哮喘治疗新突破！新型纳米疫苗'精准狙击'过敏原，小鼠实验显示炎症骤降70%

同源异体小鼠肿瘤模型是免疫肿瘤学(I/O)研究中不可或缺的临床前模型，但它们对免疫检查点抑制剂(ICIs)的反应有限，这可能是由于它们的固有低免疫原性。为了解决这一问题，研究人员通过将鸡卵清蛋白(OVA)这一高度免疫原性的蛋白质表达到同源异体肿瘤细胞中，开发了新的免疫原性同源异体模型。这些模型，如DC2.4-OVA和B16-OVA，显示出比它们的亲本细胞系更慢的肿瘤生长速度，这可能是由于免疫介导的排斥反应。更重要的是，这些OVA表达的模型对ICIs，特别是抗PD-1治疗，表现出更高的敏感性，这表明它们在增强T细胞介导的免疫反应方面具有潜力。此外，通过过继T细胞转移实验，研究人员验证了这些模型中存在肿瘤特异性记忆T细胞。这些结果表明，OVA工具细胞不仅增强了对ICIs的反应，而且为临床前免疫治疗评估提供了新的、具有更高免疫原性的同源异体模型，这对于I/O研究具有重要的意义。

基本信息

英文标题：A20-OVA Nanoparticles Inhibit Allergic Asthma in a Murine Model

中文标题：A20-OVA纳米颗粒通过调控Treg细胞抑制小鼠过敏性哮喘

发表期刊：《Inflammation》

影响因子：4.1

作者单位：

1.Department of Pediatric Otolaryngology, Shenzhen Hospital, Southern Medical University, 1033 Qinghu Blvd, Shenzhen, 518101, China

2.The Research Center of Allergy & Immunology, School of Medicine, Shenzhen University, Shenzhen, China

3.Department of Pediatric Otolaryngology, Shenzhen Hospital, Southern Medical University, 1033 Qinghu Blvd, Shenzhen, 518101, China

作者信息：Xiang-Qian Luo, Jian-Wen Zhong, Shu-Yao Qiu

研究背景

过敏性哮喘是一种以Th2免疫反应失衡为特征的慢性气道炎症疾病，其核心机制包括Th2细胞过度活化、炎症因子(如IL-4、IL-5、IL-13)分泌增加及调节性T细胞(Treg)功能缺陷。传统过敏原特异性免疫疗法(SIT)虽能诱导Treg细胞生成，但疗程长且存在过敏反应风险。A20(TNFAIP3)是一种泛素E3连接酶，可调控免疫稳态并抑制炎症反应;PLGA纳米颗粒作为药物载体具有缓释和靶向优势。本研究旨在开发一种PLGA包裹A20与模型抗原OVA的纳米疫苗(PLGA-OVA+A20)，通过增强Treg细胞生成和抑制Th2炎症反应，探索其治疗过敏性哮喘的潜力。

研究方法

研究通过分子克隆技术制备重组A20蛋白，并将其与OVA共同封装于PLGA纳米颗粒中，形成PLGA-OVA+A20纳米疫苗。采用OVA致敏的BALB/c小鼠建立过敏性哮喘模型，通过鼻腔给药分别给予OVA+A20混合物、纳米疫苗及对照处理。通过检测气道阻力、支气管肺泡灌洗液(BALF)炎症细胞计数、血清特异性IgE水平及Th2细胞因子(IL-4、IL-5、IL-13)浓度评估治疗效果。流式细胞术分析气道组织中Treg细胞比例及功能，并通过组织病理学观察肺部炎症变化。

实验结果

图1：A20蛋白的克隆、表达与功能验证通过双酶切验证

重组A20基因(图1a)，利用原核表达系统成功表达可溶性A20蛋白(图1b)，并通过亲和层析纯化获得高纯度A20及突变体mA20(图1c)。ELISA实验显示重组A20具有生物活性，而mA20活性显著降低(图1d)，证实A20功能依赖其完整结构。

图2：OVA+A20对哮喘症状的改善作用

OVA致敏小鼠经OVA+A20治疗后，气道阻力显著降低(图2a)，BALF中炎症细胞(图2b)及Th2细胞因子(图2c)减少，血清特异性IgE水平下降(图2d)，肺部组织炎症浸润减轻(图2e)。结果表明OVA+A20通过抑制Th2反应缓解哮喘症状。

图3：PLGA-OVA+A20纳米颗粒的理化特性

扫描电镜显示纳米颗粒呈球形，粒径为100-250 nm(图3a-b)。体外释放实验表明，纳米疫苗在96小时内持续释放包载的OVA+A20(图3c)，符合缓释递药系统的设计要求。

图4：纳米疫苗增强哮喘治疗效果

与OVA+A20组相比，PLGA-OVA+A20纳米疫苗组小鼠血清特异性IgE(图4a)、BALF炎症细胞(图4b)及气道阻力(图4c)进一步降低，肺部病理损伤显著改善(图4d)，证明纳米载体可提升疗效。

图5：纳米疫苗促进Treg细胞生成及功能

流式分析显示纳米疫苗组小鼠气道组织中CD4+Foxp3+ Treg细胞(图5a-c)及IL-10+ Treg细胞(图5d-e)比例显著增加。CFSE增殖实验证实Treg细胞可有效抑制效应T细胞活化(图5f-g)，表明纳米疫苗通过增强免疫调节功能发挥治疗作用。

研究结论

PLGA-OVA+A20纳米疫苗显著抑制了OVA致敏小鼠的哮喘症状，包括降低气道高反应性、减少BALF炎症细胞浸润及Th2细胞因子分泌。其机制与促进气道局部IL-10+ Treg细胞生成密切相关，且疗效优于单纯OVA+A20混合物。纳米疫苗通过PLGA缓释特性延长抗原递呈时间，增强免疫调节作用，为过敏性哮喘的免疫治疗提供了新策略。