hESC/iPSC细胞铺板工作液

产品简介

hESC/iPSC铺板工作液是使用VTN 包被蛋白(Vitronectin)配制的即用型工作液，VTN是一种成分确定的，无异源成分的细胞基质，能够支持人类胚胎干细胞(human embryonic stem cell, hESC)以及人类诱导多能干细胞(human induced pluripotent stem cell, hiPSC)的生长和分化，可以与多能干细胞完全培养基一起使用，用于hESC/iPSC体外无饲养层培养。

产品信息

VTN纯度≥95% 内毒素含量≤25 EU/mg

储存条件

基础培养基2~8℃，VTN-20℃;2~8℃解冻，禁止反复冻融。

VTN使用说明

1：VTN 的推荐包被浓度为 1 ug/cm2，以 6 孔板为例，6 孔板每孔面积 10 cm2，则需要使用 10 ug VTN 包被蛋白。

不同培养容器VTN工作液推荐用量

容器孔面积VTN用量

6孔板10 cm2/孔10 ug

60-mm培养皿20 cm220 ug

100-mm培养皿60 cm260 ug

T-25培养瓶25 cm225 ug

2：举例，一块 6 孔板总共有 60 cm2，包被需要 60 ug VTN ，即 120 ul (500 ug/ml)，可以将 VTN 分装成 120 uL(60 ug)/管，于 -20℃保存，每次使用时候取 1 管 VTN (120 ul，60 ug)，用基础培养基稀释成工作液，即可包被 1 块 6 孔板。

VTN分装

以分装120ul/每管为例，可根据实验要求和使用说明进行分装。

1：VTN于4℃冰箱过夜解冻。

2：提前准备无菌枪头，EP管于-20℃冰箱预冷。

3：将解冻的VTN与EP管置于冰上放入生物安全柜。

4：用预冷的枪头将VTN按120ul/每管分装至EP管中，放入-20℃冰箱保存。

工作液配制与培养板包被

以包被 6 孔板为例，操作程序同样适用于其他培养容器。

1. 取 1 管分装好的VTN(120 ul，60 ug)，4℃冰箱解冻。

2. 准备 1 个 15 ml离心管，4℃冰箱取基础培养基分装出9 mL，立即将解冻的 VTN 加入冷的基础培养基中，轻柔混匀稀释的 VTN 10-20次，不要涡旋震荡。

3. 立即使用配制的工作液进行包被，按照1.5mL/孔用量来包被 6孔板。

4. 轻轻晃动培养皿，使稀释后的工作液均匀地铺在皿底表面。

5. 室温(15~25℃)静置至少 1 小时后使用。 TIPS：如不立即使用，密封培养皿以防止工作液蒸发。建议 4℃条件保存包被后的培养皿，1 周内使用。使用时将培养皿置于室温(15 ~25℃)环境， 复温 10~30 分钟，才可用于下一步实验。

6. 使用时，将培养皿倾斜，用移液管或枪头吸尽工作液即可。确保包被后的培养皿底部表面无划痕，也无需额外加相关溶液洗涤。