达沙替尼通过免疫调节抑制多种小鼠实体瘤生长:CD8+ T细胞浸润与调节性T细胞减少的机制研究

同源异体小鼠肿瘤模型是免疫肿瘤学(I/O)研究中不可或缺的临床前模型，但它们对免疫检查点抑制剂(ICIs)的反应有限，这可能是由于它们的固有低免疫原性。为了解决这一问题，研究人员通过将鸡卵清蛋白(OVA)这一高度免疫原性的蛋白质表达到同源异体肿瘤细胞中，开发了新的免疫原性同源异体模型。这些模型，如DC2.4-OVA和B16-OVA，显示出比它们的亲本细胞系更慢的肿瘤生长速度，这可能是由于免疫介导的排斥反应。更重要的是，这些OVA表达的模型对ICIs，特别是抗PD-1治疗，表现出更高的敏感性，这表明它们在增强T细胞介导的免疫反应方面具有潜力。此外，通过过继T细胞转移实验，研究人员验证了这些模型中存在肿瘤特异性记忆T细胞。这些结果表明，OVA工具细胞不仅增强了对ICIs的反应，而且为临床前免疫治疗评估提供了新的、具有更高免疫原性的同源异体模型，这对于I/O研究具有重要的意义。

基本信息

英文标题：Dasatinib changes immune cell profiles concomitant with reduced tumor growth in several murine solid tumor models

中文标题：哮喘相关炎症通过CCL11-CCR3通路促进乳腺癌细胞肺转移

发表期刊：《Cancer Immunol Res》

影响因子：8.1

作者单位：

1.Hematology Research Unit Helsinki, Helsinki University Hospital Comprehensive Cancer Center, University of Helsinki, Finland

2.Research and Development, Bristol-Myers Squibb, Princeton, New Jersey, USA

3.Cancer Gene Therapy Group, Transplantation Laboratory, Pathology and HUSLAB, University of Helsinki, Finland

作者信息：Can Hekim, Mette Ilander, Jun Yan, Erin Michaud, Richard Smykra

研究背景

达沙替尼是一种广谱酪氨酸激酶抑制剂(TKI)，已知在白血病治疗中通过动员淋巴细胞和激活细胞毒性细胞发挥免疫调节作用。然而，其在实体瘤中的免疫效应尚不明确。本研究旨在探究达沙替尼是否能在多种小鼠实体瘤模型(黑色素瘤、肉瘤、结肠癌、乳腺癌)中通过免疫调控抑制肿瘤生长，并解析其机制。重点关注达沙替尼对CD8+ T细胞浸润、调节性T细胞(Tregs)及外周免疫细胞动态的影响。

研究方法

研究采用四种同源小鼠实体瘤模型(B16.OVA黑色素瘤、1956肉瘤、MC38结肠癌、4T1乳腺癌)，通过每日灌胃给予达沙替尼(30 mg/kg)或对照溶剂。体外实验评估达沙替尼对肿瘤细胞的直接毒性(MTT法、集落形成实验)。免疫表型分析通过流式细胞术检测外周血及肿瘤组织中的淋巴细胞亚群(CD8+ T细胞、NK细胞、Tregs)，并结合CyTOF质谱技术对肿瘤浸润免疫细胞进行深度分型。通过抗体耗竭实验验证T/NK细胞在抗肿瘤中的作用。

实验结果

图1：达沙替尼剂量依赖性诱导外周白细胞快速动员

单次给药后1小时，达沙替尼(50-150 mg/kg)显著增加外周血白细胞(WBC)及淋巴细胞比例(P<0.05)。在黑色素瘤模型中，30 mg/kg剂量组WBC增加5.36倍(对照组2.0倍，P=0.02)，表明达沙替尼可快速动员免疫细胞。

图2：达沙替尼无直接细胞毒性但抑制体内肿瘤生长体外实验显示达沙替尼(≤100 nM)对B16.OVA黑色素瘤细胞无直接杀伤作用(K562细胞敏感)，但体内显著抑制肿瘤体积(P=0.03)，提示其抗肿瘤效应依赖免疫调节。

图3：达沙替尼改变外周淋巴细胞表型

治疗第8天，达沙替尼组外周CD8+ T细胞比例升高(16.6% vs. 13.2%，P=0.001)，NK细胞比例及活化标志物CD107a+ NK细胞增加(P=0.08)，显示其对免疫细胞表型的动态调控。

图4：达沙替尼促进CD8+ T细胞肿瘤浸润并依赖T/NK细胞功能

免疫组化显示达沙替尼组肿瘤内CD8+ T细胞数量显著增加(中位数17 vs. 4，P=0.03)，且T/NK细胞耗竭后其抗肿瘤效应完全消失(P<0.006)。

图5：达沙替尼广谱抑制实体瘤生长

在肉瘤、结肠癌及乳腺癌模型中，达沙替尼均显著抑制肿瘤生长(P<0.001)，体外仅高浓度(500 nM)对部分肿瘤细胞有轻微毒性，进一步支持其免疫依赖性。

图6：CyTOF揭示肿瘤内Tregs减少

达沙替尼治疗组肿瘤内FoxP3+ Tregs比例显著下降(P<0.05)，CD4+ T细胞减少，单核细胞比例增加，提示其通过重塑肿瘤免疫微环境发挥疗效。

研究结论

达沙替尼通过免疫调节显著抑制多种实体瘤生长，其机制包括：快速动员外周血CD8+ T细胞并降低CD4/CD8比值，增加肿瘤内CD8+ T细胞浸润，同时减少调节性T细胞(Tregs)比例;T/NK细胞耗竭实验证实其抗肿瘤作用完全依赖于免疫系统。在黑色素瘤、肉瘤、结肠癌及乳腺癌模型中均观察到一致效果，且体外实验显示达沙替尼无直接细胞毒性。该研究支持达沙替尼作为免疫调节剂与其他疗法联用的潜力。