BEAS-2B细胞培养条件,优点,应用领域及文献综述

BEAS-2B人支气管上皮样细胞简介

BEAS-2B(B210)人正常肺上皮细胞是一种来源于人类正常肺上皮细胞的细胞系，是广泛用于研究肺上皮细胞生物学、毒理学和药理学等领域的细胞系。BEAS-2B细胞由美国国立癌症研究所(National Cancer Institute)的Barbara C. Reynolds教授于1988年从健康人的肺组织中分离和培养而来，是一种无限增殖的细胞系，具有上皮细胞的特性和功能。

BEAS-2B细胞用腺病毒12-SV40病毒杂交病毒感染并克隆，BEAS-2B细胞保留了对血清反应进行鳞关分化的能力，并有用于筛选诱导或影响分化及致癌的化学或生物制剂。BEAS-2B细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性。

BEAS-2B人支气管上皮样细胞形态特征

BEAS-2B人支气管上皮样细胞产品信息

细胞名称：BEAS-2B，人支气管上皮样细胞

细胞别称：Beas-2B; BEAS 2B; BEAS2B; Beas2B; Bronchial Epithelium transformed with Ad12-SV40 2B；人支气管上皮样细胞；人支气管上皮样细胞

种属来源：人

组织来源：肺；支气管；正常；上皮；病毒转化

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X, Y；D8S1179：13, 15；D21S1128, 30；D7S820：10, 13；CSF1PO：9, 12；D3S1358：15, 17；TH01：7, 9.3；D13S317：13；D16S539：12；D2S1338：22, 23；D19S433：13.2, 15.2；vWA：17, 18；THOX：6, 11；D18S51：18, 19；D5S818：12, 13；FGA：20, 24

保藏机构：ATCC; CRL-9609 ECACC; 95102433

培养基：90%DMEM+10%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

BEAS-2B人支气管上皮样细胞培养条件

beas2b细胞培养基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

人支气管上皮细胞 beas-2b复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟（或者放在超净工作台常温放 30min）。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头（已灭菌），培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLBEAS-2B人宫颈癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，（若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中），标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵（吸力不要太大）取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀BEAS-2B人宫颈癌细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。（尽量平直放入不要晃动），第二天换液并检查细胞密度。

人支气管上皮细胞 beas-2b传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出BEAS-2B人宫颈癌细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代；

4)打开废液泵，用废液泵吸头（吸力不要太大）取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS（6cm 皿）到细胞培养皿中（若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS），轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次；

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min（根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟）后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对BEAS-2B人宫颈癌细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有BEAS-2B人宫颈癌细胞悬液的离心管放入离心机中（配平），1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。（尽量平直放入不要晃动）。第二天再观察细胞密度。

人支气管上皮细胞 beas-2b传代小贴士

1.细胞密度：BEAS-2B细胞的密度应该控制在70%-80%。过高的密度会导致细胞死亡，而过低的密度会影响实验结果。

2. 培养条件：BEAS-2B细胞的培养条件应该控制在37℃、5% CO2和95%相对湿度的条件下。保持培养条件的稳定性对于细胞的生长和传代至关重要。

3. 染色体异常：BEAS-2B细胞具有一定的染色体异常。因此，在进行染色体相关研究时需要注意这一点。

4. 无菌操作：在进行细胞培养和实验操作时，需要进行无菌操作，以避免细菌和真菌等的污染。

人支气管上皮细胞beas-2b冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出Hela人宫颈癌细胞，在显微镜下观察Hela细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

人支气管上皮细胞beas-2b冻存步骤

a.收集beas-2b细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL beas-2b细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签（细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基）。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

BEAS-2B人支气管上皮样细胞培养常见问题

1.BEAS-2B人支气管上皮样细胞形态和atcc形态上皮样不同?

BEAS-2B细胞为贴壁细胞，显微镜下呈典型上皮细胞样，用不含血清的培养基培养时，BEAS-2B细胞具有典型的呼吸上皮细胞多边形态;用含血清的培养基培养时，密度低时细胞形态会呈长梭型，但密度高一些以后形态会变短。这是因为BEAS-2B细胞保留了对血清反应进行鳞关分化的能力，培养时加与不加血清，会出现不同的细胞形态。

BEAS-2B常用的培养条件有2种：BEBM 支气管上皮细胞生长培养基(不含血清)，或DMEM+10%FBS。用BEBM培养基培养时，培养瓶应预先涂有溶解在BEBM培养基中的 0.01 mg/mL 纤连蛋白、0.03 mg/mL I 型牛胶原蛋白和 0.01 mg/mL 牛血清白蛋白的混合物。

2.BEAS-2B人支气管上皮样细胞什么时候传代?

80%左右汇合度时传代，完全汇合会使细胞末端分化。

3.BEAS-2B人支气管上皮样细胞消化时间?

放入37℃培养箱消化2分钟左右。(不同的胰酶牌子存在差异，及时观察，以实际情况为主。

BEAS-2B人支气管上皮样细胞优点

1. 来源稳定

BEAS-2B细胞由美国国立癌症研究所(National Cancer Institute)的Barbara C. Reynolds教授于1988年从健康人的肺组织中分离和培养而来。因此，BEAS-2B细胞的来源稳定，能够提供一致的研究结果。

2. 易于培养

BEAS-2B细胞易于培养，可以在常规的细胞培养条件下生长。其培养基成分简单，不需要特殊的培养条件或培养设备。

3. 增殖速度快

BEAS-2B细胞的增殖速度较快，可以在较短时间内得到大量的细胞。这对于大规模的实验和药物筛选具有重要意义。

4. 稳定性好

BEAS-2B细胞具有稳定的染色体组成和基因表达模式，可以长期稳定地生长和传代。这使得BEAS-2B细胞成为研究肺上皮细胞生物学和疾病机制的理想细胞模型。

5. 表达多种肺上皮细胞标志物

BEAS-2B细胞表达多种肺上皮细胞标志物，如细胞角蛋白(cytokeratin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)等。这些标志物的表达水平可以用于评估BEAS-2B细胞的表型特征，以及研究肺上皮细胞的生理和病理过程。

6. 可用于研究肺部疾病

BEAS-2B细胞可以用于研究肺癌、哮喘、慢性阻塞性肺病等肺部疾病的发病机制和治疗方法。例如，可以通过BEAS-2B细胞模拟空气污染、化学品或药物的毒性作用，评估它们对肺上皮细胞的影响。

7. 可用于毒性评估

BEAS-2B细胞可以用于评估化学品、药物、净化剂等的毒性作用。这些毒性评估可以在体外进行，避免动物实验和人体试验，具有较高的安全性和可靠性。

8. 用于开发肺上皮细胞相关疾病药物

BEAS-2B细胞用于开发肺上皮细胞相关疾病的药物具有重要意义。例如，可以使用BEAS-2B细胞来筛选和评估哮喘、肺癌等疾病的药物，为疾病治疗提供新的思路和方法。

9. 用于研究病毒感染机制

BEAS-2B细胞可以用于研究病毒感染机制和病毒的致病性。例如，可以使用BEAS-2B细胞研究呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus，RSV)的感染机制和致病性，为疾病的预防和治疗提供新的思路和方法。

BEAS-2B人支气管上皮样细胞应用

BEAS-2B细胞是从肺癌个体的正常人支气管上皮病理切片分离出的上皮细胞。这个细胞引种自ATCC CRL-9609，又可被称为支气管上皮细胞。BEAS-2B细胞系最初是通过使用腺病毒12-SV40杂交病毒感染，并通过连续细胞传代建立的永生化细胞系，它保留了对血清反应进行鳞关分化的能力，这种能力可用于筛选诱导或影响分化及致癌的化学或生物制剂，因此 BEAS-2B细胞被认为是研究药物代谢活化作用和呼吸系统肿瘤以及分子机制理想的细胞模型。

1.BEAS-2B 细胞在成骨和成脂分化方面与 hMSCs 具有相似的潜力

将细胞分化诱导21天后，用油红染色分化脂肪细胞中的脂质液泡，然后使用茜素红染色分化骨细胞中的钙沉积。结果表明BEAS-2B和在成骨发生或脂肪发生方面均显示出几乎相同的阳性染色，这说明BEAS-2B 细胞能像hMSC1细胞一样能在诱导后表现出很强的骨细胞和脂肪细胞分化能力。

2.BEAS-2B可用于筛选化学和生物制剂诱导

目前，BEAS-2B已被广泛用于研究肺癌发生的细胞和分子机制，其中包括上皮间质转化(EMT)在肺癌和肺炎球菌感染中的作用等。此外，BEAS-2B细胞系已被用作体外细胞模型，用于检测和筛选具有潜在肺毒性或肺部致癌性的各种化学和生物制剂。

3.使用CRISPR-U在BEAS-2B细胞中实现基因编辑

基因编辑和细胞模型的建立对于推进功能基因组学、信号通路、新陈代谢、细胞死亡、药物发现、药物反应和癌症研究等领域具有重要的意义。BEAS-2B细胞作为研究药物代谢活化作用和呼吸系统肿瘤以及分子机制的理想细胞模型，已经有许多研究人员利用CRISPR/Cas9技术对其进行编辑以研究癌症特征、耐药机制的披露、癌症治疗、细胞死亡研究、功能基因组学、信号通路、药物发现、药物反应和细胞治疗等多种具有重要意义的课题。

BEAS-2B细胞应用领域总结

人正常肺上皮细胞(BEAS-2B细胞)在维持肺部免疫稳态方面发挥着重要作用，对我们的肺提供保护，免受肺部遭受空气中的病原体和污染物的侵害。

BEAS-2B细胞具有高度的自我复制能力，可以形成具有一致性的克隆。这一特性使得其在组织工程、细胞治疗等领域具有广泛的应用。

学者通过对BEAS-2B细胞进行免疫组化和细胞周期分析了解细胞的增殖和凋亡情况，以及细胞的分化状态，进而研究肺癌的发病机制和药物治疗效果。

BEAS-2B细胞中的基因表达受到多种因素的影响，包括环境因素、遗传因素等。通过研究人抗原调控作用，以及基因表达的变化，我们可以更好地了解肺上皮细胞的生理和病理过程，为肺癌的预防和治疗提供新的思路和方法。

有学者利用BEAS-2B细胞研究肺部的氧化应激和针对炎症反应的敏感性;还有学者通过基因芯片和信号通路的手段利用BEAS-2B细胞研究外泌体、hnrnp a2/b1等分子在肺癌发生和发展中的作用，以便更好地了解肺癌的发病机制。

BEAS-2B细胞文献溯源

1988年始，迄今为止，关于人支气管上皮样细胞的文献已有2231篇。

在pubmed数据库中用“BEAS-2B cell line”搜索该关键词，第一篇为1988年P Amstad 在Mol Carcinog. 发表的“Neoplastic transformation of a human bronchialepithelial cell line by a recombinant retrovirusencoding viral Harvey ras”。

beas-2b细胞文献概述

通过v-Ha-ras癌基因激活的人支气管上皮细胞系BEAS-2B在裸鼠体内可快速转化为间变性癌，且肿瘤细胞系的v-Ha-ras肿瘤转化效率较正常细胞系高，支持了“永生化”假设。

细胞标志物：Epithelial cell marker、c-Met Receptor和T1α。

参考文献

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