛋白之一(Fold change:0.61);苦参碱联合多西他赛的用药模式对MDA-MB-231细胞的增殖、克隆形成、侵袭、迁移及促凋亡能力可被过表达HN1所抵消。

3.苦参碱与多西他赛的联合用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤的体积和瘤重的抑制起到协同作用,免疫组化检测提示联合用药的给药模式在抑制肿瘤组织中CD31、VEGF、Cleaved-caspase-3、HN1的表达方面具有协同作用,并且这种用药模式对裸鼠的一般状况、体重、肝功能和血常规均无明显影响。

结论

苦参碱(1mM)联合多西他赛(10nM)的用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞的抗肿瘤作用具有协同作用,该作用可能是通过下调HN1表达来实现的。苦参碱与多西他赛的联合用药模式对人乳腺癌MDA-MB-231细胞裸鼠移植瘤的体积和瘤重的抑制起到协同作用,且对裸鼠的一般状况、体重、肝功能和血常规均无明显影响。