panc1细胞成团原因,生长速度,形态介绍

PANC-1人胰腺癌细胞简介

PANC-1，人胰腺癌细胞，1972年由M.Lieber中分离并建立，取自一位56岁患有胰腺癌的白人男性胰腺头部肿瘤的导管组织。有文献报道该细胞在无胸腺裸鼠体内可致瘤，携带三个标记染色体和一个小环状染色体。癌细胞可以转移，但分化能力较差。PANC-1细胞在肿瘤的排列和迁移中发挥中间丝角蛋白重组的作用，因此也被用于研究钙介导的肌动蛋白重置(CaAR)对生理变化的反应。PANC-1表达CK5.6、MNF-116、波形蛋白、嗜铬粒蛋白A、CD56和SSTR2，但癌胚抗原分泌不明显。综上所述，PANC-1细胞因其上皮形态、中间丝角蛋白重组和SSTR2受体的存在，被广泛应用于胰腺癌研究，适用于胰腺癌神经内分泌化疗和肽受体放射性核素治疗，是研究胰腺导管腺癌的癌变和肿瘤治疗的首选体外模型。

panc1细胞形态图片

panc1细胞形态上皮细胞样，单层贴壁生长，生长过程中细胞会聚集。

PANC-1人胰腺癌细胞产品信息

细胞名称：PANC-1，人胰腺癌细胞

细胞别称：Panc-1; PANC.1; Panc 1; PanC1; Panc1; PANC1; Panc-1-P;人胰腺癌细胞

种属来源：人

年龄性别：男;56岁

组织来源：胰腺;胰管;上皮细胞癌

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

STR位点信息： Amelogenin：X;CSF1PO：10，12;D13S317：11;D16S539：11;D18S51：12;D19S433：11，16;D21S11：28;D2S1338：23，24;D3S1358：17;D5S818：11，13;D7S820：8，10;D8S1179：14，15;FGA：21;TH01：7，8;TPOX：8，11;vWA：15;

保藏机构：ATCC; CRL-1469

培养基：90% DMEM+10% FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

染色体：60~70

PANC-1人胰腺癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

PANC-1人胰腺癌细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mL细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

PANC-1人胰腺癌细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

4)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

PANC-1人胰腺癌细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

PANC-1人胰腺癌细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

PANC-1人胰腺癌细胞培养总结

PANC-1呈上皮细胞样，单层贴壁生长，生长过程中细胞会聚集，但可以通过胰蛋白酶化来避免。PANC-1染色体核型为超三倍体，32%细胞中有61条染色体，22%细胞中有63条染色体。显微镜观察结合流式细胞术分析显示存在三种不同的形态学模式：小细胞(桑葚胚)、中间细胞(星状细胞)和大细胞(分离细胞)，可用于癌症研究，也是个合适的转染宿主。

PANC-1细胞常用DMEM培养基，含10% 胎牛血清，在37度、5% CO2培养箱中。PANC-1细胞增速较慢，倍增时间52h，建议每周2-3次更换新鲜培养基，在密度80%时传代，传代比例1:2-1:4。

PANC-1人胰腺癌细胞培养常见问题

1.PANC-1人胰腺癌细胞消化时间多久?

PANC-1细胞需要注意消化时间，一般PANC-1细胞放培养箱消化六分钟左右，先用胰酶把细胞吹下来后再用培养液终止消化，消化时间不够，易成团。

2.PANC-1人胰腺癌细胞消化后抱团怎么处理?

PANC-1细胞若消化后已经抱团，并且严重的话，建议不要继续吹打，可以先放回培养箱中贴壁稳定后，隔天在进行消化重铺，尽量避免影响细胞状态，消化下来后在浸泡于胰酶中1-2分钟后在用培养基终止，通过多次重铺得到单咳且状态好的细胞。

PANC-1细胞间连接紧密，消化的目的主要是处理细胞间的连接。在消化过程中，让细胞在胰酶中待足够长时间以去除细胞间的连接。如消化时间不够，则贴壁后会出面聚团现象。建议消化过程中到镜下观察在中消化。细胞在消化后铺回皿中时要尽快放入培养箱中，中途若晃动细胞，单颗细胞还会黏连抱团，建议铺进皿中摇匀后不再移动，整个过程建议2mim内，保证细胞单颗贴壁。

PANC-1细胞容易聚团，消化时请尽量消化并轻轻吹散成单个细胞铺板。

3.panc-1细胞生长速度

PANC-1细胞倍增时间为52小时，一分二的话，2-3天左右长满。

参考文献

Lieber M, et al. Establishment of a continuous tumor-cell line (panc-1) from a human carcinoma of the exocrine pancreas. Int. J. Cancer 15: 741-747, 1975. PubMed: 1140870

Wu MC, et al. Mechanism of sensitivity of cultured pancreatic carcinoma to asparaginase. Int. J. Cancer 22: 728-733, 1978. PubMed: 363626

Lan MS, et al. Polypeptide core of a human pancreatic tumor mucin antigen. Cancer Res. 50: 2997-3001, 1990. PubMed: 2334903