细胞株购买:18046200267 厦门爱恪信生物细胞株引进ATCC,DSMZ,JCRB,ECACC,CCTCC,昆明细胞库等保藏中心,正规来源,细胞准确

hESC(H9)人胚胎干细胞(STR鉴定报告)

货号:IM-H199

价格:
 ¥5000

规格:

形态:贴壁生长,呈克隆状   培养基:H9人胚胎干细胞专用培养基

传代:1:2至1:3,每周 3次    培养环境: 气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃

货期:现货,当天或者隔天发货,冻存发货

hESC(H9)细胞株来源于人胚胎干细胞,贴壁生长,呈克隆状,可在hESC/iPSC完全培养基中快速增殖

H9人胚胎干细胞培养说明书

产品描述

背景简介

hESC(H9)细胞株来源于人胚胎干细胞,贴壁生长,呈克隆状,可在hESC/iPSC完全培养基中快速增殖,而边缘分化的细胞则在该培养基中生长较慢,从而选择性扩增并获得高纯度人多能干细胞。包装规格为1mL冻存管,含量为>1x106个/mL,且支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性。人胚胎干细胞H9,曾用名WA09。每支细胞可复苏至一个T25,3至4天后会形成30至40个克隆。

细胞产品信息

细胞名称hESC(H9)人胚胎干细胞
细胞别称hESC; HT clone H9; HT(H9); H 9; H-9; 人胚胎干细胞
种属来源
组织来源人胚胎干细胞
生长特性贴壁生长
细胞形态克隆状细胞样
STR位点Amelogenin:X,Y;CSF1PO:11;D2S1338:20,25;D3S1358:15,16;D5S818:11;D6S1043:12;D7S820:8,11;D8S1179:12,14;D12S391:18,23;D13S317:8,12;D16S539:11,12;D18S51:18;D19S433:14;D21S11:30;FGA:21,25;PentaD:9;PentaE:13,15;TH01:8,9;TPOX:8,9;vWA:14,15
STR鉴定图片hESC(H9)人胚胎干细胞.jpg
细胞荧光检测

hESC(H9)人胚胎干细胞荧光检测图片

人胚胎干细胞H9培养鉴定实验报告下载

细胞代数 10代以内
细胞规格1x106cells/T25或1mL冻存管
支原体检测
保藏机构 中国科学院分子细胞科学卓越创新中心
培养基 H9人胚胎干细胞完全培养基
培养条件气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
冻存条件无血清冻存液,液氮储存

试剂准备

1)hESC/iPSC完全培养基配制(500 mL)

1. 在4℃条件下解冻hESC/iPSC Grouth Supplements A/B,勿在37℃培养箱/水浴锅解冻。

2. 参考表1在生物安全柜中,使用无菌移液管混匀下列成分配制成hESC/iPSC完全培养基,之后置于4℃储存,封口膜封好后2周内使用。

3. 有初培养需扩建的需求,建议先配置100 mL,保证2周内使用完毕。

表 1:hESC/iPSC完全培养基配置说明*

表 1:hESC/iPSC完全培养基配置说明*

可根据实际用量将hESC/iPSC Grouth Supplements A/B分装后冷冻保存。具体配置比例可参考表3的配置说明。 hESC/iPSC Grouth Supplements A/B冻融总次数不能超过2次。

2)Matrigel铺板(以货号为354277的Corning® Matrigel®包被6孔板为例)

A. 分装 Matrigel

1. 货号354277的Matrigel,操作说明中不标注蛋白浓度,而是以Dilution Factor表示,如某批次的推荐Dilution Factor为278 μL,则表明278 μL可包被4块6孔板,分装数量=5 mL /0.278=17.98。

2. 准备18个无菌1.5 mL EP管,标记Matrigel日期、操作人;1mL无菌吸头;EP管架,均置于-20℃冰箱中预冷1小时。

3. 将Matrigel放置4℃冰箱过夜解冻,当Matrigel完全解冻即可开始分装。

注:在解冻时,将Matrigel放置冰箱内侧角落,切勿放在靠近冰箱门附近。

4. 准备一个装满碎冰的冰盒,将解冻过的Matrigel、预冷的1.5 mL EP管及EP管架、1mL吸头放置于生物安全柜上。

5. 混匀Matrigel,无菌分装于各个1.5 mL EP管中,并置于冰上。当吸头被堵塞可能导致分装体积不准时需要更换吸头。

6. 将分装后的 Matrigel 置于-20℃冰箱中保存。

B. 铺板

1. 取36 mL冷藏DMEM/F12于50 mL离心管中,准备4个6孔板,标记Matrigel、批号、日期和操作人。

2. 1 mL无菌吸头置于-20℃冰箱中预冷1小时,取出一支冷冻的Matrigel(278μL)置于4℃冰箱解冻至完全化冻。

3. 准备一个装满碎冰的冰盒,将解冻过的Matrigel、预冷的1mL吸头放置于生物安全柜上。

4. 用预冷吸头向解冻过的Matrigel(278μL)加入1 mL冷的DMEM/F12并反复吹打解冻混匀。

5. 吸出已解冻混匀的Matrigel加入离心管中剩余的DMEM/F12,使用10 mL移液管再次反复吹打混匀。

6. 分装1.5 mL/孔于4个六孔板中,轻轻摇晃混匀。

7. 培养板置于室温1小时后即可使用,或置于4℃冷藏过夜,两周内使用。

细胞培养操作

1)复苏hESC/iPSC(以6孔板为例)

1. 将水浴锅预热至37℃;并将Matrigel包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(15~30℃)。

3. 取4 mL hESC/iPSC完全培养基,加入hESC/iPSC Supplement C终浓度为10uM,恢复至室温(15~30℃)。

注意:不要在37℃水浴锅中预温培养基。

4. 取出1支冷冻的细胞置于37℃水浴锅手持轻轻摇晃,2 min内解冻,肉眼观察细胞悬液内冰晶即将完全消失时取出。

5. 75%酒精无尘纸擦拭冻存管表面,转入生物安全柜;将细胞悬液移到事先准备好的15 mL 离心管中,随后缓慢逐滴加入10mL DMEM/F12,过程中轻柔晃动混匀细胞,160g离心5 min。 6. 吸弃上清,加入预温的2 mL的hESC/iPSC完全培养基+hESC/iPSC Supplement C制备细胞悬液,尽量避免吹打。

注:可留20 μL上清液,轻弹管底,使细胞悬浮液更均匀,避免成较大细胞团。

7. 吸除6孔板中1孔的Matrigel包被液,将细胞悬液按照2 mL/孔接种到1个孔中。

8. 水平十字摇匀三次,置于37℃,5% CO2浓度,饱和湿度的培养箱中,再次水平十字摇匀三次培养。

9. 18-24小时后换新的hESC/iPSC完全培养基,之后每天更换培养基。

注:在hESC培养过程中,如果细胞的汇合度超过50%,建议更换培养基时,培养基的体积增加至3-4mL/孔。

表2:hESC/iPSC传代&培养操作试剂推荐用量

培养容器(孔数)底面积DPBS (mL)EDTA传代工作液hPSC培养基*

培养容器(孔数)底面积DPBS (mL)EDTA传代工作液hPSC培养基*

2)传代hESC/iPSC(以6孔板为例)

1. 传代条件:① 细胞汇合度达85%左右(如图1(C-D)所示),一般情况下每3-4天传代;

② 细胞汇合度较低,生长密度分布不均匀。

注:即使克隆团较小、汇合度不足,也建议不要连续培养超过5天。

2. 传代比例:可根据细胞生长状态和实验需要按1:5~1:12的比例进行传代,如果细胞正常,克隆团汇合度85%,大小均匀(如图1(C-D)所示),建议按照1:8进行传代,如果密度偏低,则可降低传代比例;密度偏高,则增加传代比例。

注:1:8传代就是1个孔瓶传8个孔(以6孔板为例)。

3. 将 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(~25℃)。

4. 根据传代接种的孔数准备2 mL/孔的hESC/iPSC完全培养基,加入hESC/iPSC Supplement C终浓度为10uM,恢复至室温(~25℃)。

5. 将 Matrigel 包被的6孔板,提前放置生物安全柜中约1小时恢复至室温(~25℃)。

6. 将孔内培养基吸取,加入2 mL/孔的DPBS(不含钙镁),轻轻摇晃并吸取。

7. 加入2 mL/孔的 hESC/iPSC Passage Solution使溶液完全覆盖孔底。

8. 置于37℃培养箱中孵育5-6 min。

注:① 消化5-6 min后镜下观察细胞变化,当大部分细胞变亮变圆,且细胞尚未脱离基质或漂起时即可终止消化,若大部分细胞仍未变亮,则需要延长消化时间;

② 保持6孔板与培养箱金属隔板直接接触,使6孔板受热均匀,不要叠放。

hESC/iPSC完全培养基连续培养hESC细胞形态图

图1. hESC/iPSC完全培养基连续培养hESC细胞形态图:(A)和(B)分别为hESC细胞培养第2和4天时低倍镜hESC培养形态图示,(C)和(D)为培养至第2和4天时的高倍镜hESC培养形态图。

9. 消化结束后轻轻地将细胞培养板拿回生物安全柜,避免震荡摇晃细胞,倾斜并吸除hESC/iPSC Passage Solution。

10. 及时加入2 mL/孔预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C,水平十字摇晃6孔板使细胞脱离基质。

消化hESC细胞不同时间形态图

注:① 加hESC/iPSC完全培养基 + hESC/iPSC Supplement C时,可轻柔吹打细胞1-2次,不能超过2次,避免反复吹打;有部分细胞(10%~15%)未脱离基质是正常现象,若有大量细胞未脱离则需延长消化时间(< 10min)。

图2:消化hESC细胞不同时间形态图:(A)消化5 min低倍镜hESC培养的的形态图;(B)消化6 min低倍镜hESC培养的的形态图。

② hESC细胞不能长时间处于hESC/iPSC Passage Solution(<15 min),所以收集接种细胞时操作必须快速,以及最好一次操作不要超过4孔(六孔板)。

11. 吸取6孔板中的Matrigel溶液,加入预温的hESC/iPSC完全培养基+ hESC/iPSC Supplement C 2 mL/孔。

12. 在6孔板上标记细胞名称、代次、传代比例、日期、操作人。将步骤9获得的细胞悬液轻轻摇匀,按预先设定的传代比例均匀分配于孔板中。

注:为了铺板均匀并降低对细胞的损伤,可以将步骤8获得的细胞悬液收集至2mL离心管,轻柔颠倒混匀细胞1-2次;再按照传代比例接种。

13. 接种后,水平十字摇匀6孔板三次,置于37℃,5% CO2浓度,饱和湿度的培养箱中, 再次水平十字摇匀6孔板三次,培养过夜。

14. 18-24小时后更换新hESC/iPSC完全培养基,此后每天换液,4-5天后继续传代/冻存。

3)冻存hESC/iPSC(以6孔板为例)

1. 当细胞汇合度达85%左右(如图1(C-D)所示)可收获冻存,一般6孔板每孔可冻存1管。

2. 准备相应数量的1.5/2 mL冻存管,标记细胞名称、代次(P#)、日期、操作人。

3. 取出4℃冰箱中的 hESC/iPSC Cryopreservation Solution,置于室温预温,使用前注意摇匀。

4. 吸取上清液,加入2 mL/孔的DPBS(不含钙镁),轻轻摇晃数次,再吸取。

5. 加入2 mL/孔的hESC/iPSC Passage Solution,将细胞置于37℃培养箱中,计时5-6 min(可参考“六、传代hESC/iPSC”步骤)。

6. 消化结束,轻轻取出培养板,吸取hESC/iPSC Passage Solution。

7. 摇匀预温的hESC/iPSC Cryopreservation Solution,每孔加入1 mL冻存液,轻柔吹打,水平十字摇匀3次,随后吸取细胞悬液加入1.5/2 mL冻存管中。

8. 将细胞置于梯度程序降温盒中,并置-80℃冰箱中过夜,次日转入液氮罐中长期保存。

收货注意事项

1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,干冰运输的细胞检查干冰是否完全挥发,细胞是否解冻,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等,确保细胞培养条件一致,若由于培养条件不一致而导致细胞出现问题,责任由客户自行承担。

3. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。

4. 建议客户复苏细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态,便于和我司技术部沟通交流。由于运输的原因,细胞会出现不稳定的情况,请及时和我们联系,告知细胞的具体情况,以便我们的技术人员跟踪回访直至问题解决。

5. 该细胞仅供科研使用。

人胚胎干细胞hESC H9细胞文献溯源

2000年始,迄今为止,关于hESC(H9)人胚胎干细胞的文献有340篇。

人胚胎干细胞hESC H9细胞文献溯源图1

人胚胎干细胞hESC H9细胞文献溯源图2

在pubmed数据库中用“human embryonic stem cells H9”搜索该关键词,第一篇为2000年M Amit 在“Clonally derived human embryonic stem cell lines maintain pluripotency and proliferative potential for prolonged periods of culture”。

H9人胚胎干细胞应用领域

研究人员可以使用H9细胞来建立帕金森病的细胞模型。例如,通过向H9细胞中引入导致帕金森病的特定基因突变,研究人员可以观察到与帕金森病相关的细胞变化,如多巴胺能神经元的死亡。

制药公司可以使用H9细胞来评估新药对特定疾病的影响。例如,通过向H9细胞中加入某种药物,研究人员可以观察药物是否能够阻止或逆转疾病相关的细胞变化。

在骨骼组织工程研究中,研究人员可以将H9细胞定向分化为成骨细胞,然后将这些细胞种植在生物材料上,以构建新的骨骼组织。

在心脏组织工程中,研究人员可以将H9细胞定向分化为心肌细胞,然后将这些心肌细胞种植在心脏补丁上,以修复受损的心脏组织。

研究人员可以使用CRISPR/Cas9技术对H9细胞进行基因编辑,以研究特定基因在疾病发生中的作用,或开发治疗遗传性疾病的策略。

通过基因编辑,研究人员可以纠正导致疾病的基因突变,然后将这些编辑后的细胞用于治疗。

hESC H9人胚胎干细胞标志物

人胚胎干细胞(hESC,H9)的标志物包括Oct-4、Sox-2、Nanog、Fragilis、Tra-1-81、Tra-1-60、SSEA-3、SSEA-4、Trop-1和SPARC等。这些标志物对于识别和研究hESC(H9)胚胎干细胞至关重要。


今日产品推荐

细胞保藏机构查询

XhESC(H9)人胚胎干细胞(STR鉴定报告)-ESC/IPSC系列-ATCC细胞库_原代动物细胞购买-细胞资源库平台

截屏,微信识别二维码

微信号:18046200267

(点击微信号复制,添加好友)

  打开微信

微信号已复制,请打开微信添加咨询详情!
在线客服
联系方式

公司电话

18046200267

微信二维码
线