小鼠脑微血管内皮细胞分离培养方法教程

小鼠脑微血管内皮细胞背景简介

小鼠脑微血管内皮细胞分离自脑组织;脑微血管内皮细胞是血脑屏障的主要组成成分，它是组成脑微血管腔面单层扁平上皮样细胞，能够限制可溶性物质和细胞等从血液进入大脑，大脑微血管内皮细胞与外周内皮细胞相比具有一些相同特性。它所产生和分泌的生物活性物质对维持血管张力、调节血压、抗血栓形成等有重要作用，在脑血管疾病的发病机制中有重要病理生理学意义。与外周内皮细胞相同，大脑微血管内皮细胞表面表达细胞粘附分子，调控白细胞进入大脑。由于微血管内皮细胞的器官特异性，内皮细胞通常取源于疾病研究的相关组织。

其主要特征如下

1.脑微血管内皮细胞存在许多细胞间紧密连接，产生很高的跨内皮阻抗，延迟细胞旁的通量

2.脑微血管内皮细胞缺乏内皮细胞的窗孔结构，其液相物质胞饮水平较低

3.脑微血管内皮细胞具有不对称定位酶和载体介导转运系统，从而产生“两极分化”的表现型。

小鼠脑微血管内皮细胞分离培养方法视频教程

主要试剂

小鼠脑微血管内皮细胞专用消化酶I、小鼠脑微血管内皮细胞专用消化酶II、HBSS、血清、小鼠脑微血管内皮细胞专用培养基I、小鼠脑微血管内皮细胞专用培养基II、明胶、清洗液、分选buffer

小鼠脑微血管内皮细胞操作步骤

脑组织获取及消化

1. 用1%明胶提前被包好T25培养瓶。

2. 在无菌条件下斩首小鼠并解剖大脑

3. 用刮刀和镊子将嗅球和小脑分开。

4. 将去掉脑膜的脑组织放入加入预冷的HBSS溶液中，用镊子夹碎组织。

5. 静置，小心地取出溶液，并加入1ml HBSS以洗涤组织。

6. 将组织悬液转移到15ml锥形管中。静置直到组织沉淀，然后除去上清液。

7. 加入1ml 专用消化酶I，37℃消化20min，每5min翻转震荡

8. 加入1mL 血清终止消化，枪头缓慢吹吸，室温离心 800xg，5min，弃上清

9. 加入2mL 25%BSA，重悬沉淀，室温离心1500xg，15min，弃上清

10. 加入1ml 专用消化酶II，37℃消化30min

11. 加入1mL 血清终止消化，吹吸多次 ，室温离心 800xg，15min，弃上清

12. 加入5ml小鼠脑微血管内皮细胞专用培养基I重悬，铺入明胶包被的培养皿，每两三天换液

13. 培养5-7天进行传代，去除星胶和周细胞，专用消化酶I，37℃消化6min

14. 加入1mL 血清终止消化，离心 400xg，5min，弃上清

15. 加入5ml专用培养基II重悬，铺入1%明胶包被T25。纯化脑微血管内皮细胞。