人源化抗 CD147 抗体 HuM6-1B9 通过 ADCC 克服 TNBC NK 细胞抗性

三阴性乳腺癌(TNBC)因无 ER、PR 和 HER2 表达，治疗选项少且预后差，其高表达 MHC-I(NK 细胞抑制配体)常导致 NK 介导的抗肿瘤效应受限。清迈大学团队在《Cancer Immunology, Immunotherapy》上发表题为Overcoming NK cell resistance in triple‑negative breast cancer via adcc with a humanized anti‑CD147 antibody的研究显示，人源化抗 CD147 抗体 HuM6-1B9 对 TNBC 细胞(MDA-MB-231、HCC38)亲和力高(KD 分别为 4.982 nM、4.523 nM)，可通过抗体依赖的细胞毒性(ADCC)增强 PBMC 和 NK 细胞对 TNBC 的杀伤 ——3D 模型中降低肿瘤活力，NK 对两细胞系 cytotoxicity 达 50% 和 70%;同时促进 NK 脱颗粒、IFN-γ 分泌及肿瘤凋亡，且不增强 TNBC 迁移侵袭，为 TNBC 免疫治疗提供安全候选药。

实验方法

1. 关键材料

细胞：TNBC 细胞(MDA-MB-231、HCC38)、其他亚型乳腺癌细胞(MCF7、MDA-MB-453);HEK293T 细胞用于抗体表达。

试剂：HuM6-1B9(实验室纯化)、CFSE(靶细胞标记)、PI(死细胞染色)、CD107a 抗体、IFN-γ ELISA 试剂盒、Matrigel(3D 建模)。

效应细胞：健康供体 PBMC(密度梯度分离)、原代 NK 细胞(磁珠分离，CD3⁻CD56⁺验证纯度)。

2. 核心流程

2.1 HuM6-1B9 制备与亲和力检测

转染 HEK293T 细胞表达 HuM6-1B9，Protein G 纯化;流式滴定不同浓度抗体，计算解离常数(KD)。

2.2 ADCC 活性评估

3D 模型：MDA-MB-231 与 Matrigel 形成球状体，加 PBMC 和 HuM6-1B9，测活力及死细胞比例。

NK 介导 ADCC：CFSE 标记靶细胞，与 NK 细胞(效靶比 3:1)、HuM6-1B9 共培养，流式测 CFSE⁺PI⁺细胞比例。

2.3 NK 功能与肿瘤凋亡验证

流式检测 NK 细胞 CD107a 脱颗粒比例，ELISA 测 IFN-γ 分泌;活细胞成像定量 caspase-3/7 阳性凋亡细胞。

2.4 机制与安全性验证

抗 CD16 抗体封闭 NK 细胞 CD16，验证 ADCC 的 FcγRIII 依赖性;流式测 HuM6-1B9 对 TNBC 迁移侵袭的影响。

关键结果

图1：乳腺癌细胞表面标志物表达谱

该图通过流式分析标志物差异：CD147 在所有细胞系中高表达(HCC38 最高);CD146 仅在 TNBC 细胞中检测到;CD73 在 MDA-MB-231 中最高;MHC-I(NK 抑制配体)在 TNBC 中显著高于其他亚型。明确 CD147 是跨亚型靶点，TNBC 高表达 MHC-I 可能致 NK 抗性。

图2：HuM6-1B9 与乳腺癌细胞的结合亲和力

该图计算 KD 值：MCF7(5.842 nM)、MDA-MB-453(7.910 nM)、MDA-MB-231(4.982 nM)、HCC38(4.523 nM)，TNBC 细胞结合亲和力最高，证实 HuM6-1B9 对 TNBC 的高靶向性。

图3：HuM6-1B9 增强 PBMC 对 TNBC 球状体的 ADCC

该图验证 3D 模型效果：HuM6-1B9 组球状体活力显著降低，红(死细胞)/ 绿(活细胞)比值升高，共聚焦可见大量死细胞，表明其在模拟体内环境中仍能增强 PBMC 杀伤。

图4：HuM6-1B9 增强 NK 细胞对乳腺癌细胞的 cytotoxicity

该图对比杀伤效果：HuM6-1B9 组 cytotoxicity 显著高于对照组;MDA-MB-231 基线 NK 杀伤率仅～10%，处理后升至 50%;HCC38 达 70%，证实可克服 TNBC 的 NK 抗性。

图5：HuM6-1B9 促进 NK 细胞脱颗粒与 IFN-γ 分泌

该图解析 NK 激活：HuM6-1B9 组 CD56⁺CD107a⁺脱颗粒 NK 细胞比例升高，上清 IFN-γ 浓度显著增加，单独抗体无分泌，表明其通过激活 NK 功能增强 ADCC。

图6：HuM6-1B9 诱导 NK 介导的 TNBC 凋亡

该图观察凋亡：HuM6-1B9 组 caspase-3/7 阳性细胞随时间增多，10 μg/mL 处理 6 h 凋亡率达 12%，证实 NK 杀伤通过诱导肿瘤凋亡实现。

图7：HuM6-1B9 介导 ADCC 的机制与协同效应

该图验证机制：HuM6-1B9 不影响 MIC-A/B 表达;抗 CD16 封闭后 ADCC 显著降低(FcγRIII 依赖);与抗 PD-1 抗体联用无额外增效(静止 NK 细胞 PD-1 低)。

图8：HuM6-1B9 不影响 TNBC 的迁移与侵袭

该图评估安全性：1 μg/mL 和 10 μg/mL HuM6-1B9 组，TNBC 迁移、侵袭细胞比例与对照组无差异，证实不促进转移，安全性良好。

全文总结

本研究证实 HuM6-1B9 的核心价值：对 TNBC 靶向性强(纳米级 KD)，通过 FcγRIII 依赖的 ADCC 增强 PBMC/NK 细胞杀伤，克服 TNBC 的 NK 抗性，且不促进转移;局限性为缺乏 CD147 敲除细胞验证靶点特异性及体内模型验证。未来需通过 PDX 模型进一步验证，探索与其他免疫疗法的协同潜力，为 TNBC 治疗提供新策略。