ht29细胞介绍,培养操作及研究应用

HT-29人结肠癌细胞介绍

HT-29是一种具有上皮形态的细胞系，于1964年从一名患有结肠直肠腺癌的44岁白人女性患者的原发性肿瘤中分离得到。

HT-29细胞系是合适的转染宿主，可用于癌症和毒理学研究。近来，已建株的培养细胞用含血清McCoy’s 5A培液培养。该细胞系在裸鼠中致瘤，也能在类固醇处理的地鼠中致瘤。

HT-29细胞合成IgA、CEA、TGFβ结合蛋白和黏液素等;表达尿激酶受体，但没有检测到血浆酶原活性;不表达CD4，但细胞表面表达半乳糖神经酰胺(HIV的可能替代受体)。HT-29细胞的超微结构特征包括微绒毛、微丝、带有深色颗粒的大空泡线粒体、带有游离核糖体的光滑粗面内质网、脂滴、少量初级溶酶体和许多次级溶酶体。细胞表达尿激酶受体，但不具有可检测的纤溶酶原激活活性。HT-29细胞CD4呈阴性，但细胞表面存在半乳糖神经酰胺(一种可能的HIV替代受体)的表达。HT-29细胞c-myc、K-ras、H-ras、N-ras、Myb、sis和fos癌基因表达阳性，但未检测到N-myc癌基因表达，p53抗原过度产生，p53基因的密码子273存在G->a突变，导致Arg->His取代。HT-29细胞可以用于3D细胞培养、高通量筛选、癌症研究和毒理学研究，也是一种合适的转染宿主。

HT-29细胞是一种重要的人类结直肠腺癌细胞系，具有良好的增殖能力和一定的恶性转化特征，被广泛用于癌症研究领域。HT-29细胞被证实是一种肿瘤腺样细胞，具有肠道上皮细胞的形态和功能特征。研究者通过探索HT-29细胞的生长特点、调控机制和应用前景，为癌症研究和治疗提供了有益的信息和思路。

HT-29人结肠癌细胞形态特征

HT-29人结肠癌细胞产品信息

细胞名称：HT-29，人结肠癌细胞

细胞别称：HT 29; HT-29;HT-29;人结肠癌细胞

年龄性别：女；44岁

组织来源：结肠

形态特性：贴壁生长，上皮细胞样

染色体：64~69

倍增时间：~36-60 hours

致瘤性：Yes, in nude mice; forms well differentiated adenocarcinoma consistent with colonic primary (grade I); tumors also form in steroid treated hamsters.

受体表达情况：human adrenergic alpha2A, urokinase receptor (u-PAR), vitamin D (moderate expression), urokinase receptor (u-PAR); vitamin D (moderate expression), human adrenergic alpha2A

基因表达情况：secretory component of IgA; carcinoembryonic antigen (CEA); transforming growth factor beta binding protein; mucin, myc+; ras+; myb+; fos+; sis+; p53+; abl -; ros -; src -, Blood Type A; Rh+; HLA A1, A3, B12, B17, Cw5, HT-29 cells are negative for CD4, but there is cell surface expression of galactose ceramide (a possible alternative receptor for HIV).

保藏机构：ATCC; HTB-38 BCRJ; 0111 CCLV; CCLV-RIE 0960 DSMZ; ACC-299 ECACC; 91072201;中国典型培养物保藏中心细胞库

培养基：90%5A+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

HT-29人结肠癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：5A培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

HT-29人结肠癌细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLHT-29细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后HT29细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将HT-29细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀HT29细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

HT-29人结肠癌细胞传代操作

1.从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

2.打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗HT-29细胞表面1-2次;

3.用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

4.用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

5.将装有HT-29细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

6.确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

HT-29人结肠癌细胞冻存操作

从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，HT-29细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

a.收集HT-29细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据HT-29细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

HT-29人结肠癌细胞培养常见问题

ht29细胞用什么培养基

ht29细胞培养基90%5A+10% FBS+PS

如何养好HT29细胞

a..降低传代密度，当ht29细胞融合度70%-75%左右就可进行传代。

b.传代后24-48小时内不要移动。

c.消化时，不要反复晃动培养瓶或培养皿，可培养箱内静置消化，否则细胞会呈屑样脱落，不利于消化成单颗细胞。

d.ht29细胞生长时，会有少量漂浮细胞碎片，背景可见少量黑点，是正常现象，不要过度清洗，随着换液和传达可暂时改善，但继续培养无法避免。

HT-29人结肠癌细胞的特点

1. HT-29细胞在培养基中呈现出贴壁生长的特点，并且具有较高的增殖能力。这些细胞形态上呈现为不规则形态，细胞核较大且异型性较高。HT-29细胞对多种细胞因子和生长因子的反应较为敏感，能够在不同因子的刺激下快速增殖。

2. 随着贴壁时间延长，HT-29细胞形态有很大变化，从刚开始的亮亮圆圆的单颗细胞，到呈片生长的上皮样。

3. HT-29细胞贴壁48h后呈岛状聚集生长，当细胞密度较大时，不易消化并易成团。所以控制消化时间尤为重要，消化时间过短，细胞不易从瓶壁脱落，吹打过度，导致细胞碎裂，碎片过多;消化过度，导致细胞传代后漂浮增多。

HT-29细胞和caco2细胞的区别

1. 来源不同

HT-29来自人类大肠癌的原发灶;而Caco2来自人类结肠腺癌的转移灶。

2. 增殖率不同

HT-29细胞生长较慢，繁殖周期长;而Caco2细胞生长较快，繁殖周期短。

3. 细胞形态不同

HT-29细胞在培养条件下呈现悬浮生长状态;而Caco2细胞则呈现附着状态，形态较为扁平。

HT-29人结肠癌细胞应用

HT29 细胞是一种来源于人类结直肠腺癌的细胞系，被广泛用于癌症研究领域。这种细胞系最初于1964年由Herbert Taylor 教授和J Howard Bez51 岁的男性病人的原发结肠癌组织中分离和建立。HT29细胞被证实是一种肿瘤腺样细胞，具有肠道上皮细胞的形态和功能特征。

HT-29人结肠癌细胞的生长调控机制

HT-29细胞的生长受到多种因素的调控，包括细胞因子的刺激、信号传导通路的激活等。研究者通过调控HT-29细胞的生长环境或使用特定的药物，可以影响其增殖和转化能力，从而为癌症治疗提供理论依据。

HT-29细胞在癌症研究中的应用

由于HT-29细胞具有良好的增殖能力和一定的恶性转化特征，因此被广泛应用在癌症研究领域。研究者利用HT-29细胞模拟肠道肿瘤生长过程，探讨癌细胞的生长规律、侵袭能力以及对药物的敏感性等问题。

HT-29可以用于基于EMT探讨重楼对结直肠癌细胞迁移和侵袭的作用机制

选取重楼及其单体,旨在探讨通过调控EMT,抑制结直肠癌迁移和侵袭的作用机制,阐明其对结直肠癌转移的抑制作用,为药物靶向作用于结直癌的转移提供实验支持,并为控制结直肠癌的转移提供新的思路与方法。

方法

(1)培养人结直肠癌HT-29和LoVo细胞株。

(2) MTT法检测不同浓度的药物对HT-29和LoVo细胞活力的影响,分析药物的IC50值;筛选并选取重楼最敏感单体进行后续实验。

(3) 平板克隆和Ed U增殖实验检测药物对细胞增殖作用的影响;Western-blotting检测药物干预后PI3K/Akt信号通路的蛋白表达。

(4) Transwell检测药物对细胞迁移、侵袭的影响;Western-blotting检测药物干预后EMT相关蛋白的表达。

结果

(1)人结肠癌HT-29和LoVo细胞生长良好,适合进行实验操作。

(2) MTT实验结果显示PPE对HT-29和LoVo细胞生长具有抑制作用,并且呈浓度相关性。

(3) 平板克隆和Ed U增殖实验结果表明,PPE对细胞增殖有抑制作用。

(4) Western-blotting检测PI3K/Akt相关蛋白表达,结果表明,PPE干预细胞后,与对照组相比,p-PI3K、p-Akt表达水平降低。

(5) Transwell结果表示,PPE抑制细胞的迁移和侵袭。

(6) Western-blotting检测EMT相关蛋白,结果表明,PPE干预细胞后,与对照组相比,E-cadherin表达水平增加,N-cadherin、MMP2、MMP9表达水平降低,Smad2、Smad3表达基本不变,p-Smad2、p-Smad3表达水平降低。

(7) 重楼内重楼皂苷Ⅰ(PPI)、重楼皂苷Ⅱ(PPII)、重楼皂苷VII(PPVII)的含量为检测重楼的质量标准,MTT结果显示PPI、PPII、PPVII对细胞活力均具有抑制作用,但PPVII对细胞活力抑制最明显,故选择PPVII进行后续实验。

(8) 平板克隆和Ed U增殖实验结果表明,PPVII对细胞增殖有抑制作用。

(9) Western-blotting检测PI3K/Akt相关蛋白表达,结果表明,PPVII干预细胞后,与对照组相比,p-PI3K、p-Akt表达水平降低。

(10) Transwell实验结果表示,PPVII抑制细胞的迁移和侵袭。

(11) Western-blotting检测EMT相关蛋白,结果表明,PPVII干预细胞后,与对照组相比,E-cadherin表达水平增加,N-cadherin、MMP2、MMP9表达水平降低,Smad2、Smad3表达基本不变,p-Smad2、p-Smad3表达水平降低。

结论

重楼通过体外实验研究表现出了一定的抗癌活性,其机制可能与PPVII通过调控PI3K、Akt的磷酸化水平抑制结直肠癌细胞的增殖,调控Smad2、Smad3磷酸化水平调控EMT过程,从而抑制结直肠癌细胞的迁移和侵袭,为重楼皂苷靶向治疗结直肠癌提供实验支持。

结语

HT29 细胞是一种重要的人类结直肠腺癌细胞系，具有良好的增殖能力和一定的恶性转化特征，被广泛用于癌症研究领域。研究者通过探索HT29细胞的生长特点、调控机制和应用前景，为癌症研究和治疗提供了有益的信息和思路。HT29细胞的研究将进一步推动癌症领域的发展，为人类健康作出贡献。

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