RXR 激动剂 S169：靶向 NTCP 转运，为 HBV/HDV 治疗提供新希望

乙肝病毒(HBV)感染是全球主要公共卫生问题之一，有超过2.5亿人慢性感染HBV。而其中有超三分之一的人口集中在我国，人数接近1亿人。NTCP工具细胞，特别是外源表达NTCP的肝癌细胞系如HepG2-NTCP和Huh7-NTCP，因其易操作、短周期、重现性佳的特点，在乙肝病毒(HBV)研究中扮演着至关重要的角色。这些细胞模型能够有效模拟HBV的感染过程，为研究HBV的生命周期、宿主限制因子、病毒复制以及药物筛选提供了一个强大而便捷的体外平台。它们不仅有助于揭示HBV感染的分子机制，如DDX3作为宿主限制因子阻碍cccDNA转录，GPC5作为附着因子在感染入胞过程中的作用，还能通过直接与NTCP相互作用或下调NTCP表达来筛选和验证抗病毒药物的活性，例如环孢菌素A及其衍生物、雷帕霉素及其衍生物等。此外，这些工具细胞还促进了对HBV宿主特异性分子的发现，为发展支持HBV感染的小动物模型提供了可能，这对于乙肝相关研究和药物开发具有重大意义。

基本信息

英文标题：RXR agonist S169 inhibits HBV/HDV entry in vitro by disrupting KIF4-dependent NTCP trafficking

中文标题：RXR 激动剂 S169 通过破坏 KIF4 依赖的 NTCP 转运在体外抑制 HBV/HDV 进入

发表期刊：《Antiviral Research》

影响因子：4.0

作者单位：

1. Department of Virology II, National Institute of Infectious Diseases; Japan Institute for Health Security; 1-23-1 Toyama; Shinjuku-ku: Tokyo 162-8640; Japan

2. Department of Microbiology and Immunology; Faculty of Pharmacy; Minia University; Minia 61519; Egypt

3. Department of Pathology; Immunology and Microbiology; Graduate School of Medicine; The University of Tokyo; Tokyo 113-0033; Japan

作者信息：

Sameh A. Gad, Saied A. Hussein, Kento Fukano, Takanobu Kato, Ikuo Shoji, Kazuaki Chayama, Masamichi Muramatsu, Masanori Isogawa, Takaji Wakita, Daniel Merk, Hussein H. Aly

研究背景

慢性乙型肝炎(HBV)和丁型肝炎(HDV)病毒感染构成严重的全球健康挑战，现有疗法难以实现治愈，亟需开发新的抗病毒策略。NTCP 作为 HBV/HDV 的入侵受体，其表面转运由驱动蛋白 KIF4 调控。此前发现的泛 RXR 激动剂 Bexarotene 可通过抑制 KIF4 表达阻断病毒入侵，但因理化性质差、药代动力学(PK)参数不佳及显著副作用限制临床应用。本研究筛选化学结构多样的 RXR 调节剂，鉴定出新型 RXR 激动剂 S169 作为 HBV/HDV 入侵抑制剂，探究其作用及机制，为开发更优疗法奠定基础。

研究方法

使用原代人肝细胞(PHH/PXB)、HepG2-hNTCP 细胞及 HBV 稳定复制株 HepAD38.7-Tet 细胞，进行 HBV(基因型 D)和 HDV 感染实验：

PHH 细胞经化合物预处理后接种病毒，通过 ELISA 检测 HBsAg、HBeAg，免疫荧光检测 HBcAg，qPCR/RT-qPCR 检测 cccDNA、pgRNA 及病毒 DNA，Southern blot 分析 intracellularHBV DNA;

采用 preS1-TAMRA 荧光肽结合实验评估 NTCP 与病毒的相互作用;

通过表面生物素化和免疫印迹分析 NTCP 表面水平及 KIF4、FOXM1 表达;

利用 HepAD38.7-Tet 细胞验证对病毒复制的影响，长期培养 PHH 细胞观察 HBV 扩散;

采用 MTT 法检测细胞活力，数据经 Student’s t 检验分析显著性

实验结果

图1：新型 Oxaprozin 衍生 RXR 激动剂的抗 HBV 活性筛选

PHH 细胞经 5μM 候选化合物(S169、JP147 等)预处理 72 小时后感染 HBV，结果显示 S169 对胞内 HBcAg 和分泌型 HBsAg 的抑制效果最显著(与 Bexarotene 相当，P<0.001)，且无细胞毒性。

证实 S169 是高效且安全的抗 HBV 候选分子。

图2：S169 对 PHH 细胞中 HBV 感染的剂量依赖性抑制

不同浓度 S169 处理后，HBsAg、HBeAg 及 pgRNA 水平呈剂量依赖性降低，IC₅₀分别为 2.74±0.8μM、2.05±0.4μM 和 0.99±0.3μM;

显著减少 cccDNA 和总 HBV DNA，且 CC₅₀>100μM。

表明 S169 在低毒范围内高效抑制 HBV 感染。

图3：S169 作用于 HBV 感染早期阶段

预处理或全程处理 S169 对 HBeAg 的抑制效果最显著，感染后处理效果较弱;

对 HepAD38.7-Tet 细胞中 HBV DNA 复制及 cccDNA 合成无影响。

证实 S169 主要靶向感染早期(进入阶段)而非复制阶段。

图4：S169 抑制 HBV 和 HDV 的细胞进入

S169 显著降低 HepG2-hNTCP 和 PHH 细胞表面的 preS1-TAMRA 结合信号，且抑制 PHH 细胞中 HDV RNA 水平(P<0.001)。

表明 S169 通过阻断 NTCP 与病毒的相互作用，抑制 HBV/HDV 进入。

图5：S169 抑制 KIF4 介导的 NTCP 表面转运

S169 下调 PHH 细胞中 FOXM1 和 KIF4 表达，减少 HepG2-hNTCP 细胞表面 NTCP 水平(不影响总表达);

对钠依赖胆汁酸摄取的抑制呈平台效应(10μM 时约 50%，更高浓度无增强)。

揭示其机制为抑制 FOXM1-KIF4 通路，减少 NTCP 表面定位。

图6：S169 抑制长期培养 PHH 细胞中 HBV 的扩散

从 6dpi 开始处理 S169，持续 42 天内培养液中 HBV DNA 水平显著低于对照组，且 HBcAg 阳性细胞减少。

证实 S169 可阻断 HBV 在细胞间的扩散。

研究结论

RXR 激动剂 S169 通过下调 FOXM1 介导的 KIF4 表达，减少 NTCP 表面转运，在体外高效抑制 HBV 和 HDV 的细胞进入，且呈剂量依赖性;其能抑制 HBV 扩散，对胆汁酸转运影响较低(平台效应)，显示出良好治疗窗口。与 Bexarotene 相比，S169 具有更优的口服生物利用度、PK 参数及安全性，是开发口服抗 HBV/HDV 药物的潜在候选分子。