HELA人宫颈癌细胞培养,形态特征,转染,应用介绍

宫颈癌细胞hela的由来

HeLa细胞是第一个来自人体组织经连续培养获得的非整倍体上皮样细胞系，是由GeyGO等在1951年从一位31岁美国黑人妇女海瑞塔‧拉克斯（Henrietta Lacks）的宫颈癌组织建立的，经原始组织切片重新观察，Jones等将其诊断为腺癌。HeLa细胞角蛋白阳性，p53表达量较低，但表达正常水平的pRB（视网膜母细胞瘤抑制因子）。HeLa细胞含有人乳头状瘤病毒HPV18序列，需在2级生物安全防护台操作。HeLa细胞可以用于3D细胞培养和生物制品生产，也是一种合适的转染宿主，还可用于筛选具有侵袭潜力的大肠杆菌菌株。

不同于其他一般的人类细胞，此细胞株不会衰老致死，并可以无限分裂下去。此HeLa细胞系跟其他癌细胞系相比，增殖异常迅速。HeLa细胞是一种人工培养、具有无限增殖能力的细胞。

Hela 人宫颈癌细胞产品信息

细胞名称：HELA，人宫颈癌细胞

别称：HELA; Hela; He La; He-La; Henrietta Lacks cells; Helacyton gartleri

种属来源：女人，31岁

组织来源：子宫

细胞形态：上皮细胞样，贴壁生长

倍增时间：~32-48 hours

培养基：90%MEM+10% FBS+1%PS

生长条件：气相：95%空气+5%二氧化碳;温度：37℃

保藏机构：ATCC；CCL-2 BCRC； 60005 BCRJ；0100 DSMZ； ACC-57 ECACC；08011102 ECACC；93021013

冻存条件：无血清冻存液，液氮储存

基因表达情况：Lysophosphatidylcholine (lyso-PC) induces AP-1 activity and c-jun N-terminal kinase activity (JNK1) by a protein kinase C-independent pathway. The cells are positive for keratin by immunoperoxidase staining.

hela细胞形态特征

Hela人宫颈癌细胞培养操作说明

细胞培养的基本条件

实验室条件

1. 无菌环境：无菌室包括更衣室，缓冲间，风淋间，操作间

2. 仪器设备：超净工作台-操作平台、CO2 培养箱-细胞生长的环境、倒置显微镜-观察细胞、离心机-离心收集细胞、冰箱-放置培养基等试剂、水浴锅-复苏细胞、真空泵-收集废液、灭菌锅-灭菌、干燥箱-烘干器材、液氮罐-冻存细胞、纯水仪-制备一级水

器材耗材：玻璃瓶、培养瓶、培养皿、巴士管、离心管、移液枪、枪头(白色 0-10ul；黄色 20-200ul；蓝色 100-1000ul)、滤器，吸管，多孔培养皿、6cm 皿、10cm 皿，培养瓶等。

4. 试剂：MEM基础培养基、FBS胎牛血清、双抗、胰酶（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）、pbs

操作者工作范畴

1. 无菌操作：洗手，戴手套，穿实验服，常喷 75%酒精

人宫颈癌细胞Hela复苏步骤

1.准备：紫外线照台 30min，提前打开水浴锅设置 37℃，培养基临用前放水浴箱里温育20 分钟（或者放在超净工作台常温放 30min）。在操作台上摆放好物品，左边放完全培养液，1mL 枪头（已灭菌），培养皿，右上角放废液缸，1mL 移液枪，3mL 巴氏管。检查离心机，废液泵。

2)待水浴锅温度达到 37℃时，戴上手套和护目镜，从-196℃液氮罐中取出冻存管，将含有1 mLHela人宫颈癌细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，同时不断轻轻摇动冻存管，尽量保证冻存管内细胞 1min 内融化，加4 mL培养基混合均匀， 移入离心机中 100rpm 离心 3min，以 75%酒精喷冻存管外部，移入无菌操作台内。

3)用 3mL 巴氏管取 5mL 新鲜培养基到一个新的 6cm 培养皿中，（若离心后细胞量较多，可取 12mL 新鲜培养基到一个新的 10cm 培养皿中），标记日期、所用培养基名称和细胞名称。

4)用废液泵（吸力不要太大）取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液加入到培养皿中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀Hela人宫颈癌细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

5)确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱过夜。（尽量平直放入不要晃动），第二天换液并检查细胞密度。

Hela人宫颈癌细胞复苏小贴士

1. 进细胞间前检查 CO2%压力；

2. 离心时间为 3min，速度为 1000 转，不要离心太久，避免对细胞伤害较大；

3. 重悬细胞时不要吹打过猛过久，避免对细胞的伤害较大；

4.使用过程中，巴氏管，枪头都不要重复使用，且取液时不要碰壁；

5.离心后应尽快去掉上清冻存液，防止其在常温下对细胞产生较大毒性。

Hela人宫颈癌细胞传代操作

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出Hela人宫颈癌细胞，在显微镜下观察细胞密度和细胞状态，当细胞状态良好，且密度达到 85%左右的时候即可进行传代；

4)打开废液泵，用废液泵吸头（吸力不要太大）取一个蓝色枪头吸走上清废液，用巴士管取 4ml 不含钙、镁离子的1xPBS（6cm 皿）到细胞培养皿中（若是 10cm 皿则取 8ml 1xPBS），轻轻晃动以清洗细胞表面1-2次；

5)用废液泵吸走 PBS 废液，加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.02% EDTA）于培养瓶中，拿起培养皿轻轻转动以便胰酶浸泡到每个细胞，消化 1-3min（根据细胞贴壁情况判断，贴壁较牢的消化时间长一点或者放入 CO2 培养箱中消化几分钟）后，在显微镜下观察细胞是否变圆变亮，一旦发现大量细胞胞质回缩，细胞间隙增大，即将脱离培养皿底，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

6)用 1ml 移液枪轻柔吹打，保证培养皿底的每个角落都吹打到，边缘处也不能忽略(吹打时尽量避免产生气泡，因其对Hela人宫颈癌细胞有伤害;需轻柔吹打，用力吹打对细胞也有伤害)，把培养瓶中所有细胞悬液用吸 1ml 移液枪移入无菌离心管中。

7)将装有Hela人宫颈癌细胞悬液的离心管放入离心机中（配平），1000 转离心 3-5min，用废液泵取一个黄色枪头从冻存管中吸走上清，取 1-2mL 新鲜培养基重悬细胞后（充分混匀），将细胞悬液按1:2比例分到新的含8 mL培养基的新皿中或者瓶中，将培养皿在超净工作台上以画“8”字法铺匀细胞（一般培养皿在台子上画 30 个 8 字即可铺匀），最后在显微镜下检测是否铺匀细胞。

8) 确定细胞已铺匀后，再把培养皿放入 CO2 培养箱培养。（尽量平直放入不要晃动）。第二天再观察细胞密度。

Hela人宫颈癌细胞传代小贴士

1)一定要防止细胞过消化，因过消化，使细胞成团，不均匀，且对细胞伤害很大，影响细胞贴壁和导致生长状态差等。

2)若在加入未经 37℃温育的胰酶（指仅为室温）消化细胞时，即使细胞已经变圆，且透亮，用完全培养基终止消化后仍很难吹打下来。那是因为胰酶的温度不适宜，可把残留有胰酶作用的培养皿放到 CO2 培养箱中，放置 2-3min，让胰酶在其最佳温度（37℃）下消化细胞。

3)用力吹打和气泡产生对细胞都有伤害，故应轻柔吹打并尽量减少气泡产生，吹打结束使细胞尽量分离成单个细胞。

4)一般 6cm 加完全培养基 5ml，10cm 培养皿加培养基 12-15ml，T25 瓶加培养基 8ml。

Hela人宫颈癌细胞冻存准备

1) 准备工作：紫外线照台 30min，准备好细胞培养所需试剂物品：培养液，胰酶，PBS（试剂提前拿出 37℃预热或者常温放置半小时以上）；传代用培养皿，巴士管，离心管（已灭菌），枪头（已灭菌），移液枪，废液缸。检查离心机，废液泵；

2)从培养箱拿出Hela人宫颈癌细胞，在显微镜下观察Hela细胞密度和细胞状态，待细胞生长状态良好且存活率高的状态下，细胞密度达 80–90%时，可进行细胞冻存操作，以T25 瓶为例

Hela人宫颈癌细胞冻存步骤

a.收集细胞及细胞培养液，将培养瓶内所有培养基转入无菌离心管，装入无菌离心管中，1000 rpm条件下离心4 min，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。

b.根据细胞数量加入无血清细胞冻存液，使细胞密度5×106~1×107/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液， 在细胞冻存管上贴上细胞标签（细胞标签上包含：细胞名称、冻存日期、培养用的 培养基）。

c.将冻存管入库到-80 度冻存盒里，放置 24 小时后，即可移入液氮中保存，标记好入库位置和冻存日期。

Hela人宫颈癌细胞冻存小贴士

若是不确定细胞的冷冻条件或者细胞比较特殊，在做冷冻保存的同时，也可以用10%DMSO+90%FBS冻存几管，或者冻存后隔天在复苏一管测试，以防止冷冻失败。

HeLa人宫颈癌细胞特点

1.细胞颗粒感较重

Hela细胞传代培养时细胞内黑点及细胞外颗粒较多，建议使用优质血清及培养基培养细胞；

2.传代、复苏注意细胞状态

Hela细胞消化或者复苏操作不当容易导致细胞死亡裂解产生大量碎片及颗粒，进而影响活细胞状态，注意消化或复苏过程尽量轻柔，严格控制消化时间和复苏操作规范，传代或复苏24h后建议观察细胞，建议换液一次去除死亡细胞；

3.Hela细胞生长较快

Hela细胞增殖能力强，生长速度快，通常能够以48小时的速度倍增，注意及时换液及传代，平时培养可以略微多加点培养基；

4.Hela细胞极易出现交叉污染

Hela细胞作为最早建立的人源细胞系，目前已经有200余种衍生细胞，该细胞污染并取代了诸多细胞系，在培养过程中应注意操作，避免交叉污染其他细胞。

5.培养条件过酸或过碱，则可呈现为梭形而似成纤维细胞样。

Hela人宫颈癌细胞培养常见问题

1 .hela细胞传代的时候，细胞密度怎么计算?

严格意义上，hela细胞密度需要收集细胞悬液计数细胞数量，但在实际培养过程中，并不需要为了精确控制细胞数量而消化细胞计数。因此，常用的细胞密度指细胞相对于最大生长密度的比值，贴壁细胞可以粗略的用细胞所占培养容器底面积百分比表示，即显微镜下观察培养容器底部，有细胞的区域占总区域的百分比值，当然这种表达方式受限于单个细胞生长不同密度时所占面积不同导致并不严谨，但也是相当直观、简便的表现细胞状态的一种方式；

2 培养过程中hela细胞碎片较多怎么处理？

hela细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡及细胞器折光，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，大部分细胞都会有这种现象，只是不同细胞颗粒多少有区别，细胞培养体系不适应、营养缺乏、渗透压异常等均可能导致细胞内颗粒增加，建议使用合适的培养条件。

细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片和细胞代谢产物，可以先吸走培养基后用PBS润洗清除，再加新的培养基继续培养。润洗不能清除的可以换液清洗后等细胞密度70-80%左右消化处理细胞，消化完成后加完全培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm（约150g）离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用完全培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤;如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

3.hela细胞消化时间多久？

hela细胞系消化1-2分钟即可。需要注意的是，该细胞贴壁能力较弱。需要注意的是每个客户用的胰酶活力及消化步骤、试剂都是不一样的，不能完全规定消化时间，以实际消化效果和客户经验为准。

4.hela细胞一分儿多久长满？

hela细胞系跟其它癌细胞相比，增殖异常迅速，一分二的话，1-2天就可以再传代。

人宫颈癌Hela细胞应用

通过HELA细胞的研究，我们能更好地理解癌症的发生机制，开发更有效的医学研究手段，并为人类健康做出贡献。

Hela细胞通常呈椭圆形或梭形，大小约为20~30μm，属于恶性肿瘤细胞系，具有无穷分裂和浸润性生长的特点，广泛应用于生物医学研究中。最初在1951年取自于Henrietta Lacks的鳞状细胞癌宫颈组织中，因此而命名。

Hela细胞的增殖能力强且生长速度快，倍增时间通常为48h，可以持续生长和分裂，是十分理想的细胞实验模型。

Hela细胞常用于癌症学科相关研究中，用于探究癌症的发生发展机制等。同时因其对不同的肿瘤治疗方法可以产生多样性反应，因此Hela细胞也常作为肿瘤治疗药物筛选和治疗效果评价的工具。在疫苗研制中，Hela细胞也常用于疫苗效果和安全性评价的模型。同时在基因编辑、细胞免疫学和病毒学研究中，也是常用的研究工具之一。

在医学界，海拉细胞被广泛应用于肿瘤研究、生物实验或者细胞培养，已经成为医学研究中非常重要的工具。这种细胞是现有来自人体的组织培养中最早的分离细胞，在世界各地的研究室继续培养，广泛应用于各种研究。它们在体外容易增殖形成上皮性的细胞排列。染色体数频率分布式为78-80，移植于人体皮下则形成肿瘤，在豚鼠的眼前房，大鼠的颊囊以及经X射线皮质酮处理的小鼠可作异种移植，由此可以认为仍保持着癌的性状。广泛被用作分析细胞营养要求、细胞增殖和各种细胞化学的研究材料。易从细胞群落作无性繁殖系分离，有各种变异系的报道。对脊髓灰质炎病毒、腺病毒等的病毒有敏感性，并显示有明显的细胞变性，在病毒研究方面的利用价值颇大。

HeLa可以用于二甲双胍通过影响肌动蛋白骨架重组抑制人宫颈癌HeLa细胞迁移、侵袭和增殖的研究。

总结起来，HELA细胞是一种肿瘤细胞系，具有快速增殖能力、无穷分裂能力和多样化的反应性。HELA细胞的培养相对简单，但需要注意无菌操作和细胞状态的监控。HELA细胞在癌症研究和药物筛选中有着广泛的应用，为科学家们的研究提供了一个重要的细胞模型。

hela细胞转染siRNA条件

RFECT，SIRNA做过hela细胞的转染,用的24孔培养板，将siRNA 稀释液与试剂稀释液混合，细胞铺板密度在45%左右。 设置siRNA浓度10nM，30nM，50nM，100nM四个梯度，每个梯度最好做2个复孔，转染前一天铺板，稀释siRNA和转染试剂的培养基必须是无血清培养基，血清的存在会干扰siRNA与转染试剂的混合，影响转染效率。