MFC小鼠胃癌细胞培养指南及应用领域

MFC小鼠胃癌细胞简介

小鼠胃癌细胞(Mouse Forestomach Carcinoma cells，简称MFC)是一种源自小鼠胃部的癌细胞系，通常用于癌症研究，特别是在研究胃癌的发展和治疗策略方面。MFC细胞保留了胃癌细胞的特征，包括上皮细胞样形态和可能与胃癌发生相关的基因和蛋白质表达。

MFC细胞系来源于小鼠癌症模型，广泛用于癌症研究。这些细胞本质上是上皮细胞，是研究胃肿瘤发生机制的重要工具。MFC细胞表现出胃癌的典型特征，包括快速增殖、侵袭行为，以及当异种移植到免疫功能受损的小鼠中时形成肿瘤的能力。研究人员经常使用这种细胞系来研究参与癌症进展的分子途径，以及评估针对这种恶性肿瘤的潜在治疗剂。

MFC细胞对于研究特定基因和蛋白质在癌症中的作用特别有用。它们通常用于基因表达研究、敲除实验和蛋白质相互作用测定。该细胞系还可作为测试化疗药物疗效和了解耐药性机制的模型。此外，MFC细胞系用于探索肿瘤微环境的研究，包括癌症细胞和基质细胞之间的相互作用。总之，MFC细胞系是促进对癌症生物学的理解和开发新的治疗策略的宝贵资源。

MFC小鼠胃癌细胞产品信息

细胞名称：MFC，小鼠前胃癌细胞

种属来源：小鼠

组织来源：胃

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

保藏机构：CLS; 300652；KCB; KCB；92020YJ

培养基：DMEM+10%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

MFC细胞形态

MFC小鼠胃癌细胞培养操作说明

mfc细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

MFC小鼠胃癌细胞复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟（或者放在超净工作台常温放 30min）。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头（已灭菌），培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLMFC小鼠胃癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，（若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中），标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵（吸力不要太大）取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀MFC小鼠胃癌细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。（尽量平直放入不要晃动），第二天换液并检查细胞密度。

MFC小鼠胃癌细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出MFC小鼠胃癌细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代；

4)打开废液泵，用废液泵吸头（吸力不要太大）取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS（6cm 皿）到细胞培养皿中（若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS），轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次；

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min（根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟）后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对MFC细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有MFC细胞悬液的离心管放入离心机中（配平），1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。（尽量平直放入不要晃动）。第二天再观察细胞密度。

MFC细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出MFC小鼠胃癌细胞，在显微镜下观察MFC细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

MFC小鼠胃癌细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×10⁶~1×10⁷/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签（细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基）。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

MFC小鼠胃癌细胞文献溯源

1974年始，迄今为止，关于小鼠胃癌细胞的文献已有220篇。

在pubmed数据库中用“MFC cell line gastric carcinoma”搜索该关键词，第一篇为1987年S S Qian在《中华肿瘤杂志》发表的“Establishment of a mouse forestomach carcinoma cell line (MFC) with spontaneous hematogenous metastasis and preliminary study of its biological characteristics”。

MFC小鼠胃癌细胞概述

该研究成功建立了一种小鼠前胃癌细胞系(MFC)，这种细胞易于通过血液转移到肺部。MFC细胞经过了连续的传代，表现出缺乏接触抑制的特点，并且具有多样的细胞形态。在超微结构上观察到丰富的微绒毛和纤毛，细胞核形状不规则。MFC细胞的倍增时间相对较短，有较高的有丝分裂指数。该细胞系对于同种移植的效率较高，并且能产生自发的肺部转移。综合而言，MFC细胞系保留了原发肿瘤的特征，可用于进行实验性治疗、研究肿瘤转移机制以及分离特定的细胞亚群。

MFC小鼠胃癌细胞应用领域

MFC(小鼠胃癌细胞)是由钱书森、高进等于1985年建立的，利用源自615小鼠前胃鳞癌移植瘤FC瘤组织，小块法培养得到，已传132代。MFC细胞细胞在615小鼠皮下移植100%成功。有学者利用MFC细胞研究其基因型、趋器官性和免疫监视之间的联系，以及不同转移模式。

MFC细胞作为一种胃肿瘤细胞模型，可用于研究胃肿瘤的发生、发展和治疗策略。学者利用MCF细胞研究胃癌发病机制的分子机制和耐药机制、设计新的靶向治疗方法，提高患可以者的生存率;通过研究新抗原肽在MFC细胞中的表达，可以探索胃肿瘤的免疫原性及其在疫苗开发中的应用。

研究人员利用纳米粒子技术，可以研究MFC细胞的增殖机制和调控因素，为胃肿瘤的药物治疗提供新的思路。研究者利用MFC细胞研究小鼠、大鼠胃内菌群和丁酸等微生物代谢产物对胃肿瘤的影响，有助于揭示胃肿瘤的发病机制和寻找新的预防、治疗策略。