小鼠腹主动脉平滑肌细胞分离培养视频教程

小鼠腹主动脉平滑肌细胞背景简介

血管平滑肌细胞(VSMC)的异常增殖是许多心血管疾病的共同病理基础，在高血压、动脉粥样硬化和血管成形术后再狭窄等许多血管性疾病中，都涉及到血管平滑肌细胞的异常增殖。血管由3个部分组成，自内向外依次是内膜层、中膜层和外膜层，内膜层主要由血管内皮层细胞和少量平滑肌细胞组成，外膜层由成纤维细胞组成，中膜层由血管平滑肌细胞组成，平滑肌细胞主要收缩调节机体的血流和血压，其功能障碍在心血管疾病中起着非常重要的作用。因此，对血管平滑肌的生物学特性进行深入研究，才能探明上述血管疾病的发病机制。在VSMC的研究中，组织块贴壁法和胶原酶消化法是目前采用的非常广泛的技术。

小鼠腹主动脉平滑肌细胞分离培养视频教程

小鼠腹主动脉平滑肌细胞分离培养主要试剂

解剖镜，平滑肌专用培养基，平滑肌组织专用消化酶，尖头镊，PBS缓冲液，双抗，离心管

小鼠腹主动脉平滑肌细胞分离培养操作过程

1.取腹主动脉：将大鼠/小鼠麻醉后将其颈椎脱臼处死，固定、消毒、暴露胸，腹、主动脉，沿脊柱剪取腹、主动脉到主动脉弓的一段血管， 剪开腹部胸部皮肤，剪去大鼠左侧的肋骨可见大鼠的肺，如图所示，把肺翻起，即可见到主动脉，放入预冷的培养基

2.分离血管中膜：先用一把显微镊子和一把直镊，直镊固定血管，显微镊夹去血管外的血凝块和脂肪组织。

2.1用显微剪把血管剪开，用两把眼科弯镊，轻轻的刮一下血管内膜，把内皮细胞除去。

2.2刮取血管中膜。血管中膜要使用压和推，把中膜弄下来，千万不要用镊子去撕，撕起来既容易牵拉中膜，组织不完整。用弯镊子压住血管，另一弯镊子也压住血管，然后往下推，中膜由于受力就会出现破口，并与外膜分离开来。膜与外膜的形态区别很容易辨认，中膜刮下来之后还是挺拔的保持着血管的形态，而外膜就是软软的一滩。

3.消化：剪碎组织，加入消化酶，置于37℃ 5%培养箱12-18h, 组织消化至不可见，停止消化，

4.过筛：用70uM细胞筛过滤，离心，去上清，使用平滑肌专用培养基重悬。

5.纯化(去除成纤维细胞)：置入细胞培养箱培养1h后，取上清离心，重悬重铺新同样大小培养皿，3天换液至长满。

小鼠腹主动脉平滑肌细胞鉴定

1. 形态学观察

细胞主要为长梭状、带状或三角状，部分细胞有突起胞核位于细胞中央，完全贴壁，胞质完全伸展，第 4~7 d 细胞增殖速度加快，生长 7 d 后细胞汇合度可达 80 %以上，细胞致密呈多层典型 " 峰 - 谷 " 结构出现。

2. 标志物检测

经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度达90%以上。