含三方基序蛋白65（TRIM65）通过靶向HNF4α抑制乙型肝炎病毒转录

乙肝病毒(HBV)感染是全球主要公共卫生问题之一，有超过2.5亿人慢性感染HBV。而其中有超三分之一的人口集中在我国，人数接近1亿人。NTCP工具细胞，特别是外源表达NTCP的肝癌细胞系如HepG2-NTCP和Huh7-NTCP，因其易操作、短周期、重现性佳的特点，在乙肝病毒(HBV)研究中扮演着至关重要的角色。这些细胞模型能够有效模拟HBV的感染过程，为研究HBV的生命周期、宿主限制因子、病毒复制以及药物筛选提供了一个强大而便捷的体外平台。它们不仅有助于揭示HBV感染的分子机制，如DDX3作为宿主限制因子阻碍cccDNA转录，GPC5作为附着因子在感染入胞过程中的作用，还能通过直接与NTCP相互作用或下调NTCP表达来筛选和验证抗病毒药物的活性，例如环孢菌素A及其衍生物、雷帕霉素及其衍生物等。此外，这些工具细胞还促进了对HBV宿主特异性分子的发现，为发展支持HBV感染的小动物模型提供了可能，这对于乙肝相关研究和药物开发具有重大意义。

基本信息

英文标题：Novel function of SART1 in HNF4a transcriptional regulation contributes to its antiviral role during HBV infection

中文标题：含三方基序蛋白65(TRIM65)通过靶向HNF4α抑制乙型肝炎病毒转录

发表期刊：《Journal of Hepatology》

影响因子：25.7

作者单位：

1.State Key Laboratory of Virology and Hubei Province Key Laboratory of Allergy and Immunology, Institute of Medical Virology, School of Basic Medical Sciences, Wuhan University, Wuhan, China

2.Department of Clinical Laboratory, Renmin Hospital of Wuhan University, Wuhan, China

3.State Key Laboratory of Virology, Wuhan Institute of Virology, Chinese Academy of Sciences, Wuhan, China

作者信息：

Yan Teng, Zaichao Xu, Kaitao Zhao

研究背景

乙型肝炎病毒(HBV)感染仍是全球重大健康威胁，其共价闭合环状DNA(cccDNA)的持续存在是治愈慢性乙肝的主要障碍。宿主因子SART1此前被报道通过调控干扰素刺激基因(ISGs)抑制丙型肝炎病毒(HCV)，但其在HBV感染中的作用尚不明确。本研究旨在揭示SART1是否通过调控HBV关键转录因子影响cccDNA转录，从而抑制HBV复制。研究聚焦于SART1对肝细胞核因子4α(HNF4α)的调控机制，以探索新型抗HBV治疗靶点。

研究方法

SART1通过直接结合HNF4α的P1启动子区域(-309至-288位点)，抑制其转录活性，从而降低HBV核心启动子驱动的cccDNA转录。该作用独立于干扰素信号通路，且在小鼠模型中证实SART1过表达显著抑制HBV复制。研究首次揭示SART1通过双重机制(调控ISGs和HNF4α)抗病毒，为靶向宿主因子治疗慢性乙肝提供了新思路。

实验结果

图1：SART1敲低增强HBV复制而过表达抑制病毒活性

通过shRNA敲低SART1后，HepG2-NTCP细胞中HBV RNA(2.5倍↑)、HBsAg(3.1倍↑)及病毒颗粒(4倍↑)显著增加(p<0.01);反之，过表达SART1使HBV RNA下降70%(p<0.001)，但cccDNA水平未受影响，表明SART1通过调控转录而非cccDNA稳定性抑制病毒。

图2：SART1抗HBV作用独立于干扰素通路

在JAK抑制剂(Tofacitinib)处理或IFNAR2敲除的HepG2细胞中，SART1过表达仍显著降低HBV RNA(p<0.01)，且干扰素标志基因(MX1、ISG15)未上调，证实其抗病毒机制不依赖经典干扰素信号。

图3：SART1特异性抑制HBV核心启动子活性

荧光素酶报告系统显示，SART1过表达使HBV核心启动子活性下降65%(p<0.001)，但对SP1或AP1驱动的启动子无影响。ChIP实验证实SART1未直接结合HBV cccDNA，提示其通过宿主因子间接调控。

图4：SART1抑制HNF4α与cccDNA结合

ChIP-qPCR显示，SART1过表达使HNF4α与cccDNA的结合减少60%(p<0.01)，而突变HNF4α结合位点或过表达HNF4α可完全逆转SART1的抗病毒效应，证明HNF4α是SART1的关键靶点。

图5：小鼠模型中验证SART1体内抗病毒效果

AAV-HBV感染小鼠中，肝脏过表达SART1使血清HBsAg降低80%(p<0.001)，肝组织HBV DNA减少2个对数级;shSart1处理则显著促进病毒复制(HBsAg↑2倍，p<0.01)，证实SART1在体内的双重调控作用。

图6：SART1直接结合HNF4α启动子抑制其转录

双荧光素酶报告和EMSA实验证实，SART1通过结合HNF4α P1启动子近端区域(-309至-288)抑制其活性(荧光素酶活性下降70%，p<0.001)。突变该结合位点后，SART1的抑制作用完全消失，明确其直接调控机制。

研究结论

SART1通过直接结合HNF4α的P1启动子区域(-309至-288位点)，抑制其转录活性，从而降低HBV核心启动子驱动的cccDNA转录。该作用独立于干扰素信号通路，且在小鼠模型中证实SART1过表达显著抑制HBV复制。研究首次揭示SART1通过双重机制(调控ISGs和HNF4α)抗病毒，为靶向宿主因子治疗慢性乙肝提供了新思路。