RERE-AS1：乳腺癌免疫调节与治疗响应的关键调控因子

研究背景

乳腺癌是全球女性高发恶性肿瘤，死亡率高且晚期预后差，免疫治疗虽为部分患者带来希望，但存在响应率有限、缺乏有效预测标志物等问题。lncRNA 在肿瘤发生、免疫微环境调控中发挥关键作用，而 RERE-AS1 在乳腺癌中的功能与机制尚未明确。解析其生物学作用，可为乳腺癌精准治疗提供新的分子靶点与理论依据。

来自中国永州市中心医院、南华大学附属第一医院的团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》上发表了题为RERE‑AS1 as a regulator of immune modulation and therapeutic response in breast cancer的研究，通过生物信息学分析与体内外实验，证实 RERE-AS1 在乳腺癌中低表达且与不良预后相关;其过表达可抑制肿瘤恶性表型，增强免疫细胞浸润与细胞毒性，提升抗 PD-1 治疗效果，明确其作为预后标志物和治疗靶点的潜力。

实验方法

1.数据挖掘与临床关联分析：下载 TCGA、GTEx 数据库的乳腺癌转录组与临床数据，分析 RERE-AS1 表达差异;通过 Kaplan-Meier 生存分析、ROC 曲线、Cox 回归模型评估其预后与诊断价值;关联分析其与肿瘤分期、分子亚型等临床特征的关系。

2.细胞模型构建与功能验证：在 MCF-7、T47D 乳腺癌细胞中，通过慢病毒介导构建 RERE-AS1 敲低(sh-RERE-AS1)和 CRISPR-Cas9 介导的过表达(sg-RERE-AS1/KI)模型;采用 CCK-8、Transwell、流式细胞术分别检测细胞增殖、迁移侵袭、细胞周期与凋亡。

3.免疫微环境调控实验：建立肿瘤细胞与免疫细胞(NK 细胞、B 细胞、巨噬细胞、树突状细胞)共培养体系;通过 Transwell 检测免疫细胞迁移能力，LDH 释放实验评估免疫细胞毒性，ELISA 检测 IFN-γ、TNF-α、IL-10 等细胞因子分泌，流式细胞术分析免疫细胞亚型比例。

4.体内动物实验：构建人源化 NSG 小鼠异种移植模型，分为 sh-NC/IgG、sh-NC/αPD-1、sh-RERE-AS1/IgG、sh-RERE-AS1/αPD-1、sg-NC/IgG、sg-NC/αPD-1、sg-RERE-AS1/IgG、sg-RERE-AS1/αPD-1 组;监测肿瘤生长，通过免疫组化(Ki-67)、流式细胞术检测肿瘤细胞周期与凋亡。

5.分子机制分析：通过 GO/KEGG 富集分析、GSEA 明确 RERE-AS1 相关信号通路;采用 ssGSEA、ESTIMATE 算法评估其与免疫细胞浸润、肿瘤微环境评分的关联;Western blot 检测 E - 钙粘蛋白、MMP2、Cyclin 家族、凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax/Bcl-2)表达。

关键结果

图 1：RERE-AS1 在乳腺癌中低表达且定位于细胞质

TCGA 与 GTEx 数据库分析显示，RERE-AS1 在乳腺癌组织中的表达显著低于正常乳腺组织(p=2.9×10⁻²⁷)，配对组织分析(112 对)进一步验证该差异(p=1.1×10⁻¹⁶);RNA-FISH 实验证实，RERE-AS1 主要定位于乳腺癌细胞细胞质，且肿瘤组织中荧光信号显著弱于正常组织(p=0.03)。

图 2：RERE-AS1 表达与乳腺癌临床特征密切相关

RERE-AS1 表达与 T 分期(p=1.1×10⁻³)、病理分期(p=1.6×10⁻³)、PR 状态(p=0.01)、HER2 状态(p=7.3×10⁻⁴)、分子亚型(p<0.05)、放疗状态(p=0.02)及组织学类型(p=6×10⁻¹⁴)显著相关;HER2 阳性患者中，高 RERE-AS1 表达组总生存期(OS)显著延长(HR=0.25，p=0.007)，而 HER2 阴性及 PR 分层亚组中无显著差异。

图 3：RERE-AS1 具有诊断与预后评估价值

Kaplan-Meier 分析显示，低 RERE-AS1 表达组 OS(HR=0.63，p=0.005)、无进展生存期(PFS，HR=0.64，p=0.009)、疾病特异性生存期(DSS，HR=0.49，p=0.001)均显著缩短;ROC 曲线显示其区分乳腺癌与正常组织的 AUC 达 0.808，在 T4 期患者中最高(AUC=0.899);nomogram 模型预测 OS 的 C 指数(0.760)优于 TNM 分期系统(0.698)，且在三阴性与 Luminal B 亚型中仍具有预后价值(p=0.006)。

图 4：RERE-AS1 相关基因富集于 RNA 剪接与免疫通路

GO 富集分析显示，RERE-AS1 相关基因主要参与前体 mRNA 结合、5' 剪接位点识别、snRNP 复合物形成等 RNA 加工过程;GSEA 分析表明，其关联基因富集于适应性免疫反应、抗原结合、抗原受体介导的信号通路、B 细胞激活等免疫相关通路，提示其可能通过调控免疫信号发挥作用。

图 5：RERE-AS1 表达与免疫细胞浸润正相关

ssGSEA 与 Spearman 相关性分析显示，RERE-AS1 高表达与活化树突状细胞(aDCs)、B 细胞、CD8⁺T 细胞、细胞毒性细胞、NK 细胞等免疫细胞浸润显著正相关;ESTIMATE 算法分析证实，高 RERE-AS1 表达组的基质评分(StromalScore)、免疫评分(ImmuneScore)及综合评分(ESTIMATEScore)均显著高于低表达组，提示其可重塑肿瘤免疫微环境。

图 6：RERE-AS1 抑制乳腺癌细胞恶性表型

CCK-8 实验显示，RERE-AS1 过表达显著降低 MCF-7、T47D 细胞增殖能力，敲低则促进增殖;Transwell 实验证实，RERE-AS1 过表达抑制细胞迁移与侵袭，敲低则增强;流式细胞术显示，过表达组 G₀/G₁期细胞比例升高、S 期比例降低(细胞周期阻滞)，凋亡率显著升高;Western blot 显示，过表达组 E - 钙粘蛋白、ZO-1、Cleaved Caspase-3、Bax 表达上调，N - 钙粘蛋白、MMP2、Cyclin 家族、Bcl-2 表达下调。

图 7：RERE-AS1 抑制肿瘤免疫逃逸

共培养实验显示，RERE-AS1 过表达可促进 NK 细胞、B 细胞、M1 巨噬细胞、树突状细胞迁移，减少 M2 巨噬细胞比例;LDH 释放实验证实，过表达组免疫细胞毒性显著增强;ELISA 显示，过表达组 IFN-γ、TNF-α 分泌升高，IL-10 分泌降低;敲低组则呈现相反趋势，提示 RERE-AS1 可增强抗肿瘤免疫应答，抑制免疫逃逸。

图 8：RERE-AS1 增强乳腺癌对 PD-1 抑制剂的敏感性

异种移植模型显示，RERE-AS1 过表达组肿瘤生长速度与重量显著低于对照组，且联合 PD-1 抑制剂后，肿瘤体积进一步缩小(p<0.05);免疫组化显示，过表达 + PD-1 抑制剂组 Ki-67 表达显著降低;流式细胞术证实，该组 G₀/G₁期阻滞更明显，凋亡率更高;而 RERE-AS1 敲低组对 PD-1 抑制剂无明显响应，证实 RERE-AS1 可提升免疫治疗敏感性。

全文总结

本研究通过多维度分析证实，lncRNA RERE-AS1 在乳腺癌组织中显著低表达，且与肿瘤分期、分子亚型等临床特征及不良预后密切相关，是独立预后标志物。其生物学功能上，RERE-AS1 作为抑癌 lncRNA，可通过调控细胞周期相关蛋白与凋亡通路，抑制乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭，诱导细胞周期阻滞与凋亡;同时通过促进抗肿瘤免疫细胞浸润、增强免疫细胞毒性、调节细胞因子分泌，重塑 “热” 肿瘤免疫微环境，抑制免疫逃逸。体内实验进一步证实，RERE-AS1 过表达可显著增强乳腺癌对 PD-1 抑制剂的治疗响应。该研究首次系统阐明了 RERE-AS1 在乳腺癌中的功能与机制，为乳腺癌的预后评估、免疫治疗疗效预测提供了新型分子标志物，也为开发靶向 RERE-AS1 的联合治疗策略奠定了基础。