小鼠破骨细胞原代分离传代及鉴定方法视频教程

小鼠破骨细胞简介

小鼠破骨细胞分离自骨组织和骨髓;破骨细胞是骨组织中的多核巨细胞，位于骨组织表面的浅凹处。目前一般认为破骨细胞是分离自骨骼外的造血系统，其前体可能属于造血干细胞的前单核细胞。破骨细胞的主要功能是维持骨吸收和骨形成的相对平衡，若失去这种平衡则发生病理性变化。因此多数学者从破骨细胞着手研究破骨细胞的结构、功能探讨骨吸收，形成相互平衡的机制。但破骨细胞是一种终末分化细胞，属于不增殖细胞群，不能增殖和传代，只能进行原代培养且存活时间较短。

小鼠破骨细胞原代分离培养所需试剂

小鼠破骨细胞基础培养基、小鼠破骨细胞完全培养基、PBS磷酸缓冲液、红细胞裂解液、破骨细胞培养添加物A、破骨细胞培养添加物B(试剂介绍完之后补充一句“以下简称添加物A,添加物B”)

小鼠破骨细胞原代分离传代及鉴定方法

小鼠骨髓单核细胞诱导法

(1)6-8周龄小鼠颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡灭菌10 min；

(2)取双侧股骨、胫骨，用无菌注射器吸取无菌磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗骨髓腔3次，收集液体于15 mL离心管中， 1200 r/min离心3min；

(3)弃上清液，加入5 m红细胞裂解液，4℃裂解15 min；

(4)300g离心10min，弃上清液，用小鼠破骨细胞基础培养基重悬；

(5)1200 r/min离心3 min，弃上清液，用5 ml小鼠破骨细胞完全培养基重悬，接种于25 cm2培养瓶中，置入5% CO2、37℃ 细胞培养箱过夜(约24 小时)；

(6)收集上清离心，弃上清液，用5 mL含有添加物A的小鼠破骨细胞完全培养基重悬后，接种于25 cm2培养瓶中(5x10^5 cells/cm2)，2天后细胞贴壁。

(7)弃上清液，用无菌PBS清洗2次。胰酶消化、反复吹打后收集液体，离心，弃上清液。重悬后，根据实验需要，细胞计数后选择合适细胞密度接种于不同细胞培养皿中(5x10^5 cells/cm2)；

(8)加入含培养添加物A添加物B的完全培养基，每两天换液，4-6天后即可诱导出成熟的破骨细胞。

小鼠破骨细胞鉴定

1. 形态观察

小鼠破骨细胞是一种贴壁细胞，细胞形态呈多核巨细胞，细胞属于终末分化细胞;属于不增殖细胞群

2. 标志物检测

第七天进行TRAP染色，2.5%戊二醛固定细胞10 min，蒸馏水充分冲洗，用TRAP染液处理50 min，蒸馏水充分冲洗后甘油封片。阳性染色细胞呈红色，定位于胞浆, 阴性染色细胞呈黄色