第四节:人脐带间充质干细胞的制备

实验前准备

提前开启紫外线照射超净台30min。

将培养基和添加剂室温融化，使用前室温中预温10-30min。

紫外照射完毕后，75%酒精消毒超净台，超净台通风10min以上。

完全培养基的配制

添加剂按1:100比例加入基础培养基中，轻柔摇匀培养基后备用。

脐带MSC制备

(1)采集健康足月新生儿脐带。

(2)75%酒精消毒脐带储运瓶，在超净台中取出脐带，酒精浸泡1min，用生理盐水清洗(将淤血清洗干净)，将脐带剪短至2-3cm。

(3)小心地将静脉血管和动脉血管剖离，撕取华通胶。

(4)华通胶置于加少量生理盐水的50ml离心管中(华通胶不少于8ml)，剪碎至1立方厘米大小。

(5)300g，8min离心，取上清做菌检。

(6)生理盐水清洗2-3遍，300g，8min离心。

(7)用10ml移液管将华通胶块平分到150cm2的培养皿中(根据华通氏胶的量确定培养皿的个数)，加入15ml的完全培养基。

(8)在培养瓶上标记相关信息，包括样本编码、操作项目、操作时间、操作人等。

(9)小心将培养瓶放入37℃、5%CO2培养箱中，培养最初5-7天，保持培养瓶绝对静止。

(10)根据细胞生长情况，每隔3天进行一次半量换液或全量换液。

(11)D13-D14收获细胞。

(12)不同培养器皿的组织块植入量及培养基添加量见下表：