常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法
常见细胞污染类型如何辨别及预防解决方法:细胞培养中常见的生物污染类型有7种,分别是细菌污染,支原体污染,原虫污染,黑胶虫污染,真菌污染,病毒污染以及非细胞污染,真菌污染来源,一般是来自实验服,并且具有气候性,多雨······
发布时间:2024-07-01 17:01:53 细胞资源库平台 访问量:465
小鼠鳞状细胞癌细胞系(Mouse Squamous Cell Carcinoma Cell Line)是一种用于科学研究和医学研究的细胞模型。这种细胞系是从小鼠的鳞状细胞癌肿瘤中分离出来的,并在实验室条件下进行培养和传代,以供研究使用。
细胞名称:SCC7,小鼠鳞状细胞癌细胞系
细胞别称:SCC-7;SCCVII/St;SCCVII;SCC VII;小鼠鳞状细胞癌细胞系
种属来源:小鼠
组织来源:皮肤
生长特性:贴壁生长
细胞形态:上皮细胞样
细胞类型:鳞状癌细胞系
保藏机构:中国典型培养物保藏中心细胞库
培养基:DF12+10% FBS+1%PS
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件:无血清冻存液,液氮储存
SCC7小鼠头颈鳞癌细胞系培养操作说明
实验室条件
1. 无菌环境:无菌室包括更衣室,缓冲间,风淋间,操作间
2. 仪器设备:超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴
锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水
3. 器材耗材:玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器,吸管,多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿,培养瓶等。
4. 试剂:DF12基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs
操作者工作范畴
1. 无菌操作:洗手,戴手套,穿实验服,常喷 75%酒精
1.准备:紫外线照台 30min,提前打开水浴锅设置 37℃,培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟(或者放在超净工作台常温放 30min)。在操作台上摆放好物品,左边放完全培养液,1mL 枪头(已灭菌),培养皿,右上角放废液缸,1mL 移液枪,3mL 巴氏管。检查离心机,废液泵。
2)待水浴锅温度达到 37℃时,戴上手套和护目镜,从-196℃液氮罐中取出冻存管,将含有1 mLSCC7小鼠鳞状细胞癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,同时不断轻轻摇动冻存管,尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化,加4 mL培养基混合均匀, 移入离心机中 100rpm 离心 3min,以 75%酒精喷冻存管外部,移入无菌操作台内。
3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中,(若离心后细胞量较多,可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中),标记日期、所用培养基名称和细胞名称。
4)用废液泵(吸力不要太大)取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清,取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀),将细胞悬液加入到培养皿中,将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀),最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。
5)确定SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞已铺匀后,再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。(尽量平直放入不要晃动),第二天换液并检查细胞密度。
1) 准备工作:紫外线照台 30min,准备好细胞培养所需试剂物品:培养液,胰酶,PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿,巴士管,离心管(已灭菌),枪头(已灭菌),移液枪,废液缸。检查离心机,废液泵;
2)从培养箱拿出SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞,在显微镜下观察细胞密度和细胞状态,当细胞状态良好,且密度达到 85%左右的时候即可进行传代;
4)打开废液泵,用废液泵吸头(吸力不要太大)取一个蓝色枪头吸走上清废液,用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS(6cm 皿)到细胞培养皿中(若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS),轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次;
5)用废液泵吸走 PBS 废液,加1 mL消化液(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)于培养瓶中,拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞,消化 1-3min(根据细胞贴壁情况判断,贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟)后,在显微镜下观察细胞是否变圆变亮,一旦发现大量细胞胞质回缩,细胞间隙增大,即将脱离培养皿底,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
6)用 1ml 移液枪轻柔吹打,保证培养皿底的每个角落都吹打到,边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡,因其对SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞有伤害;需轻柔吹打,用力吹打对细胞也有伤害),把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。
7)将装有SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞悬液的离心管放入离心机中(配平),1000 转离心 3-5min,用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清,取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后(充分混匀),将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中,将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞(一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀),最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。
8) 确定细胞已铺匀后,再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。(尽量平直放入不要晃动)。第二天再观察细胞密度。
1) 准备工作:紫外线照台 30min,准备好细胞培养所需试剂物品:培养液,胰酶,PBS(试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上);传代用培养皿,巴士管,离心管(已灭菌),枪头(已灭菌),移液枪,废液缸。检查离心机,废液泵;
2)从培养箱拿出SCC7小鼠鳞状细胞癌细胞,在显微镜下观察Hela细胞密度和细胞状态,待细胞生长状态良好且存活率高的状态下,细胞密度达 80–90%时,可进行细胞冻存操作,以T25 瓶为例
a.收集scc7细胞株及细胞培养液,将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管,装入无菌离心管中,1000 rpm条件下离心4 min,弃去上清液,用PBS清洗一遍,弃尽PBS,进行细胞计数。
b.根据scc7细胞系数量加入无血清细胞冻存液,使细胞密度5×106~1×107/mL,轻轻混匀,每支冻存管冻存1mL细胞悬液, 在细胞冻存管上贴上细胞标签(细胞标签上包含:细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基)。
c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里,放置 24 小时后,即可移入液氮中保存,标记好入库位置和冻存日期。
C3H小鼠。SCC7细胞是一种被用于研究皮肤癌和癌症生物学的细胞系。SCC7细胞来自于C3H小鼠,是一种小鼠皮肤鳞状细胞癌细胞系。C3H小鼠是实验室中常用的小鼠品系,广泛应用于癌症研究和药物筛选等领域。SCC7细胞的原始来源可能与C3H小鼠体内的皮肤鳞状细胞癌病灶有关。这些细胞被提取、培养和保存,以供科学家进行实验研究和疾病模型研究。
scc7细胞培养基为DF12+10% FBS+1%PS。
1996年始,迄今为止,关于小鼠头颈鳞癌细胞系的文献已有118篇。
在pubmed数据库中用“SCC7 murine”搜索该关键词,第一篇为1996年P G Braunschweiger在Radiat Res.发表的“Radioresistance in murine solid tumors induced by interleukin-1”。
IL-1α对肿瘤细胞放射敏感性的影响尚未充分研究。
IL-1α给药后,肿瘤克隆细胞表现出放射抵抗性,特征是放射剂量参数的变化,类似于缺氧条件下的放射抵抗性。
IL-1α与替拉帕胺具有协同抗肿瘤作用,表明放射抵抗性与缺氧有关● 放射抵抗性是暂时的,可能在12小时内发生重新供氧。
在有氧条件下,IL-1α对SCC-7细胞的无直接影响,但在原代培养中可诱导放射抵抗性。
肿瘤巨噬细胞产生的氧化应激可能是IL-1α在体外诱导放射抵抗性的原因。
体内和体外的氧化应激响应可能具有不同的机制来调节肿瘤放射敏感性。
小鼠头颈鳞癌细胞(SCC7)是一种高糖酵解的细胞类型,这一特性在肿瘤细胞中常见,因为它们通常在低氧环境下进行代谢,需要快速获取能量。
SCC7具有强大的增殖能力,研究人员常用SCC7来研究头颈鳞癌的增殖和凋亡,以及免疫过程在当中起到的关键作用。
由于头颈鳞癌肿瘤具有很强的生长和转移能力,学者也经常利用SCC7细胞研究糖基化和自糖基化在细胞形态和功能中起关键作用。
研究人员可以利用SCC7细胞构建裸鼠/SCID小鼠/NOD-SCID小鼠荷瘤鼠模型,来研究头颈鳞癌的发病机制、治疗策略和预后分析。预后分析通常包括对小鼠存活时间、肿瘤体积、转移情况等参数的监测和统计分析。研究者可能会采用生存分析方法,比如Kaplan-Meier生存曲线和Cox比例风险模型,来评估不同处理组间的生存差异和相关因素的影响。
SCC7还具有基因沉默机制,用于调节细胞基因表达;外泌体细胞间可以起到信息传递的作用。研究人员可以利用SCC7研究这些机制,使用纳米药物靶向干预靶点,抑制肿瘤生长和转移,同时增强免疫系统的反应。
在治疗方面,研究人员可以利用移植该细胞的荷瘤鼠模型研究丹酚酸等药物的抑癌和促凋亡机制;以及使用金纳米棒作为化疗耐药干预手段,理解头颈鳞癌的生物学特征和潜在治疗策略。
CK5、CK14、CK17、p63、E-cadherin等,这些标志物通常参与了鳞状细胞癌的发生、发展和转移过程。
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