OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞培养注意事项及应用

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞简介

OCI-LY3细胞于1983年从一名复发时患有B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL，弥漫性大B细胞淋巴瘤，DLBCL，4B期)的52岁男性骨髓样本中建立，是一种激活型的B淋巴细胞。OCI-LY3细胞在文献中描述为EBV阴性，缺乏典型的t(8;14)易位。OCI-LY3细胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈阴性。

弥漫性大B细胞淋巴瘤是一种非霍奇金淋巴瘤，来源于淋巴结和淋巴组织的恶性肿瘤。

弥漫性大B细胞淋巴瘤是由血液中的B淋巴细胞恶性增殖引起的。这些异常细胞失去正常的生长调控，快速繁殖并侵犯周围组织，导致炎症反应和免疫功能下降。

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞形态特征

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞产品信息

细胞名称：OCI-LY3，人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞

细胞别称：OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3;人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞

种属来源：人

年龄性别：男性

组织来源：弥漫大B淋巴瘤

细胞形态：单个或成团生长的圆形细胞

生长特性：悬浮生长

STR位点信息：Amelogenin：X,Y;CSF1PO：10,12;D2S1338：24;D3S1358：14;D5S818：12;D7S820：11,12;D8S1179：12,13;D13S317：11;D16S539：11,12;D18S51：17;D19S433：13,15;D21S11：28;FGA：21,23;PentaD：9;PentaE：7,11;TH01：7,9。3;TPOX：8,12;vWA：17

保藏机构：ATCC;DSMZ; ACC-761

培养基：IMDM +20%FBS+1%PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

OCI-LY3细胞培养注意事项

OCI-LY3细胞大部分聚集成葡萄串状悬浮生长，细胞团较大时需要吹打成小团，防止团块中间的细胞因营养不足而死亡，小团块无需处理。除非实验需要，不建议将细胞吹散成单个细胞；

OCI-LY3细胞对血清要求高，应该使用优质血清进行培养，血清比例为20%；

随着培养时间增加，会有部分细胞贴壁伸展的情况，传代时可以轻轻吹打细胞贴壁面，吹下的细胞可以正常传代，未吹下的细胞无需收集；

OCI-LY3细胞培养过程存在密度依赖的情况，细胞接种密度不宜过低；

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞培养操作说明

OCILY3细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：IMDM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0。25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLOCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞传代操作

细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

方法一：收集细胞，1000RPM条件下离心3-5min分钟，弃去上清液，补加1-2ml培养液后吹匀，将细胞悬液按1:2到1:4的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞，在显微镜下观察OCI-LY3细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞冻存步骤

a. 收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b. 根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c. 将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞换液方法

半换液法

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等;(培养基提前预热)；

2. 将培养瓶静置5-10min，待细胞沉底;(肉眼观察细胞沉底情况)；

3. 吸头紧贴液体表面，小心吸出一半的培养基，转移到离心管；

4. 1000rpm 4min离心，离心管里若有细胞，则用新鲜培养基重悬后放回原瓶；

5. 原瓶补充一半的新鲜培养基。

离心换液法

1. 准备所需的培养基、离心管以及无菌枪头等;(培养基提前预热)；

2. 将所有细胞悬液转移至离心管中；

3. 1000rpm，4min离心；

4. 培养瓶中加入适量新鲜培养基；

离心完成后弃上清，加适量新鲜培养基轻轻重悬细胞沉淀，将细胞悬液接种回培养瓶中，混匀细胞，放入培养箱中继续培养。

OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞培养常见问题

1. OCI-LY3细胞碎片多?

悬浮细胞受到运输或者其他因素导致细胞损伤时，容易产生细胞碎片，碎片可通过低速离心(750rpm，4min)去除;低速离心同时也会丢失细胞，故细胞密度低的时候不适用，细胞密度低时应正常转速离心，保留细胞优先。

2. OCI-LY3细胞生长慢或不生长怎么办?

处理方法：悬浮细胞有密度依赖性，在高密度下状态比较好，低密度时状态较差，所以传代比例要控制，细胞状态不好时，传代可以不用离心法，而是补液或者半换液的方式，以避免离心损失细胞。

3. OCI-LY3细胞为什么会贴壁?

细胞培养瓶静置时间太长，细胞沉底后会出现少量贴壁现象，但这种贴壁非常松，吹一下或拍一下细胞就可以起来;此现象为正常现象，无需特殊处理。

如果细胞贴的非常紧，形态已经变成类似于上皮样时，需考虑是否为细胞特性或者有其他因素刺激导致;日常操作避免染菌以及使用优质血清是预防悬浮细胞贴壁的有效方法。

4.OCI-LY3人弥漫大B细胞淋巴瘤细胞复苏后活率不高怎么处理?

OCI-LY3细胞复苏后，死细胞多，活细胞只有少量几颗。可以重铺两天，生长缓慢，有少量小团，补5%血清。三四天后，细胞变多，团团变大，放置两三天后，细胞变多。OCI-LY3细胞开始正常生长，长得快，OCI-LY3有细胞贴壁生长的现象。

OCI-LY3细胞应用研究

OCI-LY3细胞是一种常用的细胞系，‌广泛应用于生物学和医学研究中。‌这种细胞系通常用于研究淋巴细胞的生物学特性、‌药物筛选、‌免疫学研究等领域。‌例如，‌它可以用于研究淋巴细胞的增殖、‌分化、‌凋亡等过程，‌以及淋巴细胞与外界因素的相互作用。‌此外，‌OCI-LY3细胞还可以用于筛选针对淋巴细胞疾病的药物，‌如淋巴瘤等。‌这些研究有助于我们更好地理解淋巴细胞的功能和疾病机制，‌为开发新的治疗方法和策略提供理论基础。‌

人淋巴瘤OC-Ly3细胞的免疫学特性研究和小鼠模型建立

以人弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)活化B细胞(activated B-cell,ABC)型细胞株OCH-Ly3为研究对象,探索ABC型的生物学特性及肿瘤相关分子的表达,以及小鼠成瘤条件。对不同条件下培养的OCI-Ly3细胞进行对比分析,观察细胞生长形态及生物学特性;分析肿瘤相关抗原在OCI-Ly3细胞的表达情况;采用皮下和腹腔接种,在SCID小鼠中建立移植瘤动物模型。流式分析显示,体外培养的OCI-Ly3细胞对c-Met,Ki-67和survivin等细胞增殖和凋亡相关标记物具有较高的表达;SCID小鼠皮下接种107OCI-Ly3细胞,成瘤率87。5%;腹腔接种2X107细胞,成瘤率75%;肿瘤组织符合人DLBCL的组织学特征,且分布弥散,具有较高的侵袭性。成功构建了人ABC型DLBCL的小鼠模型,并对OCI-Ly3细胞的体外培养特性和与肿瘤发生相关的免疫标记物进行了较为系统的检测,为DLBCL的进一步研究提供了参考和工具。

弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是成人淋巴瘤中最常见的病理类型。Alizadeh 等人利用基因芯片技术将DLBCL分为2型:表达模式类似于正常的生发中心B细胞即GCB样(germinal center B-cell-like),和表达模式类似于体外活化的外周血B细胞即ABC样(activated B-cell-like)。研究表明,GCB型和ABC型在起源、致瘤机制、染色体异常部位等方面均有很大差别,且GCB型DLBCL的预后明显好于ABC型。虽然DLBCL。分型对指导疾病的治疗和预后具有较大的意义,但各型的发病机理及与治疗和预后相关的因子,还有待于更深入的研究。DLBCL的相关动物模型为上述研究提供了良好的实验工具。前期已对两株GCB型人DLBCL细胞株(SUDHL-4和OCI-Ly19)进行了深入研究。研究选择ABC型DLBCL细胞株OCI-Ly3,分别从皮下和腹腔注入重症联合免疫缺陷(SCID)小鼠,探索在小鼠中建立人ABC样DLBCL肿瘤模型的条件,及肿瘤生长和组织形态特点;并首次对培养的OCI-Ly3细胞进行免疫标记物分析。研究可为人DLBCL的进一步研究提供良好的动物模型。

OCI-LY3细胞参考文献

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