SW756人子宫鳞状癌细胞特征及培养常见问题

SW756人子宫鳞状癌细胞背景简介

SW756细胞，1974年从一名46岁的白人女性鳞状细胞癌患者的宫颈中分离出来。

SW756人子宫鳞状癌细胞形态特征

SW756是一种具有上皮形态的细胞。

SW756人子宫鳞状癌细胞产品信息

细胞名称：SW756，人子宫鳞状癌细胞

细胞别称：SW756，SW-756，SW 756，人表皮角质形成细胞

种属来源：人

组织来源：子宫颈

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

培养基：L15+10%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

染色体：75~80

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：11,12;D3S1358：15,17;D5S818：11,12;D7S820：10,12;D8S1179：11,13;D13S317：11;D16S539：12,13;D18S51：14,17;D21S11：30;FGA：20,22;PentaD：9,12;Penta E：11,12;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：17;

保藏机构：ATCC

SW756人子宫鳞状癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3. 器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：L15培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

SW756细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLSW756细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将SW756细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定SW756细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

SW756细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好SW756细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当SW756细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

4)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有SW756细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定SW756细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

SW756细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

SW756细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

SW756人子宫鳞状癌细胞培养常见问题

1. SW756细胞不贴壁的原因及解决办法?

a.胰蛋白酶消化过度。建议缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度。

b.支原体污染。分离培养物，检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。

c.培养基pH值过碱(NaHCO3分解)。使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2;

d.SW756细胞老化。启用新的保种细胞;

e.接种细胞起始浓度太低或太高。调节最佳接种细胞浓度。

2. SW756细胞生长周期变慢，边养边漂是什么原因导致的?

常见原因及解决方法：

a.细胞传代时密度太稀或太密：建议细胞密度达80%左右进行传代，传代密度适中，密度过低会延长生长周期;

b.传代操作不当：根据细胞特性决定细胞消化时间，一般在显微镜下观察细胞回缩变圆并有少量细胞脱落即可终止消化，难消化的细胞可分次消化，每次时间不超过5min；频繁换液或者清洗细胞也会导致细胞状态变差，常规换液时间间隔为2~3天。

3. 传代后SW756细胞变形?

原因及解决方法如下

a.变形，但细胞还在生长：可能是血清批次不一样导致，血清成分复杂，不同批次和品牌间均存在成分差异，影响细胞状态。建议使用同一批次血清，更换血清时需与原血清比例混合后使用，使细胞有过渡期；

b.变形，但细胞不长，且碎片增多：可能传代操作过程损伤，常见于消化不当，或者潜在支原体等污染导致细胞病态；消化时间根据每个细胞的状态来调整，消化过度或者消化不充分均会对细胞造成影响;培养过程应严格无菌操作，实验环境尽量洁净，确保细胞无外源污染。

4.SW756细胞为什么出现空泡?

a.正常的细胞活动：有的细胞有正常的自噬行为或其他膜泡活动，无需特殊处理(如Caco-2细胞);

b.血清不适应、培养基成分改变、换液不及时等造成细胞营养不良：可通过更换更合适的血清或及时换液等方法解决;

c.机械损伤、PH偏高或偏低等造成细胞受损：注意培养条件及操作手法。