TC1细胞形态,培养步骤,细胞应用及参考文献

TC-1小鼠肺上皮细胞简介

TC-1，小鼠肺上皮细胞。1996年由Ken-Yu Lin等人取自C57BL/6小鼠的原代肺上皮细胞，使用人乳头瘤病毒HPV-16 E6和E7永生化，然后用活化的ras癌基因转化，最终形成了表达E6和E7的致瘤细胞系TC-1，同时验证了牛痘病毒疫苗Sig/E7/LAMP1抗TC-1肿瘤的作用机制。

TC-1小鼠肺上皮细胞分离自小鼠肺组织，可用于分析肺上皮细胞对外界因素的反应。因此，小鼠肺部的TC-1可以作为疾病的体外模型。TC-1对于研Chemicalbook究肺的发育、损伤和修复是必不可少的。从事呼吸系统疾病如急性呼吸窘迫综合征(ARDS)、囊性纤维化、肺气肿和肺炎研究的人员通常依赖TC-1进行研究。

TC-1小鼠肺上皮细胞分离自小鼠肺组织，TC-1小鼠肺上皮细胞是肺细胞的主要类型之一，可用于分析肺上皮细胞对外界因素的反应。

tc1细胞形态

TC-1小鼠肺上皮细胞产品信息

细胞名称：TC-1，小鼠肺上皮细胞

细胞别称：TC-1[JHU-1]; Tissue Culture-1;小鼠肺上皮细胞

种属来源：小鼠

Breed/subspecies: C57BL/6.

组织来源：肺

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

培养基：90%1640+10%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

TC-1小鼠肺上皮细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：1640基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

TC-1小鼠肺上皮细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头(已灭菌)，培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLTC-1小鼠肺上皮细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，(若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中)，标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀TC-1小鼠肺上皮细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动)，第二天换液并检查细胞密度。

TC-1小鼠肺上皮细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出TC-1小鼠肺上皮细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;

4)打开废液泵，用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS)，轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对TC-1小鼠肺上皮细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有TC-1小鼠肺上皮细胞悬液的离心管放入离心机中(配平)，1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀)，将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀)，最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。

TC-1小鼠肺上皮细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿，巴士管，离心管(已灭菌)，枪头(已灭菌)，移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵;

2)从培养箱拿出TC-1小鼠肺上皮细胞，在显微镜下观察TC-1细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

TC-1小鼠肺上皮细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

TC1细胞文献溯源

1989年始，迄今为止，关于小鼠肺上皮细胞的文献已有23篇。

在pubmed数据库中用“TC-1 cell respiratory”搜索该关键词，第一篇为2015年Savannah Maggio 在PLoS One. 发表的“Control of Francisella tularensis Intracellular Growthby Pulmonary Epithelial Cells”。

● 土拉弗朗西氏菌在多种宿主细胞类型中增殖，但其毒力与在巨噬细胞中生长的能力相关。

● 研究使用小鼠肺上皮细胞系(TC-1细胞)探讨土拉弗朗西氏菌在非巨噬细胞宿主细胞中的生长控制要求。

● 细胞因子IFN-γ、TNF和IL-17A的组合可激活小鼠肺上皮细胞，抑制土拉弗朗西氏菌的细胞内生长。

● 小鼠肺上皮细胞通过产生iNOS和活性氮中间体来控制土拉弗朗西氏菌的生长。

● 小鼠肺上皮细胞在体内和体外均可通过活性氮中间体抑制土拉弗朗西氏菌的细胞内生长。

TC-1细胞应用领域

● 学者利用小鼠肺上皮细胞(TC-1)进行基因工程方面的研究，例如建立小鼠肺腺癌模型，对于理解肿瘤发生、治疗反应和耐药性机制具有不可估量的价值。肺上皮还是一种免疫活性屏障表面，可以感知气道环境的变化并与驻留和招募的免疫细胞相互作用。我们可以研究小鼠肺上皮细胞与局部神经元和免疫系统的相互作用。

● 研究者可以利用TC-1研究肺腺癌的包括生长、形态、致瘤性、转移能力、外源代谢、突变状态、信号转导活性、细胞遗传学和电导等生物特性。

● TC-1细胞可以用于生物被膜相关的研究，例如研究生物被膜对细胞黏附、侵袭和增殖的影响。

● TC-1细胞可用于研究肺损伤(调亡和炎症)的自痊机制、干预方法。

● 研究者利用TC-1细胞用于药物筛选和评估，例如对Incrna和脂多糖等潜在治疗肺纤维化、砂肺和脓毒症等疾病的候选药物的敏感性。

● 在临床上，TC-1细胞模型还可以用于研究脓毒症等严重感染性疾病的病理机制，为治疗提供参考依据。

浅析宫颈癌细胞TC-1在抗肿瘤药物研发上的作用

宫颈癌是一种恶性肿瘤，主要病因是人乳头瘤病毒HPV的持续感染，主要致病型有HPV16和HPV18。建立保持人宫颈癌生物学特性的小鼠宫颈癌模型，可以为进一步研究宫颈癌的发病机制和研发治疗宫颈癌的药物提供了非常重要的科研工具。目前应用较多的小鼠宫颈癌模型多为小鼠皮下注射HeLa细胞或CaSki细胞。TC-1 细胞为含有 HPV16 型 E6 / E7 基因的小鼠肺上皮细胞,通过接种 TC-1细胞也可以构建进行肿瘤实验研究的宫颈癌动物模型。

鼠肺上皮细胞株TC-1、鼠源性的HPVl6阳性的肿瘤细胞株，可以广泛用于宫颈癌的动物实验研究。TC-1 细胞系可持续表达 E6、E7 蛋白,具有和宫颈癌细胞相似的生物学行为,使建立鼠宫颈癌原位移植模型成为可能。主要表达在自然杀伤(NK)细胞、细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和肠内皮细胞表面的CDl60，可结合配体sHIA-G1后能抑制血管增生，在抗肿瘤治疗中为抑制新生血管形成提供良好分子靶标。

如有研究者将C57BL/6小鼠接种TC-1宫颈癌细胞建立小鼠荷瘤模型，免疫磁珠分选小鼠脾脏细胞获得CD8+T细胞，流式细胞术检测CDl60在CD8+T细胞上的表达;流式细胞仪(FACS)分选CD8+T细胞获得CDl60+CD8+T细胞群和CDl60-CD8+T细胞群，将两群细胞分别与肿瘤细胞抗原肽热休克蛋白70(HSP70)-TC-1复合物和去除CD8+T的脾细胞混合，两群混合细胞各分为两组，其中一组同时加入CDl60高亲和力配体单纯疱疹病毒侵入介导子(HVEM)的抗体，刺激培养6 d，羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂(CFSE)标记法检测CD8+T细胞增殖，流式细胞术检测各组细胞胞内穿孔素和γ-干扰素(IFN-γ)的表达[1]。该研究发现CDl60在荷瘤小鼠的脾CD8+T细胞上表达升高且与其免疫活性功能的下降有关;阻断CDl60和HVEM的相互作用，部分逆转了CD8+T细胞的免疫活性的抑制。

以TC-1细胞构建的小鼠宫颈癌模型为研究对象，进行抗肿瘤药物研发的研究有很多。如有研究者观察掌叶半夏脂溶性提取物(PE)对正常免疫功能荷瘤小鼠体内免疫的影响[2]。实验选用宫颈癌TC-1细胞株种植于野生型C57BL/6小鼠右侧颈背部皮下，建立正常免疫功能荷瘤小鼠模型，用于模拟正常机体患HPV(+)肿瘤后免疫功能状态的改变。

人类疾病的动物模型是具有人类疾病模拟性表现的动物疾病材料，是实验假说和临床假说的实验基础，构建小鼠宫颈癌模型为研究宫颈癌的发病机制、预防及治疗策略提供了更为宽广的研究基础。美迪西药效部经过多年的经验积累、多方验证和长期实践考验，已经建立了完善的动物模型库，可根据客户的需要提供各种有效的动物模型，用来检测药物的有效性。

也有研究者研究了淫羊藿苷体外对致宫颈癌TC-1细胞的增殖抑制及促凋亡作用。方法是利用细胞培养,用不同浓度的淫羊藿苷在一定的时间处理致宫颈癌TC-1细胞,光学显微镜直接观察药物对细胞的作用;MTT法检测淫羊藿苷对TC-1细胞的增殖抑制作用;Dapi核染色、Annexin v-FITC/PI流式细胞学检测细胞凋亡[3]。该研究发现淫羊藿苷对TC-1细胞增殖有抑制和促凋亡作用,并呈时间浓度依赖性。

TC1细胞标志物

E-cadherin、Cytokeratin 18、Aquaporin 5、Surfactant Protein-C和T1α。

TC1细胞参考文献

Treatment of established tumors with a novel vaccine that enhances major histocompatibility class II presentation of tumor antigen.

Cancer Res. 56:21-26(1996)