miR-889-3p靶向BMPR2通过JNK/MAPK/ERK信号通路促进视网膜母细胞瘤进展！

检测细胞株广泛应用于药物发现、抗体开发、基因研究和毒性评估等领域。基于D-Luciferase的报告基因细胞株及其荧光素酶检测方法在药物初筛/复筛、表位竞争、药物生物活性检测等多方面展现了广泛的应用潜力。报告基因法已被药典收录，为国家认可的检测方法。报告基因细胞株多用于监测特定的生物过程或信号通路。

HEK293细胞因子报告基因细胞株是以HEK293为工具细胞，采用慢病毒感染的方式构建，不仅能够稳定表达细胞因子受体蛋白，并且能够表达荧光素酶报告基因，是基于转录因子信号通路构建的荧光素酶报告基因细胞系。当细胞因子结合受体蛋白后，细胞因子与受体蛋白相互作用，激活转录因子信号通路，从而激活荧光素酶的表达。荧光信号的强弱即代表信号通路的激活效果，因此可用于相关药物的体外效果评价，筛选抗体以及筛选信号通路的激活剂或抑制剂。

基本信息

英文标题：miR‑889‑3p targeting BMPR2 promotes the development of retinoblastoma via JNK/MAPK/ ERK signaling

中文标题：miR-889-3p 靶向 BMPR2 通过 JNK/MAPK/ERK 信号通路促进视网膜母细胞瘤进展

发表期刊：《Scientific Reports》

影响因子：3.9

作者单位：

1.Department of Ophthalmology, Wuhan No. 1 Hospital, No. 215, Zhongshan Avenue, Qiaokou District, Wuhan 430022, Hubei, China.

2.These authors contributed equally: Yuan Gao and Pei Du.

作者信息：

第一作者：Yuan Gao、Pei Du(共同第一作者)

通讯作者：Yuan Gao

研究背景

视网膜母细胞瘤(Rb)是婴幼儿最常见的眼内恶性肿瘤，病情进展迅速、晚期患者预后极差，亟需挖掘分子诊疗靶点;微小 RNA(miRNAs)是肿瘤发生发展的关键调控因子，miR-889-3p 在不同肿瘤中功能具有异质性，其在 Rb 中的作用尚未明确;BMPR2 参与肿瘤细胞增殖、转移与凋亡调控，且可介导 JNK/MAPK/ERK 信号通路活化，但该分子在 Rb 中对上述通路的调控机制仍未被阐明。

研究方法

本研究收集 37 例 Rb 组织及配对正常视网膜组织，培养 SO-RB50、Y79、HXO-RB44 三种 Rb 细胞系与正常视网膜上皮细胞 ARPE-19，通过脂质体转染构建 miR-889-3p 过表达 / 沉默、BMPR2 沉默及共转染模型，采用 qRT-PCR、Western blot 检测基因与蛋白表达水平，CCK-8 实验、划痕实验分别检测细胞增殖与迁移能力，RNA pull-down、双荧光素酶报告实验验证 miR-889-3p 与 BMPR2 的靶向结合关系，裸鼠异种移植瘤实验探究 miR-889-3p 对体内肿瘤生长的影响，最后通过 Pearson 相关性分析、单因素方差分析等完成统计学检验。

实验结果

图1：miR-889-3p 调控 JNK/MAPK/ERK 通路促进 Rb 细胞增殖与迁移

miR-889-3p 在 Rb 组织及 SO-RB50、Y79、HXO-RB44 细胞中表达显著高于正常组织与 ARPE-19 正常细胞，沉默 miR-889-3p 可显著降低 HXO-RB44、SO-RB50 细胞的活力与迁移能力，同时下调 JNK、p38 MAPK、ERK1/2 的磷酸化水平，直接证明 miR-889-3p 通过调控 JNK/MAPK/ERK 通路在体外推动 Rb 细胞恶性增殖与迁移。

图2：miR-889-3p 在体内加速 Rb 肿瘤生长

裸鼠异种移植瘤实验结果显示，与阴性对照组相比，注射 miR-889-3p 拮抗剂的小鼠肿瘤生长速度、体积及重量均显著下降，明确沉默 miR-889-3p 可在体内抑制 Rb 成瘤，证实 miR-889-3p 对 Rb 体内肿瘤进展的促进作用。

图3：miR-889-3p 直接靶向结合 BMPR2

经生物信息学筛选、RNA pull-down 及双荧光素酶报告实验验证，miR-889-3p 可直接结合 BMPR2 的 3'UTR 区域;BMPR2 在 Rb 组织和细胞中表达显著降低，且与 miR-889-3p 表达呈显著负相关，最终确定 BMPR2 是 miR-889-3p 的直接下游靶基因。

图4：BMPR2 介导 miR-889-3p 对 Rb 细胞的调控效应

回复实验表明，沉默 BMPR2 可逆转 miR-889-3p 抑制剂对 Rb 细胞增殖、迁移的抑制作用，同时恢复 JNK/MAPK/ERK 通路关键蛋白的磷酸化水平，证实 miR-889-3p 通过负调控 BMPR2 激活 JNK/MAPK/ERK 通路，进而促进 Rb 细胞恶性生物学行为。

研究结论

本研究证实 miR-889-3p 在视网膜母细胞瘤组织和细胞中呈高表达，作为癌基因通过直接靶向抑制 BMPR2 表达，激活 JNK/MAPK/ERK 信号通路，在体外促进 Rb 细胞增殖与迁移、在体内加速肿瘤生长，揭示了miR-889-3p/BMPR2 轴在 Rb 进展中的核心调控机制，为视网膜母细胞瘤的分子诊断与靶向治疗提供了全新潜在靶点。