266-6细胞类型及特征,培养步骤和应用领域分析

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞简介

266-6于1985年从患有胰腺腺泡癌的小鼠胰腺中分离出来，采用弹性蛋白酶I/SV- 40T抗原融合基因诱导肿瘤。这些细胞保持部分分化的表型，并表达可检测水平的一些消化酶mRNA。细胞对卡巴胆碱和胆囊收缩素有反应，但对P物质、分泌素或血管活性肠肽(VIP)无反应。细胞带有弹性蛋白酶I/新霉素转基因。

266-6细胞类型及特征

266-6细胞系具有上皮细胞样形态，可以在培养条件下进行贴壁生长。

它保留了部分分化的表型，并且表达多种消化酶mRNA，这使得它在研究胰腺腺泡癌的生理和病理过程中具有独特的价值。

此外，266-6细胞系对卡巴胆碱和缩胆囊素等刺激物有反应，但对P物质、促胰液素或血管活性肠肽(VIP)没有反应，这一特性使得研究者可以通过不同的刺激条件来观察和研究细胞的反应。

266-6细胞形态

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞信息

细胞名称：266-6，小鼠胰腺腺泡癌细胞

种属来源：小鼠

组织来源：胰腺

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

培养基：DMEM+10%FBS+PS

STR位点信息：Mouse STR 4-2：19.3,20.3;Mouse STR 5-5：14;Mouse STR 6-4：18;Mouse STR 6-7：12,17;Mouse STR 12-1：17;Mouse STR 15-3：22.3;Mouse STR 18-3：16;Mouse STR X-1：28

保藏机构：ATCC; CRL-2151;Ubigene; YC-C014

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞培养操作说明

266-6细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mL266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

4)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞传代小贴士

1)一定要防止细胞过消化，因过消化，使细胞成团，不均匀，且对细胞伤害很大，影响细胞贴壁和导致生长状态差等。

2)若在加入未经 37℃温育的胰酶(指仅为室温)消化细胞时，即使细胞已经变圆，且透亮，用完全培养基终止消化后仍很难吹打下来。那是因为胰酶的温度不适宜，可把残留有胰酶作用的培养皿放到 CO2 培养箱中，放置 2-3min，让胰酶在其最佳温度(37℃)下消化细胞。

3)用力吹打和气泡产生对细胞都有伤害，故应轻柔吹打并尽量减少气泡产生，吹打结束使细胞尽量分离成单个细胞。

4)一般 6cm 加完全培养基 5ml，10cm 培养皿加培养基 12-15ml，T25 瓶加培养基 8ml。

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞，在显微镜下观察266-6细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

266-6小鼠胰腺腺泡癌细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

266-6细胞文献引用及溯源

1967年始，迄今为止，关于小鼠胰腺腺泡癌细胞的文献已有29篇。

266-6 cell line最早的一篇文献R Rochford 1, L P Villarreal在1991年发表于ASM Journals，主要描述266-6细胞作为转化的腺泡细胞系的代表。通过比较与正常胰腺细胞之间的差异，研究人员可以评估细胞特异性控制和增强子需求对于多瘤病毒(Py)DNA复制的影响。通过观察266-6细胞中Py复制效率的变化，揭示Py病毒在转化细胞中的复制机制，并与正常胰腺细胞的复制模式进行对比，从而更深入地理解Py病毒的复制特性及其调节机制。

266-6细胞系应用

266-6是一种重要的实验细胞系，被广泛用于生物学和医学研究。

在医学研究中，266-6细胞系被广泛用于研究胰腺腺泡癌的发病机理、药物筛选以及治疗方法的探索。通过对这种细胞系的研究，科学家们可以深入了解胰腺腺泡癌的生物学特性，为开发新的治疗策略提供重要依据。

此外，由于266-6细胞系具有稳定的生长特性和可重复性，它也成为了研究胰腺腺泡癌基因表达和调控的重要工具。利用这种细胞系，研究者可以通过基因敲除、基因过表达等手段来观察特定基因对细胞生长、分化以及恶性转化的影响，从而揭示胰腺腺泡癌发生和发展的分子机制。

266-6细胞应用领域

●胰腺腺泡细胞癌(ACC)是一种罕见的恶性肿瘤，由形态与腺泡细胞相似的细胞组成，并有证据表明肿瘤细胞合成外分泌酶，占所有胰腺肿瘤的1%-2%。

●266-6细胞可以用来理解胰腺腺泡细胞癌的发病机制、生物标志物的开发，以及化疗、放射治疗、靶向治疗和免疫治疗的评估和优化。

●研究人员可以利用266-6细胞产生的酶的免疫组织化学标记研究ACC的鉴别诊断，研究用于表征ACC的标志物和进行测序，例如确定胰腺ACC中多个潜在的可靶向遗传改变。

●在诊断方面，266-6细胞可以构建BALB/c品系小鼠移植瘤模型，利用CT和MRI对接种小鼠进行扫描，可以准确地描述ACC成像特征。

●在治疗方面，荷瘤鼠模型可以用于研究胰腺腺泡细胞癌的分期、预后、预测因素、扩散和转移、治疗等。

综上所述，小鼠胰腺腺泡癌细胞系266-6是一种重要的实验工具，对于研究胰腺腺泡癌的发病机理、药物筛选以及治疗方法的探索具有重要意义。随着科学技术的不断进步和研究方法的不断完善，相信这种细胞系将在未来的医学研究中发挥更加重要的作用。

●细胞标志物：包括但不限于CK8、CK18、嗜铬粒蛋白、突触素、BCL10等。

266-6细胞参考文献

Kruse F, et al. The cell-specific elastase I enhancer comprises two domains [published erratum appears in Mol. Cell. Biol. 8: 1862, 1988]. Mol. Cell. Biol. 8: 893-902, 1988. PubMed: 3352608

Swift GH, et al. Differential requirements for cell-specific elastase I enhancer domains in transfected cells and transgenic mice. Genes Dev. 3: 687-696, 1989. PubMed: 2744460

Ornitz DM, et al. Elastase I promoter directs expression of human growth hormone and SV40 T antigen genes to pancreatic acinar cells in transgenic mice. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 50: 399-409, 1985. PubMed: 3006998