U251MG人星形胶质瘤细胞培养,形态,文献引用和应用领域分析

U251MG人星形胶质瘤细胞简介

U-251 MG(U251MG)人星形胶质瘤细胞是来源于人星形胶质瘤组织，经永生化处理的稳定细胞系，主要用于人星形胶质瘤细胞的细胞学科研研究。星形胶质细胞瘤(astrocytome)是最常见的胶质瘤，约占胶质细胞瘤的65%。研究表明，该肿瘤中原癌基因C-sis有过度表达，erb-B1则有扩增。C-sis的过度表达导致PDGF-β链的增加;erb-B1扩增则可使EGF受体过度表达。此外，肿瘤抑制基因P53、Rb、P16可有失活，提示这些改变可能与肿瘤性的生长有关。

星形细胞瘤是一种始于脑或脊髓的细胞生长物。生长物被称为肿瘤，始于星形胶质细胞。星形胶质细胞支持和连接脑和脊髓中的神经细胞。星形细胞瘤的症状取决于肿瘤的位置。脑部星形细胞瘤可引起人格改变、癫痫发作、头痛和恶心。

u251细胞形态

U251MG人星形胶质瘤细胞产品信息

细胞名称：U251MG，人类星形胶质瘤细胞

细胞别称：U-251 MG; U-251-MG; U-251_MG; U251-MG; U251MG; U-251; U251; U251n; U251N; 251 MG; 251MG; 251 MG(6);人类星形胶质瘤细胞

种属来源：人

组织来源：脑

生长特性：贴壁生长

细胞形态：上皮细胞样

STR位点信息：Amelogenin：X;CSF1PO：12,13;D2S1338：22,24;D3S1358：16,17;D5S818：11;D7S820：10,12;D8S1179: 13,15;D13S317：10,11;D16S539：12;D18S51：13;D19S433：13,15;D21S11：29;FGA：21,25;PentaD：10,12;PentaE：7;TH01：9.3;TPOX：8;vWA：16,18

培养基：89%DMEM+10%FBS+PS

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

U251MG细胞培养操作说明

U251细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

3.器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul;黄色 20-200ul;蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：DMEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶(0.25%Trypsin-0.02% EDTA)、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

U251MG细胞复苏步骤方法

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟（或者放在超净工作台常温放 30min）。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头（已灭菌），培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLU251细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，（若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中），标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵（吸力不要太大）取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀U251MG（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。（尽量平直放入不要晃动），第二天换液并检查细胞密度。

U251MG细胞传代操作步骤

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出U251MG，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代；

4)打开废液泵，用废液泵吸头（吸力不要太大）取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS（6cm 皿）到细胞培养皿中（若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS），轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次；

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min（根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟）后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对U251MG有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有U251MG悬液的离心管放入离心机中（配平），1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。（尽量平直放入不要晃动）。第二天再观察细胞密度。

U251MG细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出U251MG细胞，在显微镜下观察U251MG细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

U251MG细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签（细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基）。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

U251MG细胞总结

1. 胶质瘤细胞系，常用作实验模型，是基因编辑领域的热门细胞 ;

2. U251呈多角形，贴壁生长，推荐使用DMEM培养基;

3. 是具有代表性的癌症细胞，被广泛用于药物筛选和分子靶标鉴定;

如何提高U251细胞的转染效率

建议你转染时用无血清培养液，我是转染前半小时把细胞换无血清培养液孵育，然后lipo和质粒同体积分别和无血清培养液混匀10min后，再混匀30min，加入细胞。5h后换回正常培养液。

细胞密度要控制好，状态要好，可以在传代后1-2天，这样密度状态都比较好。

U251细胞和U87细胞的区别

U251细胞和U87细胞是两种常见的人类胶质瘤细胞系，它们在形态学、生物学和分子特征方面存在一些区别。本文将通过对两种细胞的细胞形态、细胞生长、细胞周期、分子特征等方面的比较，来深入了解它们之间的差异。

细胞形态

细胞形态是细胞生物学中最基本的特征之一。U251和U87细胞都是神经胶质细胞瘤细胞系，它们的细胞形态均呈现出星形，长有多个突起，但两者在细节上有一些差异。

U251细胞：U251细胞呈现出明显的星状形态，其胞体较大，细胞核较大，细胞长约为20-30µm。细胞质浓缩，呈现出淡紫色，细胞核圆形或卵圆形，核周有一圈较宽的细胞质。突起相对较短，数量较少，且常常呈现出多分枝的状态。

U87细胞：U87细胞也是星形细胞，细胞质量较少，细胞长约为15-20µm。细胞核相对较小，呈现出椭圆形。突起比U251细胞多，长短不一，常呈现出较长的状态。

通过上述对两种细胞的形态特征比较，可以发现它们在细胞体积、核体积、突起数量和长度等方面存在差异，这些差异可能与细胞生长和分子特征有关。

细胞生长

细胞生长是细胞生物学中的重要指标，也是研究细胞生物学的基础。U251和U87细胞的生长特点如下：

U251细胞：U251细胞具有较快的增殖速度，平均倍增时间为30小时左右。此外，U251细胞的增殖受到外界因素的影响较大，如细胞培养条件、细胞密度等。在适宜的培养条件下，U251细胞可以形成较为紧密的单层细胞群。

U87细胞：U87细胞的生长速度较慢，平均倍增时间为50小时左右。此外，U87细胞的生长不受细胞密度的限制，即使在高密度培养条件下，它们仍然可以正常生长和分裂。

通过上述对两种细胞的生长特点比较，可以发现它们的生长速度和生长受到的影响因素有所不同，这些差异可能与细胞周期和分子特征有关。

细胞周期

细胞周期是细胞生长和分裂的基础过程，它由G1、S、G2和M四个阶段组成。U251和U87细胞的细胞周期如下：

U251细胞：U251细胞的细胞周期长约为24小时，其中G1期长约为11小时，S期长约为7小时，G2期长约为5小时，M期长约为1小时。此外，U251细胞的G1期较长，表明它们在细胞分裂前需要较长的时间进行细胞生长和准备工作。

U87细胞：U87细胞的细胞周期长约为30小时，其中G1期长约为15小时，S期长约为7小时，G2期长约为6小时，M期长约为2小时。此外，U87细胞的G1期较长，表明它们在细胞分裂前需要更长的时间进行细胞生长和准备工作。

通过上述对两种细胞的细胞周期比较，可以发现它们的细胞周期长度和各个阶段的持续时间存在差异，这些差异可能与分子特征有关。

分子特征

细胞的分子特征是细胞生物学研究中的热点和难点，它反映了细胞的生理状态和功能特点。U251和U87细胞的分子特征如下：

1. 基因型

U251细胞和U87细胞都具有TP53和EGFR基因的过度表达，这些基因在胶质瘤的发生和发展中起着重要作用。此外，U251细胞中还存在一些特异性基因表达，如NF1、CDKN2A、PTEN等，这些基因的异常表达也与胶质瘤的发生有关。

2. 细胞周期调控

U251细胞和U87细胞的细胞周期都受到多种细胞周期调控因子的调控，如CDK、p21、p27等。其中，U251细胞的CDK2、CDC2和CDK4的表达较高，而U87细胞则以CDK4为主。

3. 细胞凋亡和增殖

U251细胞和U87细胞的凋亡和增殖也存在一些差异。U251细胞的凋亡率较高，增殖速度也相对较快，而U87细胞则相反，凋亡率较低，增殖速度较慢。

通过上述对两种细胞的分子特征比较，可以发现它们在基因型、细胞周期调控、细胞凋亡和增殖等方面存在差异，这些差异可能是导致细胞形态、生长和分裂特点不同的原因之一。

总结

U251细胞和U87细胞是两种常见的人类胶质瘤细胞系，它们在形态学、生物学和分子特征方面存在一些差异。通过对两种细胞的细胞形态、细胞生长、细胞周期、分子特征等方面的比较，可以发现它们在细胞形态、生长速度、细胞周期长度、各个阶段的持续时间、基因型、细胞周期调控、细胞凋亡和增殖等方面存在一定的差异，这些差异可能与胶质瘤的发生和发展有关。

u251细胞文献溯源

1982年始，迄今为止，关于人类星形胶质瘤细胞的文献已有435篇。

在pubmed数据库中用“U251MG cell line”搜索该关键词，第一篇为1982年Yoshida J在J Colloid Interface Sci.发表的“Tumor microenvironment sensitization via dual-catalysis of carbon-based nanoenzyme for enhanced photodynamic therapy”。

文献概述

研究人员对一种新的水溶性亚硝酰脲药物ACNU进行了抗肿瘤活性测试，对象是四种脑胶质瘤细胞系。

测试了四个因素以确定ACNU的抗肿瘤活性：细胞生长抑制、形态学观察、DNA直方图分析和微孔板敏感性测试。

ACNU对两种细胞系(EA285和U251-MG)表现出细胞生长抑制作用，但对另外两种细胞系(YE2-2和T98)耐药。

目前的敏感性测试结果与其它检查一致，表明这种测试在选择药物和确定有效剂量方面是有帮助的。

u215细胞应用领域

U251，人胶质瘤细胞系，该细胞系是利用外植体技术，从恶性胶质母细胞瘤中分离得到。U251在胶质母细胞瘤的研究中常用作实验模型，可用于提取肿瘤干细胞以及胶质细胞瘤发展机制、药物抗胶质细胞瘤生长的研究等，适合于基因敲除、基因敲低和基因敲入，是基因编辑领域的热门细胞系。

星形细胞瘤是最常见的神经上皮性肿瘤，源自星形胶质细胞，也可能源于神经胶质祖细胞或神经干细胞。这些肿瘤可在中枢神经系统的任何部位发生，成年人和儿童的发生部位有所不同。根据恶性程度，星形细胞瘤分为低度(I和II级)和高度(III和IV级)两类。低度肿瘤通常进展缓慢，预后较好;而高度肿瘤恶性程度高，预后较差。

在研究中，学者常用人类星形胶质瘤细胞(U251MG)研究该细胞细胞凋亡机制(信号通路研究)与抗肿瘤药物如紫杉醇的敏感性和疗效。

研究人员还利用U251MG细胞研究人胶质母细胞瘤细胞的凋亡与相关抗肿瘤药物、新型治疗策略、放射敏感性与放射治疗、免疫反应与炎症、药物敏感性与耐药性等治疗特性。细胞标志物：1. 波形蛋白(Vimentin)2. 胶质纤维酸性蛋白(GFAP)3. 微管相关蛋白tau(MAPT)4. 神经微丝蛋白(NF-200)5. 神经元特异性烯醇化酶(NSE)