第二节:小鼠小肠类器官传代教程

第一节 传代条件（以24孔板培养为例）

1. 当孔中小肠类器官群体增殖(占胶85%左右)，且平均直径为100-150 μm时，小肠类器官细胞状态良好时，即可立即传代，否则小肠类器官的生长和增殖速度会减慢，活力逐渐降低。

第二节 传代间隔和比例

1. 可根据细胞生长状态和实验需求按1:3-1:5的比列进行传代；

2. 如果细胞正常，群体增殖度85%，大小为100-150 μm，建议按照1:5进行传代；

3. 如果密度偏低，则可降低传代比例，密度偏高，则增加传代比例。

第三节 准备工作

1. 解冻分装Matrigel，预冷5 mL Immocell Reactive detergent medium ，200uL枪头；

2. 提前30 min将Immocell MLDT organoid 完全培养基，Immocell Y-27632(10 mM) 放置生物安全柜中，恢复至室温；

3.吸取4 mL Immocell MLDT organoid 完全培养基，按照1:1000比例加入4 μl的Immocell Y-27632(10 mM)，充分混匀，恢复至室温。